Le Magnétique Résiduel ADN Échantillon Kit de préparation est approprié pour le prétraitement de résiduel ADN dans divers biologique échantillons. Il peut maximiser la séparation et la purification de traces d'ADN résiduel de cellules hôtes dans les échantillons en utilisant des billes magnétiques uniques et un système tampon optimisé.

Le Magnétique Kit de préparation d'échantillons d'ADN résiduel peut être utilisé avec une variété d'ADN résiduel de cellules hôtes kits de détection, y compris le kit de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes CHO (Cat#41301ES), Kit de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes HEK293 (Cat#41302ES), Kit de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes Vero (Cat#41303ES), et kit de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes d'E.coli (Cat#41304ES).

Composants du produit

Expédition et stockage

1. La partie I est expédiée avec un pack de glace, 4°C pendant 1 an ou -20°C pour un stockage longue durée.

2. La partie II est expédiée à température ambiante et conservée 1 an à température ambiante.

3. La partie III est expédiée sur de la glace sèche et stockée à -20°C depuis 1 an.

4. Après avoir reçu la marchandise, veuillez vérifier si les trois composants de la partie I, de la partie II et de la partie III sont complets et les stocker immédiatement à la température de stockage correspondante.

Précautions

1. Veuillez lire attentivement le manuel d'instructions avant utilisation et respectez scrupuleusement les instructions. Il est recommandé d'effectuer le traitement des échantillons sur une paillasse propre ou dans une enceinte de sécurité biologique.

2. Faites attention à observer s'il y a une précipitation ou une turbidité de la solution stockée à température ambiante (en particulier lorsque la température ambiante est basse comme en hiver), vous pouvez prendre un bain-marie à 37°C jusqu'à ce que la solution soit claire pour éviter d'affecter l'effet d'utilisation.

3. Il peut y avoir des billes magnétiques résiduelles pendant l'élution, essayez donc d'éviter d'aspirer des billes magnétiques lors du prélèvement d'échantillons.

4. Veuillez changer fréquemment les embouts pour éviter toute contamination croisée lors de l'utilisation de ce produit.

5. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter un équipement de protection individuelle (EPI), tel que des blouses de laboratoire et des gants jetables, lorsque vous utilisez ce produit.

6. Ce produit est destiné à la recherche UNIQUEMENT !

Pré-préparation

1. Équipement auto-fourni : agitateur vortex, bain-marie ou bain métallique, centrifugeuse, support de séparation magnétique, extracteur d'acide nucléique automatique Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A ou autres marques d'extracteur d'acide nucléique entièrement automatique.

2. Consommables fournis par l'utilisateur : 10μL-1000μL embouts de filtre à faible adsorption, tubes à centrifuger à faible adsorption de 1,5 ml, tubes PCR ou plaques à 96 puits et bouchons de tubes ou membranes correspondants.

3. Réactifs auto-préparés : éthanol absolu (qualité analytique), tampon PBS 1× (pH 7,4, sans ions Mg et Ca), eau ultrapure.

4. Pour la première utilisation, ajouter de l'éthanol anhydre du volume indiqué sur l'étiquette ou dans la notice aux flacons de Solution de Lavage A* et de Solution de Lavage B*, Bien mélanger avant utilisation et bien marquer. Bien boucher le flacon après utilisation pour maintenir le niveau d'éthanol dans le flacon.

Extraction manuelle d'ADN résiduel

1. Traitement des échantillons

1.1 Si l'échantillon contient une teneur en ADN relativement élevée, comme un vaccin, veuillez le diluer dans une proportion appropriée avec un tampon PBS 1× (pH 7.4, sans ions Mg et Ca) puis extraire (la dilution de l'échantillon vise à faire en sorte que la valeur de détection se situe dans la plage linéaire de la courbe standard et à garantir ainsi la précision de la détection. En général, une dilution de 100 fois peut être envisagée).

