Hifair^™ Le kit Advanced One Step RT-qPCR est un kit de quantification par fluorescence basé sur le colorant SYBR Green I. À l'aide d'amorces spécifiques aux gènes, les réactions de transcription inverse et de qPCR sont réalisées dans un seul tube, ce qui élimine le besoin d'opérations répétées d'ouverture du bouchon et de pipetage, améliore considérablement l'efficacité du test et réduit le risque de contamination. Pour les échantillons d'ARN, le kit utilise du Hifair résistant à la chaleur^™ Transcriptase inverse V pour une synthèse efficace d'ADNc et UNICON^™ ADN polymérase HotStart Taq pour l'amplification quantitative. Grâce au système tampon optimisé, la sensibilité du kit peut atteindre 0,1 pg pour les cibles fortement exprimées et 1 pg pour les cibles modérément exprimées. Le kit convient également à l'amplification et à la quantification d'échantillons d'ADN. Il permet la détection et la quantification sensibles des acides nucléiques provenant de différents échantillons végétaux et animaux, de cellules et de micro-organismes.

Caractéristiques

Composants

Stockage

Ce produit doit être stocké entre -25 et -15 ℃ loin depuis lumière pour 1 année.

Instructions

1. Réaction système configuration*****

* Les modèles Low Rox et les modèles sans correction Rox sont préparés directement selon le système de réaction ci-dessus. Lorsque vous utilisez le modèle High Rox, ajoutez Hieff™ SP High Rox à 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer à 1:250 v/v, mélangez bien et centrifugez. Le 2× Hifair^™ Le tampon SG avancé avec Hieff™ SP High Rox n'affecte pas l'utilisation des modèles de correction Low Rox et No Rox.

** La concentration finale de l’amorce était de 0,2 μmol/L, qui pouvait également être ajustée entre 0,1 et 1 μmol/L selon le cas.

*** Le réactif est extrêmement sensible, avec un ARN total de l'ordre de 1 pg-1 μg, et les tests sur des échantillons humains ont montré un apport optimal de 1 pg-100 ng, contrôlant une valeur Ct globale de l'ordre de 15-30 selon le cas.

**** Il est recommandé d’utiliser 20 μL ou 50 μL pour garantir la validité et la reproductibilité de l’amplification du gène cible.

***** Veuillez préparer le mélange sur une paillasse ultra-propre et utiliser des pointes et des tubes de réaction sans résidus de nucléase ; les pointes avec cartouches filtrantes sont recommandées. Évitez la contamination croisée et la contamination par aérosol.

2) Programme de réaction

*La température de transcription inverse peut être sélectionnée entre 50 et 55 °C en fonction des besoins expérimentaux. Pour les échantillons d'ADN, le processus de transcription inverse peut être omis.

** Dans des cas particuliers, la température de recuit/extension peut être ajustée en fonction de la valeur Tm de l'amorce, 60°C étant recommandé.

3) Modèle applicable

Modèles d’instruments qui ne nécessitent pas d’étalonnage Rox :

Bio-Rad : CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4 ;

Eppendorf : Mastercycler ep realplex, realplex 2 s ;

Qiagen : Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000 ;

Sciences appliquées Roche : LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96 ;

Thermo Scientific : PikoReal Cycler ; Cepheid : SmartCycler ; Illumina : Eco qPCR ;

Modèles applicables à faible Rox :

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 et 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex ;

Stratagène MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Modèles applicables High Rox* :

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT rapide, StepOne, StepOne Plus.

* Pour les modèles High Rox, notez que Hieff™ SP High Rox doit être ajouté proportionnellement à 2 x Hifair^™ Tampon SG avancé avant utilisation.

Remarques

1. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
2. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables, pour votre sécurité.

Documents:

Manuels