Description
Ribonucléase R (RNase R) de Escherichia coli, est une exoribonucléase 3′→5′ dépendante du magnésium qui peut digère tous les ARN linéaires mais ne digère pas les structures d'ARN lariat ou circulaires. La plupart des ARN cellulaires seront complètement digérés par la RNase R, à l'exception des ARN de transfert, de l'ARN 5S et des lariats introniques. La RNase R est utilisée pour l'enrichissement des ARN circulaires dans les échantillons biologiques, l'identification des séquences introniques lariat, l'identification des ARN circulaires exoniques, l'étude de l'épissage alternatif.
Caractéristiques
Efficacité et qualité garanties avec la certification ISO 13485.
Disponible en configurations en vrac ou sur mesure.
Décompose efficacement l’ARN linéaire, tout en préservant les boucles lariat et les ARN circulaires.
La digestion sélective des ARN linéaires améliore l’isolement des ARN circulaires pour la production de protéines ou la construction d’une bibliothèque d’ADNc intronique.
Offrant de l'ARNase R de qualité GMP (14615)
Spécifications
| Source | Un recombinant Escherichia coli souche portant le gène RNAse R de Escherichia coli |
| Température optimale | 37℃ |
| Mémoire tampon de stockage | 50 mM de Tris-HCl, 100 mM de NaCl, 0,1 mM d'EDTA, 0,1 % de Triton® X-100, 1 mM de TNT, 50% de glycérol, pH 7,5 à 25℃ |
| Définition de l'unité | Une unité convertit 1 μg de poly-r(A) en nucléotides solubles dans l'acide en 10 minutes à 37°C dans 20 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM de KCl et 0,1 mM de MgCl2. |
Application
La RNase R est un composant fondamental de la synthèse de l'ARN circulaire (circRNA). L'ARN circulaire est prometteur pour améliorer la stabilité et la biostabilité pharmaceutiques. Grâce à leurs structures fermées de manière covalente, les ARN circulaires résistent aux exonucléases d'ARN. [1,2] La RNase R trouve une large application dans diverses études, notamment l'épissage alternatif, la production d'ADNc intronique et l'isolement des intermédiaires d'épissage et des lariats.
Composants
| Composants N° | Nom | 14606ES72 | 14606ES86 | 14606ES92 |
| 14606-A | RNase R (20 U/μL) | 12,5 μL | 125 μL | 500 μL |
| 14606-B | Tampon de réaction 10×RNase R | 250 μL | 3 × 1 mL | 10 mL |
Stockage
Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 ℃ pendant 2 ans.
Instructions
Préparez le système réactionnel suivant dans un tube à microcentrifugeuse stérile
| composant | Volume |
| Tampon de réaction 10×RNase R | 2 μL |
| Échantillon d'ARN | 1 μg |
| RNase R (20 U/μL) | 2-4 U |
| ddH sans RNase2O | Jusqu'à 20 μL |
Incuber à 37 ℃ pendant 10 - 30 minutes.
Chiffres
Figure 1 : Les molécules d’ARN linéaires peuvent être digérées par l’ARNase R de Yeasen.
Figure 2 : Le circRNA ne peut pas être digéré par la RNAse R de Yeasen.
Remarques
- L'activité de la RNase R nécessite 0,1 à 1,0 mM de Mg2+;
- Avec l’augmentation de l’ARN, le temps de réaction peut être prolongé et la quantité d’enzyme peut être augmentée de manière appropriée ;
- La teneur en EDTA des échantillons d’ARN peut affecter l’activité de la RNase R.
- L'incubation à 70 ℃ pendant 10 minutes peut inactiver l'enzyme.
Référence
- Qu L, Yi Z, Shen Y et al. Vaccins circulaires à ARN contre le SRAS-CoV-2 et les variantes émergentes. Cellule. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- Chen L, Wang C, Sun H, et al. La boîte à outils bioinformatique pour la découverte et l'analyse de circRNA. Bref Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
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