Description
ArCas12a, dérivé du système CRISPR de Agathobacter rectalis ArCas12a, une protéine monomérique constituée de 1263 acides aminés, est un membre de classe II (type V) du système CRISPR/Cas. ArCas12a fonctionne uniquement via une seule protéine effectrice et présente des différences significatives par rapport à Cas9, telles que le ciblage de motifs riches en T, ne nécessitant pas d'ARNr transactivant, produisant des extrémités collantes lors de cassures double brin d'ADN, participant au traitement de l'ARN et possédant une activité nucléase d'ADN.
ArCas12a ne possède pas de domaine HNH et peut utiliser indépendamment son domaine RuvC pour reconnaître la région PAM riche en thymine (T) à l'extrémité 5' de l'acide nucléique cible sous la direction de l'ARN CRISPR (crRNA), initiant ainsi le clivage de l'ADN cible. Il a été utilisé avec succès pour l'édition du génome chez de nombreux mammifères et plantes. De plus, ArCas12a présente une activité de clivage trans, capable de couper sans discrimination l'ADN simple brin non ciblé (ssADN) dans le système de réaction.
Comparé aux autres LbCas12a/AsCas12a, ArCas12a démontre une adaptabilité à la température plus élevée (25-55ouC), ce qui le rend adapté aux applications d’édition du génome et de détection d’acides nucléiques.
Caractéristiques
Large plage de températures de réaction: Présente une activité de clivage dans la plage de températures de 25 à 55ouC
Faible résidu de nucléase:Pas d'exonucléase, de nickase ou de RNase résiduelle
Activité de clivage cis:Clivage hautement efficace de l'ADN double brin in vitro
Activité de clivage trans: Activité de clivage trans élevée, adaptée à la détection d'acides nucléiques
Applications
Édition génétique CRISPR/Cas
Diagnostic et détection basés sur le système CRISPR/Cas
Autres applications de détection combinées aux technologies d'amplification isotherme des acides nucléiques (RPA et LAMP), etc.
Caractéristiques
| Source | Le gène Cpf1 de Agathobacter rectal est exprimé par expression recombinante dans E.coli |
| Poids moléculaire | 149 kDa |
| Séquence PAM | TTTN ou TTTV |
| Conditions de réaction | 50 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HCl, 10 mM de MgCl2, pH 7.9 @25ouC |
| Concentration | 10 µM |
| Pureté | >95% (SDS-PAGE) |
| Conditions d'inactivation | 85ouC, 5 à 10 minutes |
Composants
| Composants Non. | Nom | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | Nucléase ArCas12a (10 μM) | 100 μL | |
| 14702-B | 10×Tampon de réaction ArCas12a | 1 ml | 1 ml |
Expédition et stockage
Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 °C.ouC depuis 2 ans.
Chiffres
Chiffre 1. Test de l'activité de clivage cis d'ArCas12a : M : Marqueur ; C : Modèle d'ADN double brin (dsADN)
Note: Sous la direction du crRNA, il peut efficacement cliver l'ADNdb (600 pb) pour produire deux fragments (200 pb + 400 pb).
Chiffre 2. Résultats du test d'activité de clivage trans d'ArCas12a
Note: En utilisant l'ADN double brin comme cible, ArCas12a, l'ARNr et une sonde de rapport d'ADN simple brin (contenant un groupe de rapport fluorescent) ont été ajoutés pour le clivage in vitro. Une fois qu'ArCas12a forme un complexe avec l'ARNr et l'ADN cible, il active l'activité de clivage trans, coupant la sonde de rapport d'ADN simple brin, émettant ainsi une fluorescence.
Documents:
Fiche de données de sécurité
14702_FDS_Version EN20241205.pdf
Manuels
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