Description
La protéase SUMO reconnaît la protéine étiquetée SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) complète avec 100 acides aminés et sépare efficacement le SUMO de la protéine de fusion. Par rapport aux sites de reconnaissance d'EK et de TEV, la protéase SUMO a une spécificité élevée en raison de sa longue séquence de reconnaissance et maintient une activité élevée dans une large gamme de systèmes environnementaux de réaction, tels que la température (4-30℃), le pH (5,5-9,5), etc. La protéase SUMO possède également un marqueur His polymérisé, ce qui est pratique pour éliminer la protéase SUMO et purifier la protéine cible par chromatographie d'affinité.
Caractéristiques
| N° de cat. | 20410ES60 / 20410ES70 / 20410ES80 |
| Taille | 100 U / 500 U / 1000 U |
| Activité enzymatique | 1 U/μL |
| Unité Définition | La quantité d'enzyme nécessaire pour couper >85 % du substrat de 3 μg dans un tampon 1×rTEV (50 mM Tris, pH 8,0, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT) à 30 ℃ pendant 1 h a été défini comme une unité d'activité |
| Source | Exprimé en Escherichia coli |
| Étiquette | Polymérisé Son étiquette |
| Pureté des protéines | > 90% |
| Poids moléculaire | 26,55 kDa |
| Stockage Tampon | 25 mM de Tris-HCl, pH 8,0、0,1 % d'Igepal (NP-40)、250 mM de NaCl、500 μM de DTT、50% de glycérine |
Composants
Note：La définition de l'activité enzymatique utilise un tampon de protéase 10× (-sel). La protéase SUMO a une activité relativement élevée dans Tampon de protéase 10× (-sel), mais pour les substrats instables, un tampon de protéase 10× (+ sel) doit être sélectionné. Nous fournissons également le tampon de réaction 20410-B2 avec + sel.Choisissez le tampon adapté à votre expérience. 20410-B2：500 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 2% Igepal (NP-40), 1,5 M de NaCl, 10 mM de TNT；20410-B1：500 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 2% Igepal (NP-40), 10 mM de TNT. | ||||||||||||||||||||
Stockage
Ce produit doit être conservé à -85~-65℃ pendant 1 an.
Instructions
- Le système réactionnel suivant est formulé dans le tube EP :
- Incuber à 30℃, aspirer 20 μL de la solution de réaction ci-dessus à 1, 2, 4 et 6 heures dans un tube EP séparé respectivement.
- Ajouter 20 μL de 2×FDS charger le tampon dans le tube EP et le placer à -20℃.
- Une fois la réaction de tous les échantillons terminée, ceux-ci ont été bouillis pendant 5 min et 30 μL ont été prélevés pour analyse SDS-PAGE. Déterminer le temps de réponse optimal.
| Composants | Volume (μL) (Le système de réaction peut être réduit de manière égale) |
| Protéine de fusion | 50 μg |
| Tampon de protéase 10× | 20 μL |
| Protéase SUMO (1U/μL) | 10 μL |
| ddH2O | jusqu'à 200 μL |
Note: Si la protéine de fusion nécessite un traitement à basse température, la solution de réaction peut être placée à 4℃ pour prolonger le temps de réaction et augmenter la quantité d'enzyme SUMO pour assurer l'effet de la digestion enzymatique.
Tableau 1. SUMO Protéase activité de digestion à différentes températures
| Incubation Temps（h） | Activité de digestion à différentes températures (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 25°C | 30℃ | |
| 0,5 | 48 | 73 | 83 | 88 |
| 1 | 60 | 87 | 90 | 93 |
| 2 | 71 | 94 | 94 | 95 |
| 3 | 74 | 95 | 95 | 95 |
Remarques
1. Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité.
2. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
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