Le gel de polyacrylamide (gel PAGE) est souvent utilisé pour l'électrophorèse des protéines afin de réaliser la séparation des protéines. Ce type de gel est généralement composé d'un gel concentré et d'un gel de séparation. Le premier joue le rôle de concentrer les échantillons de protéines, tandis que le second sépare les protéines de différentes tailles en fonction de la concentration du monomère d'acrylamide et de l'agent de réticulation N,N-méthylènebisacrylamide (méthylèneacrylamide) utilisé dans le gel.

Ce kit fournit une variété de réactifs nécessaires à la préparation rapide du gel PAGE. Les utilisateurs n'ont besoin que de préparer leur propre équipement de préparation de gel pour préparer le gel, ce qui simplifie grandement le processus de préparation du gel. Le gel préparé par ce kit ne peut être utilisé que pour l'électrophorèse sur gel PAGE dénaturante. Cette spécification permet de préparer environ 125 pièces de mini-gel (calculé par un gel de 0,75 mm d'épaisseur).

Caractéristiques

Composants

Expédition et stockage

Le produit est expédié avec un pack de glace et peut être stocké à 2°C~8°C depuis 1 an.

Instructions: Il est recommandé de ne pas configurer trop de morceaux de gel à la fois pour éviter d'ajouter la solution supérieure trop tard (2 à 3 morceaux sont recommandés au maximum)

1. Sélectionnez la concentration de gel appropriée en fonction du poids moléculaire de la protéine cible (voir tableau 1)

2. Processus de fabrication du gel (prenez un morceau de mini gel de 0,75/1,0/1,5 mm comme exemple)

2.1 Prenez un volume égal de tampon de gel de séparation et de solution de gel de séparation et mélangez-les, c'est-à-dire prenez respectivement 2,0/2,7/4,0 mL des deux solutions.

2.2 Pesez 0,1 g de persulfate d'ammonium et dissolvez-le dans 1 ml d'eau déionisée. Le client doit acheter lui-même le persulfate d'ammonium.

2.3 Ajoutez 35/45/70 μL d’APS à la solution mélangée à l’étape 1 (la quantité d’APS utilisée peut être réduite de moitié si la solidification est trop rapide) et mélangez complètement.

2.4 Injectez la solution de l'étape 2 dans la plaque de verre de fabrication du gel. Notez que le gel concentré doit être injecté dans le moule à gel dans les 2 minutes suivant l'ajout du gel de séparation, et le versement du gel concentré doit être lent pour éviter le mélange du gel concentré et du gel de séparation. Si l'individu a des difficultés à configurer, il peut également être adapté pour configurer le gel concentré après scellement avec de l'éthanol.

2.5 Préparation du gel concentré : prenez un volume égal de tampon de gel concentré et de solution de gel concentrée, c'est-à-dire prenez respectivement 0,5/0,75/1,0 mL des deux solutions, puis ajoutez 10/13/18 μL d'APS et mélangez bien.

2.6 Injectez-le dans la plaque de verre de fabrication du gel et insérez les dents du peigne (n'utilisez pas de force excessive pour insérer les dents du peigne en douceur).

2.7 Une fois le gel concentré solidifié pendant 15 min, les dents du peigne peuvent être retirées et utilisées pour l'électrophorèse. Remarque : essayez d'utiliser un tampon d'électrophorèse fraîchement préparé.

Remarques

1. Il est suggéré que la tension pendant l'électrophorèse soit comprise entre 100 et 120 V. S'il est nécessaire d'accélérer la vitesse de l'électrophorèse, elle peut être augmentée à 150 V.

2. Avant le remplissage du gel, assurez-vous d'équilibrer la solution de gel à température ambiante (par exemple, conservez-la pendant plusieurs minutes) pour éviter efficacement la formation de bulles dans le gel.

3. Le client doit acheter lui-même le persulfate d'ammonium. Nous recommandons d'utiliser le produit portant la référence Cat#A3678 de Sigma.

4. La quantité de solution de persulfate d'ammonium est uniquement à titre indicatif et la quantité réelle peut être augmentée ou diminuée en fonction des habitudes expérimentales et de l'expérience personnelle. L'ajout de persulfate d'ammonium peut accélérer la vitesse du gel, et vice versa. La vitesse de coagulation du gel PAGE est étroitement liée à la température et à la quantité de persulfate d'ammonium.

5. Une quantité appropriée de substituts TEMED a été ajoutée à ce produit. S'il est nécessaire d'accélérer davantage la vitesse du gel, une quantité appropriée de TEMED peut être ajoutée selon les besoins avant la distribution.

6. Il existe une corrélation positive significative entre la solidification du gel et la température. Dans les mêmes conditions, plus la température est élevée, plus la vitesse de solidification est rapide.

7. Le gel concentré coloré peut produire une petite quantité de précipitation pendant le stockage, ce qui est un phénomène normal. N'hésitez pas à l'utiliser.

8. L'APS a été stocké à -20°CPour plus de commodité, l'APS qui a été ouvert et qui est en cours d'utilisation peut être stocké à 4°C.

9. Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité！

10. À usage de recherche uniquement !

Tableau 1 Plage de séparation de référence du gel SDS-PAGE avec différentes concentrations

Documents:

Fiche de données de sécurité

20325-A-MSDS-CN20250110

20325-B-FDS-CN20250110

20325-C-FDS-CN20250110

20325-D-FDS-CN20250110

Manuels

20325_Manuel_CN20241218_FR

Citations et références :

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