La protéine A naturelle est une protéine de surface de paroi cellulaire trouvée dans Staphylococcus aureus, elle est similaire à la protéine G isolée du genre G ou C Streptocoque, lier la plupart mammifère IgG par en interaction principalement avec le Fc région Les protéines A et G sont des protéines qui se lient de manière différente à différentes sous-classes d'immunoglobulines (Ig), mais qui diffèrent par leur spécificité de liaison. Elles peuvent être utilisées pour la séparation et la purification d'une variété d'anticorps (anticorps monoclonaux et anticorps polyclonaux). La protéine A et la protéine G diffèrent par leurs propriétés de liaison à différentes sous-classes d'immunoglobulines (voir l'annexe 1 pour plus de détails).
Ce produit utilise une protéine A génétiquement modifiée, qui non seulement conserve ses propriétés d'affinité Ig, mais supprime également le domaine de liaison non majeur de la protéine naturelle elle-même pour réduire la liaison non spécifique. La résine d'agarose SuRi rProtein A, qui est un gel d'agarose hautement réticulé comme matrice et une protéine A recombinante résistante aux alcalis modifiée comme ligand, présente une stabilité physicochimique élevée. Des anticorps de haute pureté peuvent être obtenus à partir d'échantillons d'ascite, de sérum et de milieu de culture par chromatographie d'affinité en une étape avec ce produit, qui est pratique à utiliser et largement utilisé.

Composants

Caractéristiques

Expédition et Stockage

Les produits sont expédiés avec un pack de glace.   Il peut être stocké de manière stable à 2~8℃ depuis 5 ans.

Instructions

1. Préparation du tampon

Il est recommandé de suivre les recommandations suivantes les tampons doivent être filtrés avec une membrane filtrante de 0,22 μm ou 0,45 μm avant utilisation. Tampon d'équilibrage/liaison/lavage : 0,15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7,0

Tampon d'élution : glycine 0,1 M, pH 3,0

Tampon neutralisant : 1 MTris-HCl, pH 8.5

2. Préparation des échantillons

Assurer que le échantillon solution a le approprié ionique force et pH avant chargement le colonne, soit par diluer l'échantillon de sérum, d'ascite ou de solution de culture cellulaire avec un tampon de liaison/lavage, ou par dialyse de l'échantillon avec un tampon de liaison/lavage.

3. Garniture de colonne

Chargez la protéine SuRi r UN Résine d'agarose dans une colonne chromatographique adaptée, en prenant soin d'éviter les bulles.

4. Purification des échantillons

1) Bilan : La colonne chromatographique est équilibré avec un obligatoire Tampon de 5 fois le colonne volume, donc que l'emballage est dans le même système tampon que la protéine cible et joue le rôle de protecteur de la protéine.

2) Échantillon chargement: Le échantillon était chargé à le bien équilibré rProtéine UN Agarose Résine à assurer complet contact entre la protéine cible et la résine, améliore la récupération taux de la protéine cible et collecter l'effluent pour être testé.

3) Lavage : Laver avec 10 à 15 fois la colonne volume de la lavage Tampon, retirer le impureté protéine sauf si spécifiquement adsorbé, recueillir la solution de lavage.

4) Élution : Élution avec 5 à 10 fois colonne volume de la élution Tampon, collecter éluant, que est, le cible protéine composant.

5) Nettoyage CIP et préservation: En général utiliser 0,1-0,5 M NaOH supérieur à 3 CV, et le contact temps est 15 min; Alors rincer avec la solution d'équilibrage 5CV jusqu'à neutralité. Enfin, c'est équilibré à 20% éthanol de 5 fois la colonne volume, et alors stocké  dans 20%  éthanol  de le  même  volume  à  4°C  à  prévenir  le  emballage  depuis  être contaminé par des bactéries.

5. Détection SDS-PAGE

Le échantillons obtenu dans le purification processus (y compris original échantillons, effluent composants, lavage et composants d'élution, etc.) ont été détectés par SDS-PAGE pour déterminer l'effet de purification.

Remarques

1. Ne pas réfrigérer le produit.
2. La résine d'agarose rProteinAA doit être complètement retournée plusieurs fois avant utilisation, afin que la résine d'agarose soit mélangée uniformément.
3. Durant toutes les opérations, l'échantillon doit être utilisé à 4°C ou sur glace.
4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des blouses de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.
5. À usage de recherche uniquement.

Tableau 1 ci-joint : Récapitulatif de la capacité de liaison oprotéines f A et G à Ig dans différentes espèces

Protéine SuRi Une agarose Résine