La nucléase AapCas12b (également connue sous le nom de C2c1) est une endonucléase d'ADN médiée par tracrRNA:crRNA (ou sgRNA), dérivée de la bactérie thermophile Alicyclobacillus acidophilusEn présence d'une séquence PAM (TTN) au niveau de l'ADN double brin (dsADN) cible, elle clive spécifiquement l'ADN double brin cible, provoquant des cassures double brin et générant des extrémités collantes. AapCas12b peut cliver spécifiquement des cibles d'ADN simple brin indépendamment de la séquence PAM. Les cibles d'ADN double brin et simple brin peuvent activer l'activité de clivage trans d'AapCas12b. Lorsque l'enzyme AapCas12b forme un complexe ternaire avec l'ARNsg et l'ADN cible, elle est activée pour une activité de clivage trans d'ADNss non spécifique, coupant toute séquence arbitraire d'ADNss dans le système. La température de réaction de clivage optimale pour AapCas12b est de 60^ouC, ce qui le rend plus résistant à la chaleur que l'AacCas12b et plus adapté à une utilisation avec LAMP pour développer des systèmes d'amplification isotherme/détection CRISPR-Cas.

Caractéristiques

Large plage de températures de réaction: Présente une activité de clivage dans la plage de température de 37~65^ouC

Faible résidu de nucléase:Pas d'exonucléase, de nickase ou de RNase résiduelle

Activité de clivage cis:Clivage hautement efficace de l'ADN double brin in vitro

Activité de clivage trans: Activité de clivage trans élevée, adaptée à la détection d'acides nucléiques

Applications

Édition génétique CRISPR/Cas

Diagnostic et détection basés sur le système CRISPR/Cas

Autres applications de détection combinées aux technologies d'amplification isotherme des acides nucléiques (RPA et LAMP), etc.

Caractéristiques

Composants

BateauPing et stockage

Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 °C.^ouC depuis 2 ans.

Chiffres

Chiffre 1. Vérification de l'activité de clivage cis de la nucléase AapCas12b

Note: Dans un 20 μSystème de réaction L contenant l'ADNds cible avec une séquence PAM, sgRNA, Cas12b et 1×tampon de réaction, le mélange a été incubé à 60^ouC pendant 30 minutes puis inactivé à 85^ouC pendant 5 minutes. Les résultats de l'électrophorèse sur gel d'agarose ont montré que trois lots de nucléase AapCas12b étaient tous capables de cliver efficacement l'ADNdb, avec une efficacité de clivage comparable à celle de la marque importée T*.

Chiffre 2. Résultats du test d'activité de clivage transnucléase AapCas12b

Note: Dans un 20 μSystème de réaction L contenant l'ADNdb cible avec une séquence PAM, l'ARNsg, Cas12b, la sonde fluorescente ADNss et 1×tampon de réaction, le mélange a été incubé à 60^ouC pendant 1 heure, et le signal de fluorescence a été collecté toutes les 30 secondes. Les résultats ont montré qu'en présence d'ADN cible, d'ARNsg et de Cas12b ensemble, la sonde fluorescente ssDNA Report pouvait être clivée, libérant ainsi le signal de fluorescence.

Documents:

Fiche de données de sécurité

14808_FDS_Version EN20241209.pdf

Manuels

14808_Manuel_Ver.EN20241209.pdf