Système de surveillance de la glycémie haute performance (NGS) de Hieff One Pot Flash DNA Library PrepKit est un kit de bibliothèque d'ADN enzymatique rapide，sorcière contient une enzyme de haute qualité pour la fragmentation de l'ADN et combine la fragmentation de l'ADN, la réparation des extrémités et la queue dA en une seule étape, ce qui réduit considérablement le temps et le coût de préparation de la bibliothèque.

Ce kit de préparation de bibliothèque est compatible avec des échantillons de 100 pg à 500 ng de tous les animaux, plantes, micro-organismes, etc. courants.

et réalisez rapidement la fragmentation de l'ADN, la réparation terminale et la réaction d'ajout de queue A dans un seul tube. Le kit doit être associé à des adaptateurs et des amorces, et est compatible avec Illumina et MGI plateformes de séquençage à haut débit.

Fonctionnalité

1) Convient aux échantillons d'ADN génomique de 100 pg à 500 ng.

2）compatible avec Illumina et MGI plateformes de séquençage à haut débit.

3）Fragmentation, réparation des extrémités et queue A réaction à l'intérieur 5 minutes

4）Taux de conversion de bibliothèque efficace et efficacité d'amplification.

Caractéristiques

Composants

Note: * indique que ce réactif n'est pas inclus dans ce kit et que des réactifs supplémentaires sont nécessaires.Le kit est compatible avec les plates-formes doubles de Illumina et MGI, mais un mélange d'apprêt supplémentaire (CAT # 13334 Mélange d'apprêt pour MGI et le mélange d'amorces Cat# 13335 pour Illumina) est requis.

Stockage

Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 °C.°C pour 1 année.

Chiffres

Figure 1. Détection de l'ADN de 10 types de micro-organismes

Les bibliothèques ont été préparées à l’aide Cat#12316 protocole ,10 ng de la norme d'ADN communautaire microbienne ZymoBIOMICS (Zymo Research® #D6306). Les bibliothèques ont été regroupées et séquencées sur un Illumina (SE75).Les données de séquençage ont été homogénéisées à 20M et comparées entre la composition attendue et détectée pour les deux niveaux d'entrée. La détection d'ADNg microbien spécifique était cohérente avec la composition attendue. Composition attendue : Cryptococcus neoformans 2 %, Saccharomyces cerevisiae 2 %, Bacillus subtilis 12 %, Escherichia coli 12 %, Enterococcus faecalis 12 %, Lactobacillus fermentum 12 %, Listeria monocytogenes 12 %, Pseudomonas aeruginosa 12 %, Staphylococcus aureus 12 % et Salmonella enterica 12 %.

À propos de l'opération

1. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables，pour votre sécurité.

2. Décongeler les composants à température ambiante. Après décongélation, bien mélanger au vortex, faire tourner brièvement le tube et le placer sur de la glace pour une utilisation ultérieure.

3. Lors de la préparation de la solution de réaction à chaque étape, il est recommandé d'utiliser une pipette pour souffler et mélanger uniformément ou agiter doucement. Une agitation violente peut entraîner une diminution du rendement de la bibliothèque.

4. Afin d'éviter toute contamination croisée des échantillons, il est recommandé d'utiliser une tête de pistolet avec un élément filtrant. Veuillez remplacer la tête du pistolet lors de l'absorption d'échantillons différents.

5. Il est recommandé d'effectuer chaque étape de réaction dans un thermocycleur avec un couvercle chauffant. Le thermocycleur doit être préchauffé à la température définie avant utilisation.

6. Des opérations incorrectes peuvent très probablement provoquer des contaminations par aérosols, affectant la précision des résultats. Il est recommandé d'isoler physiquement les zones de mélange des réactions PCR et les zones d'essai de purification des produits PCR. Equipé d'équipements tels que des pipettes spécialisées pour la construction de bibliothèques.

7. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.

À propos de la fragmentation de l’ADN

1. La gamme compatible de ce kit est de 100 pg–500 ng d'ADN en entrée. Il convient d'utiliser autant que possible de l'ADN en entrée de haute qualité avec A260/A280 = 1,8-2,0.

2. Si l'ADN d'entrée contient une concentration élevée d'agent chélateur d'ions métalliques ou d'autres sels, cela peut affecter les expériences ultérieures. Il est recommandé de diluer l'ADN dans du ddH2O ou du tampon Tebuffer (tris-HCl 10 mm, pH 8,0-8,5 ; EDTA 0,1 mM).

