Description
Hifair™ Super Reverse Transcriptase est une transcriptase inverse de nouvelle génération, lequel était enconçu de M-MLV. Cette enzyme est dépourvue d'activité RNase H et présente une stabilité thermique nettement améliorée, tolérant des températures de réaction allant jusqu'à 70 °C. Elle est particulièrement adaptée à la transcription inverse efficace de matrices d'ARN aux structures secondaires complexes.
Applications
Ce produit est adapté aux expériences de RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq et de synthèse d'ADNc. La température de réaction de transcription inverse peut atteindre 70 °C.
Définition de l'unité
Une unité (U) d'activité enzymatique est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 1 nmol de dTTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 10 minutes à 37 °C, en utilisant Poly(A).Oligo(dT) comme amorce de matrice.
Composant
| Composant | Nom | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Super transcriptase inverse (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Conditions de stockage
Conserver entre -25 °C et -15 °C jusqu'à 18 mois.
Instructions d'utilisation
Procédure de synthèse du premier brin d'ADNc
1. Dénaturation de l'ARN (étape facultative)
1. La dénaturation de l’ARN aide à ouvrir les structures secondaires, améliorant considérablement le rendement du premier brin d’ADNc.
| Composant | Volume |
| ddH2O sans RNase | à 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) ou amorces aléatoires (50 μM) ou amorces spécifiques au gène (2 μM) | 1 μL |
| ARN modèle | ARN total : 10 pg - 5 μg ou ARNm : 10 pg - 500 ng |
· Chauffer à 65°C pendant 5 minutes, puis refroidir rapidement sur glace pendant 2 minutes.
· Centrifuger brièvement pour recueillir le liquide de réaction et ajouter le mélange de réaction de transcription inverse comme indiqué ci-dessous.
2. Configuration de réaction de transcription inverse (système 20 μL)
| Composant | Volume |
| Mélange réactionnel de l'étape précédente | 13 μL |
| Tampon de réaction 5× | 4 μL |
| Mélange de dNTP (10 mM) | 1 μL |
| Transcriptase inverse Hifair® Super (200 U/μL) | 1 μL |
| Inhibiteur de RNase (40 U/μL) | 1 μL |
3. Paramètres du programme de transcription inverse
| Température | Temps |
| 25°C* | 5 minutes |
| 50-70°C | 15 à 30 minutes |
| 85°C** | 5 minutes |
*En cas d'utilisation d'amorces aléatoires, incuber à 25 °C pendant 5 minutes. Si vous utilisez des amorces Oligo(dT)18 ou spécifiques à un gène, cette étape peut être omise.
Un chauffage à 85°C pendant 5 minutes inactive la transcriptase inverse et peut être ajusté selon les besoins.
Le produit de transcription inverse peut être utilisé immédiatement pour des réactions PCR ou qPCR ultérieures, stocké à court terme à -20 °C ou pour un stockage à long terme à -80 °C après aliquotage pour éviter les cycles de congélation-décongélation.
Précautions
1. Maintenir un environnement de laboratoire propre ; porter des gants et des masques propres. S'assurer que tous les consommables expérimentaux sont exempts d'ARNase afin d'éviter toute contamination.
2. Effectuez toutes les opérations sur de la glace pour éviter la dégradation de l’ARN.
3. Utilisez des échantillons d’ARN de haute qualité pour garantir une transcription inverse efficace.
4. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
5. Pour votre sécurité et votre santé, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables lors de la manipulation du produit.
Documents:
Paiement et sécurité
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Enquête
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FAQ
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