Hifair^™ Le kit Advanced One Step RT-qPCR est un kit de quantification par fluorescence basé sur le colorant SYBR Green I. Grâce à des amorces spécifiques aux gènes, les réactions de transcription inverse et de qPCR sont réalisées dans un seul tube, éliminant ainsi les opérations répétées d'ouverture du bouchon et de pipetage, améliorant considérablement l'efficacité du test et réduisant le risque de contamination. Pour les échantillons d'ARN, le kit utilise du Hifair thermorésistant.^™ V Reverse Transcriptase pour une synthèse efficace d'ADNc et UNICON^™ ADN polymérase HotStart Taq pour l'amplification quantitative. Grâce à son système tampon optimisé, la sensibilité du kit peut atteindre 0,1 pg pour les cibles fortement exprimées et 1 pg pour les cibles modérément exprimées. Ce kit est également adapté à l'amplification et à la quantification d'échantillons d'ADN. Il permet la détection et la quantification sensibles des acides nucléiques provenant de divers échantillons végétaux et animaux, de cellules et de micro-organismes.

Caractéristiques

Composants

Stockage

Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 °C. loin depuis lumière pour 1 année.

Instructions

1. Réaction système configuration*****

* Les modèles à faible Rox et les modèles sans correction Rox sont préparés directement selon le système réactionnel ci-dessus. Pour le modèle à Rox élevé, ajouter le Hieff™ SP High Rox à 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer à 1:250 v/v, bien mélanger et centrifuger. Le 2 x Hifair^™ Le tampon SG avancé avec Hieff™ SP High Rox n'affecte pas l'utilisation des modèles de correction Low Rox et No Rox.

** La concentration finale de l'amorce était de 0,2 μmol/L, qui pouvait également être ajustée entre 0,1 et 1 μmol/L selon le cas.

*** Le réactif est extrêmement sensible, avec un ARN total dans la plage de 1 pg-1 μg, et les tests sur des échantillons humains ont montré un apport optimal de 1 pg-100 ng, contrôlant une valeur Ct globale dans la plage de 15-30 selon le cas.

**** Il est recommandé d’utiliser 20 μL ou 50 μL pour garantir la validité et la reproductibilité de l’amplification du gène cible.

***** Veuillez préparer les échantillons sur une paillasse ultra-propre et utiliser des pointes et des tubes de réaction exempts de résidus de nucléase ; il est recommandé d'utiliser des pointes avec cartouches filtrantes. Évitez toute contamination croisée et par aérosol.

2) Programme de réaction

*La température de transcription inverse peut être choisie entre 50 et 55 °C selon les besoins expérimentaux. Pour les échantillons d'ADN, le processus de transcription inverse peut être omis.

** Dans des cas particuliers, la température de recuit/extension peut être ajustée en fonction de la valeur Tm de l'amorce, 60°C étant recommandé.

3) Modèle applicable

Modèles d'instruments qui ne nécessitent pas d'étalonnage Rox :

Bio-Rad : CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4 ;

Eppendorf : Mastercycler ep realplex, realplex 2 s ;

Qiagen : Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000 ;

Roche Sciences Appliquées : LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96 ;

Thermo Scientific : PikoReal Cycler ; Cepheid : SmartCycler ; Illumina : Eco qPCR ;

Modèles applicables à Low Rox :

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 et 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex ;

Stratagène MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Modèles applicables à High Rox* :

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT rapide, StepOne, StepOne Plus.

* Pour les modèles High Rox, notez que Hieff™ SP High Rox doit être ajouté proportionnellement à 2 x Hifair^™ Tampon SG avancé avant utilisation.

Remarques

1. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
2. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables, pour votre sécurité.

Documents:

Fiche de données de sécurité

11175ES-A-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-B-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-C-MSDS-HB230927.PDF

Manuels