3. Pour la plupart des ADN génomiques de haute qualité, le temps de digestion est indiqué dans le tableau 1. Le kit a une faible préférence et peut tolérer divers modèles avec un contenu GC.

Tableau 1. Durée recommandée de la fragmentation conventionnelle de l'ADN génomique

Ligature de l'adaptateur

1. La concentration de l'adaptateur affecte directement l'efficacité de la ligature et le rendement de la bibliothèque. Une utilisation excessive de l'adaptateur peut produire plus d'adaptateurdimère ; un faible dosage peut affecter la ligature efficacité et le rendement de la bibliothèque. Les tableaux 2 et 3 énumèrent la quantité recommandée d'adaptateur pour différentes entrées ADN utilisant ce kit.

Tableau 2. L'Illumina recommandé quantité d'adaptateur pour différentes entrées d'ADN

Tableau 3. Le MGI recommandé quantité d'adaptateur pour différentes entrées d'ADN

Amplification de la bibliothèque

Le nombre de cycles d'amplification doit être strictement contrôlé. Une amplification insuffisante peut entraîner un faible rendement de la bibliothèque. Une suramplification peut entraîner une augmentation des biais, des erreurs, des lectures dupliquées et des produits chimériques. Tableau 4 répertorie les numéros de cycles recommandés ciblant le rendement de la bibliothèque de 1 μg.

Tableau 4. Les cycles recommandés de 100 pg-500 ng d'ADN d'entrée

Nettoyage et sélection de la taille de l'ADN à partir de billes

1. Le processus de construction d'une bibliothèque d'ADN comprend plusieurs étapes qui nécessitent la purification de l'ADN par des billes magnétiques. Nous recommandons Hieff NGS™ Billes de sélection d'ADN (Yeasen Cat#12601) ou AMPure™ Billes magnétiques XP (Beckman Cat#A63880) pour la purification de l'ADN et la sélection de taille.

2. Les billes magnétiques doivent être équilibrées à température ambiante avant utilisation, sinon le rendement diminuera et l'effet de sélection de taille sera affecté.

3. Les billes magnétiques doivent être bien mélangées par vortex ou pipetage avant utilisation.

4. N'aspirez pas les billes lors du transfert du surnageant, même des traces de billes peuvent avoir un impact sur les réactions suivantes.

5. L'éthanol à 80 % doit être fraîchement préparé, sinon cela affectera l'efficacité de la récupération.

6. Les billes magnétiques doivent être séchées à température ambiante avant l'élution du produit. Une sécheresse insuffisante peut facilement entraîner un effet résiduel de l'éthanol sur les réactions ultérieures ; une sécheresse excessive peut provoquer la fissuration des billes magnétiques et réduire le rendement de purification. Normalement, un séchage à température ambiante pendant 3 à 5 minutes suffit pour permettre aux billes de sécher complètement.

7. Si nécessaire, les échantillons d'ADN purifiés ou sélectionnés en fonction de la taille sont élués dans 0,1× Le tampon TE peut être conservé à 4°C pendant 1 à 2 semaines ou à -20°C pendant un mois.

Analyse de la qualité de la bibliothèque

1. La qualité des bibliothèques construites est généralement analysée en mesurant les concentrations et les distributions de taille.

2. Les concentrations des bibliothèques peuvent être mesurées par des méthodes basées sur la fluorescence telles que Qubit et PicoGreen ou qPCR.

3. Il n'est pas recommandé d'utiliser des méthodes de quantification basées sur l'absorbance telles que NanoDrop.

4. Il est recommandé d'utiliser la méthode qPCR pour la quantification des bibliothèques : les méthodes basées sur la fluorescence telles que Qubit et PicoGreen ne peuvent pas différencier les structures d'ADN double brin incomplètes (inserts sans adaptateur ou avec une seule des extrémités ligaturée avec un adaptateur) des bibliothèques complètes. La méthode qPCR n'amplifiera et ne mesurera que les bibliothèques complètes avec les deux extrémités ligaturées avec des adaptateurs (les bibliothèques séquencables), offrant ainsi une mesure plus précise pour le chargement.

5. La distribution de taille des bibliothèques peut être analysée à l'aide d'Agilent Bioanalyzer ou d'autres appareils basés sur les principes de l'électrophorèse capillaire ou de la microfluidique.

Documents:

Fiche de données de sécurité

12316_FDS_HB250211_FR.PDF

Manuels

12316_Manuel_Ver.EN20241225.pdf