Le kit est équipé d'un tampon de lyse puissant, qui peut lyser rapidement des échantillons (par exemple des cellules, une queue de souris, une oreille de souris, un orteil de souris, un muscle, etc.) pour libérer l'ADN génomique, et le lysat peut être directement ajouté au système de réaction PCR sans purification, ce qui est pratique pour le fonctionnement. De plus, ce kit nécessite un faible apport d'échantillon, 5 mg de tissu de souris ou 1 à 5 mm de queue de souris peuvent être utilisés pour les expériences.

Composants

Stockage

19697-A (Solution de lyse) doit être conservée à 2~8℃ pour 1 années. En cas d'utilisation multiple, veuillez congeler dans des emballages séparés pour éviter toute contamination croisée. 19687-B (solution d'arrêt) devrait être stocké à -25~-16℃ pour 1 années.

Instructions

Libération de l'ADN génomique de la souris

1. Prélevez 5 à 10 mg de tissu animal ou 1 à 5 mm de queue de souris dans un tube à centrifuger de 1,5 mL*.
2. Ajoutez 90 μL de tampon ML au tube à centrifuger ci-dessus, vortexez doucement pour infiltrer complètement l'échantillon avec le lysat et centrifugez brièvement.
3. Incuber à 95°C pendant 15 min dans un incubateur thermostatique**.
4. Ajoutez 10 μL de tampon MT, agitez pour mélanger et terminez la lyse.
5. Étape facultative : centrifugation à 12000 tr/min pendant 2 min.
6. Transférez le surnageant dans un nouveau tube à centrifuger et conservez-le à 4°C ou -20°C ou prélevez le surnageant directement pour une amplification PCR ultérieure.

* Les tissus doivent être coupés autant que possible pour permettre à la réaction de lyse de se dérouler plus facilement.

**Une incubation à 95 °C pendant 15 minutes est généralement suffisante pour la plupart des besoins de PCR. Si une plus grande quantité d'ADN est nécessaire ou si l'échantillon est difficile à lyser, le temps peut être prolongé jusqu'à 30 minutes. Le bloc de tissu n'a pas besoin d'être complètement lysé et le résidu peut être éliminé lors d'une étape de centrifugation ultérieure.

Libération de l'ADN génomique cellulaire

Après avoir cultivé les cellules transfectées dans une plaque à 48 puits pendant 3 jours et atteint une densité cellulaire d'environ 70 000 cellules/puits, retirez le milieu aussi complètement que possible. Ajoutez ensuite 90 µl de tampon ML directement par puits et pipetez chaque puits. Transférez le tout dans la plaque PCR à 96 puits. Après traitement avec une machine PCR à 95 °C pendant 5 à 15 min et refroidissement, ajoutez 10 µl de tampon MT et soufflez uniformément et soigneusement. À l'aide d'une enzyme haute fidélité (Cat# 10164) ou d'une enzyme Taq, ajoutez 0,5 à 2 µl de lysat cellulaire à chaque 50 µl de système de réaction PCR et effectuez la PCR.

Figure 1. PCR directe avec lysat cellulaire traité avec 19697.

Remarques

1. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
2. Veuillez travailler avec des lunettes de protection, des blouses de laboratoire et des gants jetables pour votre sécurité.
3. Afin d'éviter toute contamination croisée entre les échantillons, il est nécessaire d'immerger le bord du dispositif d'échantillonnage ou la partie en contact direct avec l'échantillon dans une solution d'hypochlorite de sodium à 2 % après chaque échantillonnage, de le laver plusieurs fois, puis de sécher le liquide résiduel avec un essuie-tout propre avant de le réutiliser.Pour faciliter le test, plusieurs dispositifs d'échantillonnage peuvent être préparés et nettoyés uniformément après utilisation afin de garantir que chaque échantillon individuel est échantillonné avec un dispositif d'échantillonnage sans contamination.
4. Il est recommandé d'utiliser des tissus animaux fraîchement prélevés. Dans le cas de tissus congelés à long terme, il convient d'éviter autant que possible les congélations et décongélations répétées, sinon cela entraînerait une dégradation du modèle et affecterait l'efficacité de la PCR.

Documents:

Manuels