Description
La T4 PNK (polynucléotide kinase T4) est une 5'-hydroxyle kinase qui facilite le transfert du γ-phosphate de l'ATP aux extrémités 5'-hydroxyle des chaînes oligo- ou polynucléotidiques, y compris l'ADN ou l'ARN double brin et simple brin, ainsi qu'aux nucléotides 3'-monophosphate. Ce transfert est réversible. La T4 PNK possède également une activité 3'-phosphatase, qui déphosphoryle les extrémités oligonucléotidiques 3'-phosphorylées, les nucléotides désoxy 3'-monophosphates et les nucléotides désoxy 3'-diphosphates. En présence d'ADP, la T4 PNK peut agir comme une 5'-phosphatase, favorisant l'échange de groupes 5'-phosphate sur les oligo- ou polynucléotides 5'-phosphorylés avec l'ATP. Cette enzyme est largement utilisée pour la construction de bibliothèques d'ADN et pour le marquage final afin de générer des sondes.
Applications
Phosphorylation des extrémités 5' de l'ADN ou de l'ARN pour ligature ultérieure
Marquage terminal de l'ADN ou de l'ARN pour servir de sondes et à des fins de séquençage
Phosphorylation 5' de mononucléotides avec une extrémité 3' phosphorylée pour préparer des substrats pNp destinés à être fixés aux extrémités 3' de l'ADN ou de l'ARN
Marquage des extrémités 5' des oligonucléotides possédant un groupe phosphate 3'
Caractéristiques
| Ssource | Bactériophage T4 |
| Poids moléculaire | 36,78 kDa |
| Concentration | 10 U/μL |
| Unité ddéfinition | Une unité est définie comme la quantité requise pour catalyser l'incorporation de 1 nmol de [γ-32P] ATP dans une réaction en 30 minutes à 37°C |
Composants
| Composants Non. | Nom | 12902ES76 | 12902ES86 | 12902ES92 |
| 12902-A | Polynucléotide kinase T4(10 U/μL) | 50 μL | 250 μL | 1 ml |
| 12902-B | Tampon PNK 10×T4 | 500 μL | 1 ml | 2×1 mL |
[Remarque] : Le tampon PNK 10×T4 ne contient pas d'ATP ; les clients doivent l'ajouter eux-mêmes, avec une concentration finale de référence de 1 mM, ou utiliser le tampon ADN ligase T4.
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