Description
Les microARN sont une classe d'ARN non codants d'une longueur d'environ 22 nt, qui jouent un rôle important dans la régulation de l'expression des gènes chez les plantes et les animaux. Ce kit utilise la méthode de poly(A)-tailing pour effectuer la transcription inverse du premier brin de miRNA en ADNc. Le tampon 2×Hifair™ miRNA RT du produit contient toutes les matières premières et les amorces pour la réaction de poly(A)-tailing du miRNA et la réaction de transcription inverse. Une optimisation minutieuse garantit que le processus de modification du poly(A) et le processus de transcription inverse peuvent être effectués simultanément et efficacement à l'extrémité 3' du miRNA.
Il est recommandé d'utiliser ce produit en conjonction avec le Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat#11171) de notre société pour des résultats expérimentaux optimaux.
Caractéristiques
- Taux de détection de sensibilité élevé : 10 pg d'ARN peuvent être détectés
- Stabilité élevée du produit : reste inchangé à 37℃ pendant 7 jours
Application
- L'ADNc du premier brin est synthétisé et peut être utilisé comme modèle pourr RT-PCR et RT-qPCR en temps réel.
Caractéristiques
| Final produit taper | ADNc (premier brin) |
| Méthode PCR | RT-PCR |
| Format de réaction | Fraction isolée |
| Type d'échantillon | miARN |
| Température de réaction optimale | 37℃ |
| Inverse transcriptase | MMLV |
Composants
| Composants N° | Nom | 11148ES50 (50T) |
| 11148-A | Hifair™ Mélange d'enzymes miRNA RT | 87,5 μL |
| 11148-B | 2×Hifair™ Tampon miRNA RT | 250 μL |
| 11148-C | H sans RNase2O | 10 ml |
| 11148-D | Amorce inverse universelle (10 μmol/L) | 4 ml |
| 11148-F | Amorce directe U6 (10 μmol/L) | 500 μL |
| 11148-F | Amorce inverse U6 (10 μmol/L) | 500 μL |
Stockage
Le produit doit être conservé entre -25°C et -15℃ pendant 1 an.
Chiffres
Figure 1. Taux de détection de sensibilité élevée : 10 pg d’ARN ont pu être détectés.
L'ARN total synthétisé hsa-miR-let-7e-5p (a) et l'ARN total des cellules 293T (b) ont été utilisés comme modèles et dilués selon les gradients suivants : 60 copies à 606 copies (6 gradients) et 10 pg-100 ng (5 gradients). L'ADNc de tout gradient a été détecté.
[1] Huang G, Chen J, Liu J, Zhang X, Duan H, Fang Q. La boucle de rétroaction MiR-935/HIF1α inhibe la prolifération et l'invasivité du gliome. Onco Targets Ther. 2020 ; 13 : 10817-10828. Publié le 23 octobre 2020. doi : 10.2147/OTT.S244409(IF : 4.147)
[2] Li H, Pan R, Lu Q et al. Le microARN‑145‑5p inhibe les cellules d'ostéosarcome prolifération en ciblant le facteur de transcription E2F 3. Int J Mol Med. 2020;45(5):1317-1326. doi:10.3892/ijmm.2020.4504(IF:4.101)
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Enquête
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