Le kit de substrat chimioluminescent ECL amélioré est conçu pour détecter les anticorps et les antigènes associés directement ou indirectement marqués à la peroxydase de raifort (HRP). Le principe du kit de substrat chimioluminescent ECL amélioré est le suivant : les protéines ou les acides nucléiques ont été transférés sur la membrane imprimée après électrophorèse, et les protéines cibles sur la membrane ont été liées par un anticorps primaire et un anticorps secondaire marqués à la HRP, ou les acides nucléiques sur la membrane ont été liés directement ou indirectement par des sondes marquées à la HRP. Après lavage de la membrane, la solution de travail ECL préparée par le produit a été utilisée pour incuber la membrane à température ambiante pendant plusieurs minutes. La membrane imprimée a été enveloppée d'une pellicule plastique et fixée à la cassette d'exposition aux rayons X. Ensuite, le film radiographique est pressé sur la membrane dans une chambre noire et exposé pendant plusieurs secondes à plusieurs heures. Après développement et fixation, les bandes de protéines ou d'acides nucléiques peuvent être clairement affichées sur le film radiographique.

Ce kit est doté d'un système de substrat luminescent unique, réduisant le bruit de fond d'exposition tout en introduisant un nouvel oxydant qui améliore considérablement la stabilité du kit, lui permettant d'être stable à température ambiante jusqu'à un an. En plus des rayons X, le balayage CCD fluorescent peut également être directement utilisé principalement pour la détection WB et le système de détection immunitaire par chimioluminescence.

Caractéristiques

Haute sensibilité et rapport signal/bruit élevé, il peut détecter des antigènes de qualité moyenne.

Brille rapidement et intensément, la bande de film imprimée peut être observée sous une lampe fluorescente.

Les échantillons de protéines conventionnels sont particulièrement adaptés à la détection d'une abondance de cible plus élevée.

Nouvel oxydant, stable à température ambiante jusqu'à un an.

Applications

ELISA par chimiluminescence

Western Blot

Dot Blot - ADN/ARN

Southern blot-ADN

Northern blot-ARN

Caractéristiques

Composants

Expédition et stockage

Le produit est expédié à température ambiante et peut être conservé à température ambiante pendant un an. S'il n'est pas utilisé pendant une longue période, il est recommandé de le conserver à 2°C~8°C pour prolonger la période de validité.

Remarques : Le 36222-A doit être conservé à l’abri de la lumière !

Instructions (film radiographique, par exemple)

1. Électrophorèse de routine, membrane de transfert, anticorps marqué avec HRP ou sonde d'acide nucléique marquée avec HRP, incubation et membrane de lavage.

Remarques : La solution luminescente ECL est le substrat coloré de l'HRP. Le système de détection doit donc être basé sur un anticorps marqué à l'enzyme HRP ou sur une sonde d'acide nucléique.

2. Au même moment du dernier lavage de la membrane, la solution de travail luminescente a été préparée fraîche (100-200 μL de solution de travail luminescente/cm2 de membrane) : prendre le même volume de réactif A et B, bien mélanger pour une utilisation ultérieure.

Remarques : Pour prendre le réactif A et le réactif B, il faut utiliser des embouts différents. Il est recommandé d'utiliser le liquide de travail immédiatement. Il peut encore être utilisé après quelques heures à température ambiante, mais la sensibilité est légèrement réduite.

3. Utilisez une pince plate pour retirer la membrane, placez-la sur du papier filtre pour égoutter la lotion, ne laissez pas la membrane sécher complètement. Plongez complètement la membrane dans la solution de travail luminescente, en contact suffisant avec le liquide de travail luminescent. Incubez à température ambiante pendant 1 à 2 minutes et préparez immédiatement l'exposition au comprimé.

4. Prenez la membrane avec une pince à épiler et posez-la sur du papier filtre pour évacuer le liquide luminescent. Mais ne lavez pas le liquide luminescent.

5. Posez un morceau de film plastique plus grand que la membrane sur la surface intérieure de l'obscura du film radiographique. Fixez la membrane imprimée sur le film plastique, pliez complètement le film plastique autour de la membrane imprimée, retirez la bulle de gaz et pliez, puis coupez le bord de l'excédent de film plastique. Utilisez du papier filtre pour aspirer l'excès de liquide de travail lumineux. Fixez le film plastique recouvrant la membrane imprimée dans l'obscura avec du ruban adhésif, la bande protéique tournée vers le haut.

6. Un morceau de film radiographique a été retiré de la chambre noire et placé sur la membrane enveloppée. Le film a été pressé et exposé pendant 30 secondes à 2 minutes. Le film a ensuite été développé et fixé.

Remarques : Le temps d’exposition doit être ajusté en fonction de l’intensité de l’exposition.Si le fond est trop élevé, utilisez deux films radiographiques en même temps.

Autres méthodes d’exposition

En cas d'utilisation de la photographie CCD : la membrane peut être placée dans le fluide de travail, après le démarrage selon l'utilisation des instructions, retirer le film, prendre des photos. De plus, les paramètres de mesure de la machine peuvent être ajustés en fonction de la situation pour améliorer le rapport signal/bruit.

Remarques

1. Les bulles doivent être évitées lors du transfert, du scellage et de l'incubation de la membrane. De plus, le port de gants permettra d'éviter de laisser des empreintes digitales sur la membrane et de la garder propre.

2. Une exposition prolongée ou un excès de protéines approfondira l'arrière-plan et entraînera une perte de linéarité dans le changement de force de bande. Une sous-exposition rendra les bandes floues.

3. Certains films plastiques peuvent atténuer la fluorescence lors de l'emballage de la membrane imprimée. Il convient de choisir un film plastique de haute qualité.

4. Évitez de placer plusieurs membranes dans la même boîte de lavage à membrane, car l'adsorption ou la friction mutuelle peut provoquer un arrière-plan profond.

5. La position et la taille des bandes sur le film peuvent être déterminées avec précision à l'aide de marqueurs protéiques pré-colorés visibles et d'étiquettes d'exposition par autoradiographie fluorescente.

6. Utilisez un système biotine-avidine et évitez d'utiliser du lait fermenté, ce qui peut entraîner un bruit de fond trop élevé.

7. Les particules d'oxyde métallique peuvent provoquer des taches granuleuses sur la membrane. Évitez d'utiliser des ciseaux et des pinces rouillées. Utilisez des pinces plates en plastique.

8. L'azoture de sodium (NaN3) peut inhiber l'activité HRP, si la récupération de la sonde ou de l'anticorps marqué HRP doit éviter d'utiliser NaN3, si nécessaire, pas plus de 0,01 %.

9. Ce produit n'a pas de toxicité particulière, selon le traitement chimique courant.

10. Veuillez porter l'EPI nécessaire, comme une blouse de laboratoire et des gants, pour assurer votre santé et votre sécurité！

11. À usage de recherche uniquement !

Documents:

Fiche de données de sécurité

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Manuels

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