Description
Le réactif d'excision spécifique à l'uracile (appelé USER) est un cocktail enzymatique composé d'Uracil DNA Glycosylase (UDG) et d'Endonucléase VIII (Endo VIII). Il est capable de générer des lacunes mononucléotidiques spécifiquement aux emplacements de l'uracile. L'UDG facilite le clivage de la base uracile, ce qui entraîne la formation d'un site AP (site apurinique/apyrimidinique) tout en maintenant l'intégrité du squelette sucre-phosphate phosphodiester. L'activité endonucléase de l'Endo VIII clive le squelette phosphodiesterds aux deux 3′ et 5′ extrémités du site apurinique, libérant ainsi le sucre désoxyribose auquel il manque une base.
Caractéristiques
Pas de nucléases ou d'ARNases résiduelles
Haute efficacité d'excision
Applications
Construction d'une bibliothèque spécifique à un brin d'ARN
Clonage par excision spécifique à l'uracile (USER-LIC)
Assemblage d'ADN, comme l'assemblage de monomères TALE
Construction en série de plusieurs bibliothèques d'ADNc à partir de cellules uniques
Caractéristiques
| Concentration | 1 U/µL |
| Unité Ddéfinition | Un L'unité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour couper un oligonucléotide double brin de 34-mer contenant une seule base uracile dans un 10 μL système réactionnel à 37°C pendant 15 minutes, ce qui correspond au clivage de 10 pmol du substrat. |
| jenactivation Cconditions | 75°C, 10 min |
Composants
| Numéro de composant | Nom | 14537ES50 | 14537ES72 |
| 14537-A | Réactif d'excision spécifique à l'uracile (1 (U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14537-B | 10×Réactif d'excision spécifique à l'uracile Tampon de réaction | 1.25 ml | 1.25 ml |
Expédition et stockage
Les produits doivent être stockés à -25℃ ~ -15℃ pour 1 année.
Chiffres
Figure 1. Comparaison des effets de l'excision
Remarque : 10 pmol d'ADN double brin contenant du dUTP ont été excisés à l'aide de l'enzyme USER de Yeasen et d'un produit comparable du fournisseur A. Les résultats de l'électrophorèse sur gel d'agarose ont montré que les effets d'excision de l'enzyme USER de Yeasen étaient cohérents avec ceux du fournisseur A.
Chiffre2. Comparaison des nombres de colonies pour le clonage USER-LIC
Remarque : Un fragment d'ADN de 600 pb a été ligaturé à l'aide de l'enzyme USER de Yeasen et d'un produit comparable du fournisseur A pour construire un vecteur, qui a ensuite été transformé en Escherichia coli et cultivé. Le nombre de colonies sur la plaque de culture a été observé et les résultats ont indiqué que l'efficacité du clonage USER-LIC utilisant l'enzyme USER de Yeasen était supérieure à celle du fournisseur A.
Documents:
Fiche de données de sécurité
14537_FDS_Version EN20241210.pdf
Manuels
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