Hieff NGS^MT UCF.ME Les billes de sélection d'ADN sont préparées selon le principe SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) et est applicable à la purification de l'ADN et à la sélection de la taille lors de la préparation des bibliothèques de séquençage de nouvelle génération (NGS). Hieff NGS^MT UCF.ME Les billes de sélection d'ADN sont compatibles avec divers kits de préparation de bibliothèques d'ADN et d'ARN. Ce produit est fabriqué dans une installation ultra-propre avec un niveau de propreté élevé et peut être utilisé pour l'étape de purification de l'ADN lors des processus de détection des agents pathogènes.

Caractéristiques

Composants

Stockage

Ce produit doit être conservé à 2~8℃ pendant 18 mois.

Expédition et stockage

Les perles sont expédiées avec des packs de glace et peuvent être conservées entre 2°C et 8°C pendant un an.

Instructions

• 1. Préparation

Équilibrer les billes de sélection à température ambiante pendant au moins 30 min avant utilisation.

• 2. Sélection de la taille de l'ADN

Le flux d’opération de sélection de taille est illustré dans la Figure 1 et le protocole est le suivant.

Figure 1. Organigramme de la sélection de la taille de l'ADN

2.1 Mélangez soigneusement les billes en les vortexant ou en les pipetant de haut en bas à chaque fois avant utilisation.
2.2 Ajoutez la première série de billes de sélection à l'échantillon (voir le tableau 1). Mélangez soigneusement en vortexant ou en pipetant de haut en bas au moins 10 fois.
2.3 Incuber à température ambiante pendant 5 min.
2.4 Centrifuger brièvement le tube et le placer sur un support magnétique. Lorsque la solution est claire (environ 5 min), transférer le surnageant dans un nouveau tube PCR.
2.5 Ajoutez la deuxième série de billes de sélection à l'échantillon de l'étape 2.4 conformément au tableau 1. Mélangez soigneusement en vortexant ou en pipetant de haut en bas au moins 10 fois.
2.6 Incuber à température ambiante pendant 5 min.
2.7 Centrifuger brièvement le tube et le placer sur un support magnétique. Lorsque la solution est claire (environ 5 min), aspirer le surnageant et le jeter.
2.8 Laissez le tube dans le support magnétique et ajoutez 200 μL d'éthanol à 80 % fraîchement préparé sans perturber les billes, incubez à température ambiante pendant 30 secondes. Aspirez l'éthanol et jetez-le.
2.9 Répétez l’étape 2.8 une fois pour un total de deux lavages.
2.10 Éliminez l'éthanol résiduel avec des pointes de pipette de 10 µL. Gardez le tube dans le support magnétique, séchez les billes de sélection à l'air libre avec le couvercle ouvert jusqu'à ce que des fissures apparaissent (environ 5 min).
Remarque : ne séchez pas trop les billes de sélection. Cela peut entraîner une récupération plus faible de l'ADN cible.
2.11 Retirez le tube du support magnétique. Ajoutez une quantité appropriée de ddH2O (≥ 20 µL) et mélangez soigneusement en vortexant ou en pipetant de haut en bas au moins 10 fois.
2.12 Incuber à température ambiante pendant 5 min.
Centrifuger brièvement le tube et le placer sur le support magnétique. Lorsque la solution est claire (environ 5 minutes), transférer 20 μL du surnageant dans un nouveau tube.

• 3. Conditions recommandées pour la sélection de la taille de l'ADN

L'ADN du thymus de veau a été fragmenté par sonication pour préparer un fragment de 100 à 1 000 pb, et deux cycles de sélection de taille ont été effectués conformément au tableau 1. Les résultats ont été analysés à l'aide du bioanalyseur Agilent 2100 (figure 2).

Tableau 1. Conditions recommandées pour la sélection de la taille de l'ADN

Remarque : « × » dans le tableau indique le volume de l'échantillon d'ADN. Par exemple, si la longueur d'insertion de la bibliothèque est de 250 pb et que le volume de l'échantillon d'ADN est de 100 μL, le volume de billes magnétiques utilisées lors du premier cycle de tri est de 0,80 × 100 μL = 80 μL ; le volume de billes magnétiques utilisées lors du deuxième cycle de tri est de 0,20 × 100 μL = 20 μL.

Figure 2. Électrophorégramme de la puce à ADN haute sensibilité Agilent 2100