Description
Hieff™ Polyvalence La T4 DNA Ligase est une variante de la T4 DNA Ligase. Cette enzyme est adaptée pour catalyser la réaction de ligature entre des molécules cohésives ou à extrémités franches. Il s'agit d'un produit mono-enzymatique conçu pour connecter des fragments d'ADN et des adaptateurs pendant le processus de préparation de la bibliothèque dans le séquençage de nouvelle génération (NGS).® La polyvalence de la T4 DNA Ligase a été largement validée par séquençage à haut débit et présente une qualité exceptionnelle.
Fonctionnalité
- Haute fidélité
- Thermotolérant
En savoir plus sur le développement polyvalent de la ligase ADN T4
Caractéristiques
| Source | E.coli recombinant |
| Mémoire tampon de stockage | 50 mM Tris-HC1,100 mM KC1,0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50 % glycérol, pH 7,5Oui0,2 à 25 ℃ |
| Définition de l'unité | Dans un système de réaction de ligature de 20 μL, la quantité d'enzyme requise pour catalyser la ligature de plus de 50 % des fragments d'ADN, lorsque 6 μg de λDNA-Hind III réagissent à 16°C pendant 30 minutes, est définie comme 1 unité d'activité (U). |
Composants
| Composants | Nom | 12996ES60 60KU | 12996ES62 600 KU |
| 12996-A | Hieff® Ligase ADN T4 polyvalente (600 U/µL) | 100 μL | 1000 μL |
| 12996-B | Tampon ADN ligase 10×T4 | 500 μL | 3×1500 μL |
Stockage
Ce produit doit être conservé à -25~-15℃ pendant 2 années.
Chiffre
Veuillez laisser un message pour vous renseigner sur les données de comparaison des performances entre cette enzyme et d'autres ligases ADN T4 thermostables et conventionnelles de premier ordre.
Remarques
1. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables，pour votre sécurité.
2. Si une petite quantité de précipitation se produit dans le tampon, c'est un phénomène normal. Veuillez retourner et mélanger soigneusement le tampon avant de l'utiliser.
3. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
Protocole
1. Les kits de préparation de bibliothèque d'ADN courants actuels utilisant la méthode basée sur la ligature ne nécessitent généralement pas d'étapes de purification après la réparation des extrémités et la queue A. Les fragments d'ADN sont directement soumis à la ligature de l'adaptateur sans purification. Ce kit est compatible avec le courant dominant systèmes de réparation d'extrémité et de queue en A disponibles dans le commerce pour une ligature d'adaptateur sans couture.
Préparez la réaction suivante dans un tube à microcentrifugation sur glace, mélangez doucement en pipetant ou en agitant, centrifugez brièvement et inactivez par chauffage à 20°C pendant 15 minutes.
Tableau 1. Système de réaction pour la ligature de l'adaptateur
| Composant | Volume（μL） | Concentration finale |
| ADN à queue dA | 60 | 1× |
| Tampon ADN ligase 10×T4 | 10 | 0,1 μM-0.5 µM |
| 50% PEG6000 | 12* | 1 ng-400 ng |
| Adaptateur ADN | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| Eau sans nucléase | en haut à 100 | - |
【Note】*La solution PEG6000 à 50% n'est pas fournie dans le kit, vous devrez la préparer vous-même
**Veuillez vous référer au tableau 2 pour le quantité d'adaptateur.
***La quantité de T4 DNA Ligase peut être ajoutée selon les besoins par 3 à 5 μL.
2. La concentration de l'adaptateur affecte directement l'efficacité de la ligature et le rendement de la bibliothèque. Une utilisation excessive d'adaptateurs peut entraîner dans davantage de dimères d'adaptateur, tandis qu'une faible utilisation peut affecter l'efficacité de la connexion et la production de la bibliothèque. Tableau 2 répertorie la quantité d'adaptateur recommandée pour différentes quantités d'ADN d'entrée.
Tableau 2. Quantité d'adaptateur recommandée pour 100 pg-1 μg d'ADN d'entrée
| Entrée ADN | Concentration |
| 0,1 n | |
| 1 ng | 0,5 μM |
| 10 ng | 1 μM |
| 25 ng | 2 μM |
| 100 ng à 1 000 ng | 10 μM |
【Note】：La quantité d'adaptateur peut être ajusté en fonction des exigences du tableau ci-dessus.
Paiement et sécurité
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Enquête
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FAQ
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