L'ARN double brin (dsRNA) apparaît comme un sous-produit lors de la transcription in vitro de l'ARNm. Ce sous-produit possède des propriétés immunogènes dans le corps humain, capables de provoquer une réponse immunitaire, diminuant ainsi les niveaux d'ARNm. Cela fait de l'ARNds une impureté de processus gênante nécessitant une élimination complète et un contrôle rigoureux de sa présence résiduelle.

Pour répondre à cette préoccupation, le kit de détection ELISA d'ARN double brin (dsRNA) utilise les principes expérimentaux d'un test immuno-enzymatique sandwich à double anticorps (ELISA) pour la quantification de l'ARNdb résiduel. Le kit peut non seulement être utilisé dans la détection des dsRNA réguliers, mais également dans la détection des peudo UTP, N1-Me-peudo UTP et les ARNdb modifiés par 5-OMe-UTP.

La procédure consiste à ajouter un échantillon standard et l'échantillon d'essai sur une plaque enzymatique (appelée 36717-A) préalablement recouverte d'anticorps anti-ARNdb. Par la suite, des anticorps de détection d'ARNdb marqués à la biotine (36717-F) sont ajoutés sous forme diluée. Enfin, la streptavidine-HRP (SA-HRP) (36717-G) est introduite pour créer un complexe comprenant des anticorps, des antigènes, de la biotine et du SA-HRP.

Après le lavage des plaques, l'ajout de la solution chromogène TMB (36717-K) initie le développement de la couleur. Sous l'influence de la catalyse enzymatique HRP, le TMB subit une transformation de l'incolore au bleu, qui est ensuite stoppée par l'application de la solution d'arrêt (36717-L). Finalement, cette transformation se traduit par une teinte jaune, dont l'intensité est corrélée positivement à la quantité d'ARNdb identifiée dans l'échantillon.

Ce kit remplit une fonction polyvalente, permettant l'optimisation du processus de purification des produits biologiques, le contrôle des impuretés pendant les étapes intermédiaires et les tests de libération pour l'évaluation du produit final.

Pproduit Validation Rapport

Composants

Expédition et stockage

Le kit est livré avec un pack de glace et peut être conservé entre 2°C et 8°C. Le produit non ouvert est valable un an. Une fois le réactif ouvert, il est valable six mois. Ne jamais congeler ce produit.

Instructions

1. Préparation avant l'expérience

1) Matériel expérimental non fourni dans ce kit mais nécessaire à l'expérience :

a. Embouts sans RNase ;

b. Tube à centrifuger sans RNase ;

c. Du papier sans poussière;

d. Plaque de prétraitement d’échantillon sans RNase ;

e. Eau déionisée ou eau bidistillée.

2) Instruments et équipements nécessaires mais non fournis :

a. Lecteur de microplaques multifonctionnel (comprenant un mode de détection à double longueur d'onde, couvrant 450 nm et 650 nm ; capable d'utiliser 450 nm comme longueur d'onde de détection et 650 nm comme longueur d'onde de référence) ;

b. Laveuse de plaques entièrement automatique, mélangeur vortex, mélangeur à température constante, centrifugeuse ;

c. Micropipettes de précision et micropipettes multicanaux de différentes spécifications ;

d. Minuterie, réfrigérateur 4℃ ;

e. Agitateur de microplaques.

2. Analyse des résultats

a. Si la valeur OD de l'échantillon à tester dépasse la valeur OD au point le plus élevé de la courbe standard, l'échantillon doit être dilué et remesuré.

b. Procédure de développement de courbe : créez une courbe standard en traçant les concentrations standard sur l'axe des x et les valeurs d'absorption standard étalonnées correspondantes sur l'axe des y. Divers outils logiciels de dessin et de statistiques peuvent aider à générer des courbes standard et à déterminer les concentrations d'échantillons inconnues. Il est conseillé d'utiliser une méthode d'ajustement à quatre ou cinq paramètres pour cette expérience.Enfin, calculez la quantité résiduelle d’ARNdb dans l’échantillon en vous référant à la courbe standard et en tenant compte du facteur de dilution de l’échantillon.

c. La courbe standard fournie est un exemple illustratif (à des fins de référence uniquement). Le contenu réel de l'échantillon doit être déterminé à l'aide d'une courbe standard générée spécifiquement pour la même norme expérimentale.

3. Organigramme de l'expérience

Figure 5 Organigramme de l'expérience

4. Performances du produit

Les performances de ce kit ont été entièrement évaluées. Pour plus de détails, veuillez contacter le personnel technique pour obtenir le rapport de vérification des performances correspondant.

5. Remarques

1. Veuillez lire attentivement ce manuel d'instructions avant d'utiliser ce kit.
2. Veuillez utiliser ce produit pendant la période de validité et il est interdit de mélanger des réactifs apparentés provenant de différents lots.
3. Tous les réactifs doivent être ramenés à température ambiante avant utilisation.
4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables.
5. Ce produit est destiné uniquement à des fins de recherche scientifique.
   
   

   Documents:

   Fiche de données de sécurité

   Manuel