Description
La T4 RNA Ligase 1, également connue sous le nom de T4 RNA ligase, est une enzyme dépendante de l'ATP qui catalyse la formation d'une liaison phosphodiester entre l'extrémité 5'-P et l'extrémité 3'-OH des molécules d'ARN simple brin (ssRNA), d'ADN simple brin (ssADN) ou de mononucléotides. La T4 RNA Ligase 1 peut effectuer une ligature entre les molécules d'ARN simple brin (le plus efficacement), entre l'ADN simple brin et l'ARN simple brin (avec une efficacité moindre), et peut également être utilisée pour la ligature entre les molécules d'ADN simple brin (avec une très faible efficacité). Elle convient à la ligature des molécules d'ARN simple brin et à la fixation d'adaptateurs 5' dans la construction de bibliothèques de miRNA pour NGS.
Figure 1. Mécanisme d'action de la T4 RNA ligase 1
Caractéristiques
Catalyse la formation d'une liaison phosphodiester entre l'extrémité 5'-P et l'extrémité 3'-OH des molécules d'ARN simple brin (ssRNA), d'ADN simple brin (ssADN) ou de mononucléotides.
Applications
Clonage d'ARN
Adaptateurs 5' dans la construction de bibliothèques de miRNA pour NGS
Préparation d'ARN circulaire
Caractéristiques
| Définition de l'unité | Une unité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour convertir 1 nanomole de 5-[32P] rA16 en une forme résistante à la phosphatase en 30 minutes à 37ouC |
| Source | Protéine recombinante exprimée par Escherichia coli est dérivé du bactériophage T4 |
| Conditions de réaction | 10×Tampon de réaction T4 RL1 : 500 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 25ouC), 100 mM de MgCl2, 20 mM DTT ; Incubation optimale à 37ouC |
| Conditions d'inactivation | Chauffage à 65ouC pendant 15 minutes ou une ébullition pendant 2 minutes peut inactiver la T4 RNA Ligase 1. Alternativement, l'ajout d'une concentration finale de 50 mM EDTA pH 8,0 peut mettre fin à la réaction de la T4 RNA Ligase 1 |
Composants
| Composants Non. | Nom | 14651ES80 | 14651ES90 |
| 14651-A | T4 ARN ligase 1 (10 U/μL) | 500 μL | |
| 14651-B | 10×Tampon de réaction T4 RL1 | 200 μL | 1 ml |
Expédition et stockage
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