Description
L'ADN polymérase Tth est une ADN polymérase résistante à la chaleur découverte à partir de la bactérie thermophile Thermus thermophilus HB8En présence de Mg²⁺, cette enzyme présente une activité ADN polymérase 5′-3′ et une activité exonucléase 5′-3′, mais est dépourvue d'activité exonucléase 3′-5′, ce qui la rend largement applicable aux réactions d'amplification par PCR. En présence de Mn²⁺, l'enzyme présente une forte activité transcriptase inverse à des températures de 55 à 70 °C, ce qui la rend adaptée aux réactions de RT-PCR en une étape.
Spécification
Définition de l'unité : Une unité (U) d'activité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 10 nmol de nucléotides totaux dans un produit insoluble dans l'acide en 30 minutes à 74 °C, en utilisant l'ADN de sperme de saumon activé comme modèle/amorce.
Composant
| Non. | Nom | Taille | |
| 14607ES72 (250 U) | 14607ES80 (1250 U) | ||
| 14607-A | ADN polymérase Tth (5 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14607-B | RT-PCR 5×Tth Tampon | 1 mL | 4×1,25 mL |
| 14607-C | PCR 10×Tth Tampon (avec Mg2+) | 500 μL | 2×1,25 mL |
| 14607-D | 50 mM de Mg(OAc)2 | 250 μL | 1,25 mL |
| 14607-E | Mélange dNTP (10 mM chacun) | 150 μL | 750 μL |
Expédition et stockage
Expéditionavec de la glace sèche. Stocker à -20°C, avec une durée de conservation de 2 ans.
Précautions
1) Si un léger précipité apparaît dans le tampon après décongélation, il s'agit d'un phénomène normal. Veuillez retourner le tampon et bien mélanger avant utilisation.
2) Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant l'opération.
3) Ce produit est destiné à la recherche uniquement !
Instructions
Procédure de réaction PCR recommandée :
1.Préparation du système réactionnel
| Nom | Volume (μL) |
| PCR 10×Tth Tampon (avec Mg2+) | 5 |
| ADN polymérase Tth (5 U/μL) | 0,5 |
| Mélange dNTP (10 mM chacun) | 1 |
| En amont Apprêt 10 μM | 2 |
| En aval Apprêt 10 μM | 2 |
| ADN modèle | 50 pg- 1 μg |
| ddH2O | à 50 |
[Remarque] : Les quantités d'ADN polymérase Tth, d'amorces en amont et en aval et de mélange dNTP peuvent être ajustées en fonction des besoins expérimentaux spécifiques.
2. Configuration du cycle
| Mesures | Temp(ºC) | Temps | Cycles |
| Pré-dénaturation | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
| Dénaturation | 94 | 30 secondes |
35
|
| Recuit | 50-70 | 30 secondes | |
| Extension | 72 | 60 sec/ko | |
| Prolongation finale | 72 | 10 minutes | 1 |
[Remarque] : Les conditions de réaction peuvent être ajustées en fonction des exigences expérimentales spécifiques.
Procédure de réaction RT-PCR recommandée :
1. Préparation du système réactionnel
| Nom | Volume (μL) |
| RT-PCR 5×Tth Tampon | 10 |
| ADN polymérase Tth (5 U/μL) | 1,5 |
| 50 mM de Mg(OAc)2 | 2,5 |
| Mélange dNTP (10 mM chacun) | 1,5 |
| En amont Apprêt 10 μM | 2 |
| En aval Apprêt 10 μM | 2 |
| Modèle ARN | 50 pg- 1 μg |
| ddH2O | à 50 |
[Remarque] : Les quantités d'ADN polymérase Tth, d'amorces en amont et en aval et de mélange dNTP peuvent être ajustées en fonction des besoins expérimentaux spécifiques.
2.Configuration du cycle
| Mesures | Température (ºC) | Temps | Cycles |
| Transcription inverse | 55-70 | 30 minutes | 1 |
| Pré-dénaturation | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
| Dénaturation | 94 | 30 secondes |
35
|
| Recuit | 50-70 | 30 secondes | |
| Extension | 72 | 60 sec/ko | |
| Prolongation finale | 72 | 10 minutes | 1 |
[Remarque] : Les conditions de réaction peuvent être ajustées en fonction des exigences expérimentales spécifiques.
Paiement et sécurité
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Enquête
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FAQ
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