Le kit de méthylation d'ADN au bisulfite ultra-rapide Hieff (sur colonne) convertit rapidement les cytosines non méthylées des échantillons d'ADN en uracile, tout en laissant les cytosines méthylées inchangées. Lors du traitement au bisulfite à haute température, l'ADN double brin se dénature en brins simples. En présence de HSO3-, les résidus de cytosine subissent une désamination et sont convertis en uracile, les cytosines méthylées restant inchangées. Lors de l'amplification PCR ultérieure, l'uracile est remplacé par la thymine (T). Le processus de conversion ne prend que 5 minutes, s'adapte à un apport d'ADN allant de 100 pg à 2 μg, et atteint une efficacité de conversion ≥ 99 % pour les cytosines non méthylées. L'ADN converti convient aux applications en aval telles que l'amplification PCR et le séquençage NGS.

Fonctionnalité

Faible entrée : Convient pour convertir des échantillons allant de 100 pg à 2 μg

Temps de conversion court : environ 5 minutes.

Dégâts minimes sur l'échantillon : Maintenir une bonne intégrité de l’échantillon après la conversion.

Efficacité de conversion élevée : Taux de conversion ≥ 99%, taux de conversion élevés dans les régions à GC élevé avec un faible taux de faux positifs.

Convient aux échantillons rares, comme la conversion de la méthylation de l'ADN unicellulaire.

Capable de convertir par méthylation des échantillons d'ARN.

Produit Composants

Note:

Pour 10 tests par boîte : Ajouter 4,4 mL d’éthanol anhydre à la solution de lavage.

Pour 50 tests par boîte : Ajouter 22 mL d’éthanol anhydre à la solution de lavage.

Après avoir ajouté l'éthanol anhydre, retournez et mélangez bien, puis conservez pour une utilisation ultérieure. Assurez-vous que le bouchon du flacon est bien fermé pour éviter l'évaporation de l'éthanol, ce qui pourrait affecter les performances du réactif.

Chiffre

Figure 4. La conversion au bisulfite sur des échantillons d'ADN génomique humain a été réalisée à l'aide des kits de conversion 12225 et concurrent Q. Par la suite, des kits de préparation de bibliothèques d'ADN monocaténaire spécifiques à la méthylation ont été utilisés pour générer des bibliothèques. Le rendement de la bibliothèque et les données de contrôle de la qualité sont présentés ci-dessus. Les résultats démontrent que lors du séquençage des bibliothèques regroupées des kits 12225 et concurrent Q, le kit 12225 a produit une sortie de données plus élevée, a atteint un taux de cible plus élevé (%) et a présenté des taux de duplication plus faibles (%).

Expédition et stockage

Conserver la solution de conversion 12225-A à température ambiante, à l'abri de la lumière. Conserver les autres composants à température ambiante. La durée de conservation est de 12 mois.

Note:

1. Pour garantir le succès des expériences en aval, quantifiez avec précision la quantité totale d'ADN d'entrée pendant l'étape de conversion. Il est recommandé d'utiliser Qubit 3.0/4.0 pour la quantification de l'ADN, avec un rapport A260/A280 compris entre 1,7 et 1,9. La plage d'ADN d'entrée doit être comprise entre 100 pg et 2 μg, avec une plage optimale de 100 ng à 1 μg. Un apport d'ADN insuffisant peut entraver la détection en aval, tandis qu'un apport excessif peut réduire la récupération et l'efficacité de la conversion.

2. La solution de conversion, la solution de désulfonation et la solution de lavage contiennent des composants volatils. Après utilisation, resserrez rapidement les bouchons et conservez à température ambiante.

3. Pour les échantillons post-conversion, procéder rapidement aux expériences en aval. Pour un stockage à court terme, conserver à -20 °C et pour un stockage à long terme, conserver à -80 °C.

4. Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.

5. Ce produit est destiné à la recherche uniquement !

Instructions

Préparation des réactifs et consommables : Tube à centrifuger stérile de 1,5 ml, eau sans enzyme, éthanol absolu, tube PCR ;

l Conversion du bisulfite :

1) Préparez le tube PCR stérile correspondant en fonction du nombre d'échantillons à tester et préparez le système réactionnel selon le tableau suivant :

2) Système de transformation

Utilisez une pipette pour souffler et mélanger le système ci-dessus ou vortexez et mélangez-le pendant 5 s, puis centrifugez-le pendant une courte période et centrifugez la solution de réaction au fond du tube PCR.

v Remarque : 1. À ce stade, le volume total de la solution de réaction dans le tube PCR est de 200 μL. Afin de rendre la transformation plus complète, la solution de réaction doit être divisée en parties égales et transférée dans un nouveau tube PCR stérile après soufflage et mélange à l'étape 2), et la procédure de transformation doit être exécutée. Après la conversion, les solutions de réaction dans les deux tubes PCR ont été combinées dans la même colonne de purification pour la purification.

2. Si le volume de l’échantillon est compris entre 20 et 40 μL, réduisez le volume de la solution de transformation pour maintenir un volume total de 200 μL.

3. Si le volume de l'échantillon est de 50 μL, 150 μL de la solution de transformation sont ajoutés, le volume total est maintenu à 200 μL et le temps de transformation est prolongé à 6-10 min.

3) Paramétrage du programme de conversion CT

Le tube PCR est placé sur un instrument PCR avec un programme prédéfini pour effectuer la réaction.

l Purification

1) Ttransférer 200 μL de conversion solution à la Pcolonne d'urificationm, centrifugeuse pendant 30-60 s 13000 g, jetez le filtrat et placez la colonne de purification dans le Ctube de collectem encore;

2) Ajouter 100 μL de Tampon de lavage dans Colonnes de purification (confirmer que de l'éthanol absolu a été ajouté), centrifuger pendant 30 à 60 s 13000 g, jetez le filtrat et placez la colonne de purification dans le Ctube de collectem encore;

3) Ajouter 200 μL de Tampon de désulfonation dans le Colonnes de purification , et laisser la réaction reposer à température ambiante pendant 20 min. Après la réaction, centrifuger pendant 30 à 60 s 13000 g, jetez le filtrat et placez le Colonnes de purification dans le Ctube de collectem encore;

4) Ajoutez 200 μL de Tampon de lavage au Colonnes de purification, centrifugeuse pendant 30-60 s 13000 g jetez le filtrat et placez le Pcolonne d'urificationm dans le Ctube de collectem encore;

5) Répétez l’étape 4) une fois ;

6) Transférer le Colonnes de purification au tube à centrifuger de 1,5 ml préparé, ajoutez 10 à 30 μL de Tampon d'élution au centre de la membrane filtrante après ouverture du couvercle et séchage, et recueillir le ADN après 1 min de repos à température ambiante et centrifugation 1 min à 13000 g;

7) Stocker le ADN temporairement à -20 ℃. Pour un stockage à long terme, veuillez stocker le ADN à -80 ℃ et éviter les congélations et décongélations répétées inutiles.

Remarque : le produit de transformation purifié peut être directement utilisé dans la réaction PCR ou le processus de séquençage ultérieur.

Manuel