Les billes de concanavaline A (ConA) sont des microsphères polymères superparamagnétiques qui ont été couplées de manière covalente à la concanavaline A (une lectine végétale liant le mannose/glucose isolée à partir des graines de plantes céréalières) à leur surface. Ces perles posséder plusieurs caractéristiques notables, notamment la monodispersité et une forte réactivité magnétique. Lorsque Ca²⁺ et Mg²⁺ Si des ions sont présents, les billes magnétiques ConA peuvent séparer et purifier efficacement et rapidement diverses biomolécules telles que les polysaccharides, les glycoprotéines et les glycolipides en utilisant l'affinité entre la globuline A ConA et les groupes terminaux α-D-mannose et α-D-glucose.

Les billes magnétiques ConA offrent une méthode pratique pour séparer ou fixer les cellules, garantissant une perte minimale de cellules lors des étapes de lavage ultérieures. De plus, elles peuvent être utilisées pour la collecte et la fixation des noyaux. De plus, ces billes trouvent une utilité dans des techniques innovantes telles que CUT & Run et CUT & Tag, qui sont des approches révolutionnaires utilisées dans les expériences ChIP-seq.

En résumé, les billes magnétiques ConA sont des outils puissants pour la purification efficace des biomolécules, la séparation et la fixation pratiques des cellules, la collecte des noyaux et l'application dans des techniques expérimentales de pointe.

Caractéristiques

Caractéristiques

Figures et tableaux

Tableau 1. Les billes Yeasen ConA ont un taux de capture élevé. La quantité de concanavaline A (ConA) utilisée par rapport aux microsphères a été vérifiée pour assurer une capacité de liaison maximale tout en empêchant l'agrégation excessive des billes magnétiques après la liaison cellulaire dans les expériences CUT&Tag. Par exemple, l'utilisation de 10 μL de billes recouvertes de ConA peut lier une quantité de cellules équivalente aux niveaux E7, avec une efficacité de liaison supérieure à 98 %.

Figure 1. Les billes Yeasen ConA présentent une forte dispersité. Dans le processus de marquage des billes, un agent d'étanchéité non biologique a été choisi pour assurer une fermeture efficace sans être affecté par les variations d'un lot à l'autre. Cela garantit une excellente étanchéité des billes magnétiques, préservant leur monodispersité élevée pendant le stockage des billes recouvertes de ConA, ce qui est bénéfique pour une liaison efficace aux molécules de glucides dans les expériences ultérieures.

Figure 2. Distribution du signal de chromatine CUT&Tag à l'aide de billes Yeasen Con A.

Stockage

Ce produit doit être conservé entre 2 et 8 °C pendant 2 ans.

Instructions

Les opérations suivantes prennent comme exemple la purification des glycoprotéines ou l'isolement des cellules. COUPER ET ÉTIQUETER expériences , voir Yeasen Cat# 12598ES pour le protocole.

1. Préparation des tampons

1) Fourni par le client

1. Matériel requis non inclus : support magnétique, tubes Eppendorf, tubes PCR, supports magnétiques, thermocycleurs etc.
2. Équilibrer le Perles à température ambiante pendant au moins 30 min.Remettre soigneusement les billes en suspension en vortexant ou en secouant le flacon.

1. Manipulation des échantillons（ en prenant les cellules de mammifères comme exemple ）

1. Préparer des cellules de mammifères (1,0 × 10 ⁴~1.0×10 ⁵ cellules), centrifuger (4℃，600×g, 3~5 min) et soigneusement jeter le surnageant.
2. Ajouter 140 μL de tampon de liaison, bien mélanger et remettre les cellules en suspension, centrifuger et collecter (4℃，600×g, 3~5 min), soigneusement jeter le surnageant.
3. Ajouter 90 μL de tampon de liaison, bien mélanger et remettre les cellules en suspension.
   Attention : Des cellules de mammifères fortement adhérentes peuvent être obtenues par digestion partielle à l'aide d'une enzyme comme la trypsine. Pour les tissus animaux, les cellules végétales ou les cellules fongiques, l'obtention de cellules dispersées ou de protoplastes nécessite souvent des traitements spéciaux adaptés à leurs caractéristiques spécifiques.

1. Préparez les billes ConA

1. Pipeter doucement les billes ConA pour les mettre complètement en suspension, placer 10 μL de la suspension de billes dans un nouveau tube à centrifuger de 200 μL.
2. Ajouter 40 μL de tampon de liaison, bien mélanger et laisser reposer sur le support magnétique pendant 1 min et jeter le surnageant une fois que les billes magnétiques se sont adsorbées sur la paroi latérale du tube à centrifuger.
3. Ajouter 10 μL de tampon de liaison, bien mélanger et remettre en suspension les billes ConA.

1. Exemple de reliure

1. Ajoutez l'échantillon de cellules préparé aux billes prétraitées, pipettez doucement les billes remises en suspension, puis incubez sur un mélangeur inversé (température ambiante 30 min ou 4℃ pendant la nuit).
2. Placer sur un support magnétique pendant 1 min, attendre que les billes magnétiques s'adsorbent sur la paroi latérale du tube à centrifuger, puis jeter soigneusement le surnageant.
3. Ajouter 500 μL de tampon d'élution pour le complexe cellules-billes ConA et Pipeter doucement pour remettre les billes en suspension, puis Placer sur un support magnétique pendant 1 min, attendre que les billes magnétiques s'adsorbent sur la paroi latérale du tube à centrifuger, puis jeter soigneusement le surnageant.
4. Répétez l’étape 3) trois ou quatre fois supplémentaires.

1. Élution

1. Pour les glycoprotéines, ajouter 50 à 250 μl de tampon d'élution, pipeter délicatement les billes remises en suspension, puis incuber sur un mélangeur inversé (à température ambiante pendant 10 à 30 min). Après le mélange inversé, laisser reposer sur un support magnétique pendant 1 min, recueillir le surnageant dans un nouveau tube de 1,5 ml pour l'étape SDS-PAGE ou Western blot.
2. Pour la cellule, pas besoin d'élution.

Remarques

1. Équilibrer le ConA perles à température ambiante avant utilisation.
2. Eviter le gel, sinon dégradation du matériau des billes ou perte d'activité.
3. ConA nécessite la présence d'ions Ca2+ et Mn2+ pour être actif, donc les réactifs contenant de l'EDTA ou d'autres chélateurs d'ions métalliques doivent être évités pendant l'expérience.
4. Lorsqu'elles sont incubées avec des cellules, les billes ConA peuvent s'agréger, ce qui est normal et n'affecte pas l'utilisation normale des billes magnétiques.
5. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
6. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables, pour votre sécurité.

Manuel