Description
LZCap GG (3'Acm) est un analogue de cap1. Le produit est utilisé pour la transcription avec la séquence initiale de 5'GG3', et la structure naturelle cap1 est produite par le coiffage de la transcription Cap1.
Brevet américain approuvé.
Composants
| N° de chat. | Nom | Taille |
| 10686 | LZCap GG (3'Acm) (50 mM) | 100 μL |
| 1 ml |
Détails du produit
| Formule moléculaire | C35H48N16O25P4 (Acide libre) |
| Poids moléculaire | 1216.19 (Acide libre) |
| Concentration | 50± 3 mM |
| Pureté | HPLC ≥ 95 % |
Capuchon LZ Modèle d'ADN Design
Capuchon LZ GG(3'Acm) est approprié pour Initié par GG séquences. Comme montré dans le chiffre ci-dessous, le SP6 promoteur (souligné) suivi par la séquence GG peut fefficacement initié transcription.
Protocole
1. Composants de décongélation requis pour l'expérienceent sur glace.
2. Ajouter Eau sans RNase et NTP à tube à réaction.
3. Chaleur Capuchon LZ Aliquote GG(3'Acm) pour 15 min à 60°C. Refroidir à température ambiante pour 5 min.
4. Ajouter immédiatement Capuchon LZ GG (3'Acm) au tube et vortex à mélanger. Tourner brièvement à collecter liquide.
5. Ajouter Transcription 10x Tampon et vortex.
6. Ajouter Modèle d'ADN and SP6 Enzyme Mélanger.
7. Mélanger le préparé solution de réaction, essorage brièvement, et incuber à 37°C pour 2-3 heures. Si la transcription longueur est moins que 100nt, augmenter le temps de réaction à 4-8 h.
| Composant | Volume (μL) | Concentration finale |
| ARNase Eau gratuite | Jusqu'à 20 μL | / |
| ATP (100 mM) | 1 | 5 mM |
| Câble UTP (100 mM) | 1 | 5 mM |
| CTP (100 mM) | 1 | 5 mM |
| GTP (100 mM) | 0,2 | 1 mM |
| Capuchon LZ GG(3'Acm) (50 mM) | 1.6 | 4 mM |
| 10×Transcription Tampon | 2 | 1 × |
| Linéaire ADN | 1 μg | 50 ng/μL |
| SP6 Enzyme Mélanger | 2 | / |
| Volume final | 20 μL | |
Remarques:
1) Le SP6 enzyme nous mélangeons recommandé à utilisé est MEGAscript® Kit (AM1330).
2) Capuchon LZ GG(3'Acm) convient au vecteur de transcription du promoteur SP6 avec 5 séquences initiées par 'GG 3', lequel a besoin de être pris en compte lors de la construction du vecteur.
3) Le réactifs, consommables et conteneurs utilisé dans le expérience sont gratuit ouf ARNase contamination.
4) Il est recommandé à utiliser un linéarisé Température de l'ADNen retard pour la transcription.
5) Quand modifié les nucléotides étaient utilisé dans lieu de type sauvage nucléotides, le final concentrertion de le la réaction était inchangé.
6) Modifié N1-Me-pUTP peut être utilisé dans lieu de type sauvage UTP. Le modifié N1-Me-pUTP réduit la immunogénicité de ARNm. Henovcom peut aussi fournir modifié nucléotide N1-Me-pUTP (Chat. Non.: (HN1002).
7) Si le PCR procanal est utilisé comme la transcription initiation ADN modèle, le montant de ADN modèle peut être réduit par moitié.
Stockage
Ce produit peut être stocké à -25~-15 ℃ pendant deux ans.
Précautions
- Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter un équipement de protection individuelle (EPI), tel que des blouses de laboratoire et des gants jetables, lorsque vous utilisez ce produit.
- À usage de recherche uniquement.
Questions et réponses
1. Comment concevez-vous le LZCap ?
Les enzymes ont une reconnaissance relativement « spécifique » des substrats. Par conséquent, lors de la conception d'une nouvelle structure de coiffe, d'une part, nous avons besoin de nouvelles modifications structurelles à des fins de brevet, mais d'autre part, nous nous efforçons de maintenir autant que possible la similitude avec les structures naturelles/connues. La structure naturelle a un ribose 3' OH, qui peut être modifié (par exemple, méthylation). Sur la base de cette considération, nous avons choisi d'ajouter un carbone en position 3' pour la nouveauté du brevet, suivi d'un NH pour imiter la liaison hydrogène de OH, puis d'un groupe acétyle pour réduire la basicité de NH et améliorer sa capacité de liaison hydrogène. LzCap est meilleur que le méthylatecasquette naturelle ed, probablement en raison d'une augmentation des liaisons hydrogène. Comparé aux groupes méthyle et méthoxy, le groupe amino acétyl peut également augmenter les interactions de van der Waals entre le substrat (cap) et le facteur initiateur (enzyme).
2.Le groupe amino acétyl est-il stable ?
Le groupe amino acétyl est déjà suffisamment stable. Il est beaucoup plus stable que la position 7-méthylée et la liaison phosphodiester, qui sont les parties les moins stables de la coiffe.
Veuillez nous contacter pour plus de détails sur la licence LZCap.
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FAQ
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