La protéine A naturelle est une protéine de surface de la paroi cellulaire trouvée dans Staphylococcus aureus, elle est similaire à la protéine G isolée du genre G ou C Streptocoque, lier la plupart mammifère IgG par en interaction principalement avec le Fc région Les protéines A et G se lient aux différentes sous-classes d'immunoglobulines (Ig), mais diffèrent par leur spécificité de liaison. Elles peuvent être utilisées pour la séparation et la purification de divers anticorps (anticorps monoclonaux et anticorps polyclonaux). Les protéines A et G diffèrent par leurs propriétés de liaison à différentes sous-classes d'immunoglobulines (voir l'annexe 1 pour plus de détails).
Ce produit utilise une protéine A génétiquement modifiée, qui non seulement conserve ses propriétés d'affinité Ig, mais supprime également le domaine de liaison non majeur de la protéine naturelle afin de réduire la liaison non spécifique. La résine d'agarose SuRi rProtein A, composée d'un gel d'agarose hautement réticulé comme matrice et d'une protéine A recombinante alcali-résistante modifiée comme ligand, présente une stabilité physico-chimique élevée. Ce produit, facile d'utilisation et largement répandu, permet d'obtenir des anticorps de haute pureté à partir d'échantillons d'ascite, de sérum et de milieu de culture par chromatographie d'affinité en une étape.

Composants

Caractéristiques

Expédition et Stockage

Les produits sont expédiés avec un pack de glace.   Il peut être stocké de manière stable à 2~8℃ depuis 5 ans.

Instructions

1. Préparation du tampon

Il est recommandé de suivre les recommandations suivantes les tampons doivent être filtrés avec une membrane filtrante de 0,22 μm ou 0,45 μm avant utilisation. Tampon d'équilibrage/liaison/lavage : 0,15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7,0

Tampon d'élution : 0,1 M de glycine, pH 3,0

Tampon neutralisant : 1 MTris-HCl, pH 8.5

2. Préparation des échantillons

Assurer que le échantillon solution a le approprié ionique force et pH avant chargement le colonne, soit par diluer l'échantillon de sérum, l'ascite ou la solution de culture cellulaire avec un tampon de liaison/lavage, ou par dialyse de l'échantillon avec un tampon de liaison/lavage.

3. Garnissage de colonne

Charger la protéine SuRi UN Résine d'agarose dans une colonne chromatographique appropriée, en prenant soin d'éviter les bulles.

4. Purification des échantillons

1) Équilibre : La colonne chromatographique est équilibré avec un obligatoire Tampon de 5 fois le colonne volume, donc que l'emballage est dans le même système tampon que la protéine cible et joue le rôle de protection de la protéine.

2) Échantillon chargement: Le échantillon était chargé à le bien équilibré rProtéine UN Agarose Résine à assurer complet contact entre la protéine cible et la résine, améliorer la récupération taux de la protéine cible et collecter l'effluent pour être testé.

3) Lavage : Laver avec 10 à 15 fois plus colonne volume de la lavage Tampon, retirer le impureté protéine sauf si spécifiquement adsorbé, récupérer la solution de lavage.

4) Élution : Élution avec 5 à 10 fois colonne volume de la élution Tampon, collecter éluant, que est, le cible protéine composant.

5) Nettoyage CIP et préservation: En général utiliser 0,1-0,5 M NaOH supérieur à 3 CV, et le contact temps est 15 min; Alors rincer avec la solution d'équilibrage 5CV jusqu'à neutralité. Enfin, c'est équilibré à 20% l'éthanol de 5 fois la colonne volume, et alors stocké  dans 20%  l'éthanol  de le  même  volume  à  4°C  à  prévenir  le  emballage  depuis  être contaminé par des bactéries.

5. Détection SDS-PAGE

Le échantillons obtenu dans le purification processus (y compris original échantillons, effluent composants, lavage et composants d'élution, etc.) ont été détectés par SDS-PAGE pour déterminer l'effet de purification.

Remarques

1. Ne pas réfrigérer le produit.
2. La résine d'agarose rProteinAAgarose doit être complètement inversée plusieurs fois avant utilisation, afin que la résine d'agarose soit mélangée uniformément.
3. Pendant toutes les opérations, l'échantillon doit être utilisé à 4°C ou sur de la glace.
4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des blouses de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.
5. Réservé à la recherche.

Tableau 1 ci-joint : Résumé de la capacité de liaison oprotéines f A et G en Ig dans différentes espèces

Protéine SuRi Une agarose Résine