1.2 Si l'échantillon à tester est une poudre sèche, diluez-la pour 10 mg/mL ou 100 mg/mL avec eau ultra pure avant utilisation.

1.3 Si l'échantillon a une matrice complexe, une expérience d'ajout et de récupération standard doit être effectuée pour déterminer la dilution appropriée.

2. Ajoutez 100 μL d'échantillon dans un tube de 1,5 mL, puis ajoutez 100 μL de tampon de lyse, 10 μL de protéinase K, vortexez et mélangez pendant 10 secondes.

[Remarques] : Ajoutez 10 μL de protéinase K si la concentration de l'échantillon de protéines est de 0 à 100 mg/mL, et ajoutez 20 μL de protéinase K si la concentration de l'échantillon de protéines est de 100 à 200 mg/mL.

3. Incuber à 60°C pendant 20 minutes.

4. Ajoutez ensuite 400 μL de la solution de liaison, 9 μL de glycogène et 6 μL de sel de potassium Poly A, puis vortexer et bien mélanger.

5. Ajoutez 20 μL de billes magnétiques, vortexez et mélangez bien, puis laissez reposer pendant 10 minutes. Veuillez vortexer et mélanger pendant 10 secondes toutes les 3 minutes.

[Remarques] : Les billes magnétiques doivent être agitées au vortex avant utilisation pour garantir une remise en suspension complète. Après avoir ajouté des échantillons 4 à 5 fois à la fois, il est recommandé de mélanger à nouveau.

7. Centrifuger brièvement pour faire descendre la solution et placer le tube à centrifuger sur le support magnétique pendant 1 à 2 minutes. Une fois les billes magnétiques complètement absorbées, retirer soigneusement le liquide.

8. Ajouter 500 μL de solution de lavage A (veuillez vérifier si de l'éthanol absolu a été ajouté avant utilisation), agiter ou vortexer pour mélanger afin de s'assurer que les billes magnétiques sont dispersées et qu'aucune bille magnétique n'est agrégée sur la paroi du tube à centrifuger.

9. Centrifuger brièvement et placer le tube à centrifuger sur un support magnétique pendant 1 à 2 minutes. Une fois les billes magnétiques complètement absorbées, retirer soigneusement le liquide.

10. Ajouter 500 μL de solution de lavage B (veuillez vérifier si de l'éthanol absolu a été ajouté avant utilisation), agiter ou vortexer pour mélanger afin de s'assurer que les billes magnétiques sont dispersées et qu'aucune bille magnétique ne s'agrège sur la paroi du tube à centrifuger.

11. Centrifuger brièvement et placer le tube à centrifuger sur un support magnétique pendant 1 à 2 minutes. Une fois les billes magnétiques complètement absorbées, retirer soigneusement le liquide.

12. Pour éliminer le plus possible le liquide résiduel, centrifugez le tube pendant 10 secondes. rapidement, placez-le sur un support magnétique et utilisez une pipette de 10 μL pour aspirer le liquide résiduel.

13. Ouvrir le bouchon du tube et le laisser à température ambiante pendant 3 minutes jusqu'à ce que l'éthanol s'évapore complètement. L'absence de reflet ou de fissures à la surface des billes magnétiques indique que l'éthanol s'est complètement évaporé.

14. Retirer le tube du support magnétique, ajouter 50 à 100 µL d'éluat préchauffé à 65°C, agiter et bien mélanger. Centrifuger ensuite brièvement, incuber à 65°C pendant 5 minutes, agiter et mélanger une fois toutes les 2 à 3 minutes.

15. Centrifuger à nouveau brièvement, placer le tube à centrifuger sur un support magnétique pendant 2 minutes. Une fois les billes magnétiques complètement adsorbées, transférer soigneusement la solution d'ADN dans un nouveau tube à centrifuger et le conserver à -20 °C, ou à -80 °C pour un stockage à long terme.