Description
Le réactif de transfection universel Hieff Trans™ est un réactif de transfection de liposomes polyvalent, pratique et efficace développé sur la base de la dernière nanotechnologie. Il convient à la transfection d'ADN, d'ARN et d'oligonucléotides, y compris les cellules primaires. Les cellules difficiles à transfecter, y compris les neurones, ont une efficacité de transfection élevée. Sa formule unique lui permet d'être ajouté directement au milieu, et la présence de sérum n'affecte pas l'efficacité de la transfection, ce qui réduit les dommages aux cellules causés par l'élimination du sérum. Il n'est pas nécessaire de retirer le complexe acide nucléique-réactif de transfection ou de le remplacer par un milieu frais après la transfection, et le milieu frais peut également être remplacé après 4 à 6 heures en fonction de l'état nutritionnel des cellules.
Composants du produit
| Numéro de composant | Composants | Cat#/Taille | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universel-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 mL |
| 40808-B | Universel-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 mL |
Expédition et stockage
Le produit est livré avec des blocs réfrigérants et peut être conservé entre 2 et 8 °C pendant un an. Ne pas congeler !
Précautions
1) Pendant l'opération de transfection, il est préférable que la confluence cellulaire atteigne 70 à 90 %, et la densité de placage spécifique est déterminée en fonction de la situation des cellules.
2) La préparation des complexes de transfection nécessite une dilution de l’ADN et des réactifs de transfection dans un milieu sans sérum.
3) Les antibiotiques ne peuvent pas être ajoutés au milieu pendant la transfection.
4) L’utilisation d’ADN ou d’ARN de haute pureté permet d’obtenir une efficacité de transfection plus élevée, et l’endotoxine dans les plasmides est l’ennemi de la transfection.
5) Conserver entre 2 et 8 °C, en veillant à ne pas ouvrir le couvercle à plusieurs reprises pendant une longue période.
6) La concentration en acide nucléique et le volume du réactif doivent être optimisés lors de la première utilisation afin d'obtenir une efficacité de transfection maximale.
7) Ce produit est destiné uniquement à des fins de recherche scientifique !
Instructions
Transfection d'ADN
[Remarque] La quantité de réactif de transfection utilisée est affectée par le type de cellule et d'autres conditions expérimentales. Il est recommandé de définir un gradient pour optimiser la quantité optimale à utiliser la première fois.
1) Les cellules sont plaquées et la confluence cellulaire doit être de 70 à 90 % au moment de la transfection.
2) Diluer la solution Universal-B avec le milieu Opti-MEM selon le tableau ci-dessous et mélanger doucement.
3) Diluer l’ADN avec le milieu Opti-MEM pour obtenir un prémélange d’ADN, puis ajouter la solution Universal-A et mélanger doucement pour obtenir de l’ADN dilué.
4) Ajoutez l’ADN dilué à la solution Universal-B diluée (rapport 1:1).
5) Incuber à température ambiante pendant 5 minutes.
6) Ajoutez le complexe ADN-liposome aux cellules goutte à goutte et mélangez doucement.
7) Incuber à 37°C, 5% CO2 incubateur pendant 48-96 h jusqu'à l'analyse de l'expression génique.
Transfection d'ARNsi
La procédure de transfection de l'ARNsi est la même que celle de la transfection de l'ADN, sauf que la solution Universal-A (étape 3) n'a pas besoin d'être ajoutée lors de la dilution de l'ARNsi.
Tableau 1 Quantité de transfection dans différents récipients de culture cellulaire (pour référence uniquement)
| Récipients de culture cellulaire | 96 puits | 24 puits | 6 puits | |
| Cellules adhérentes | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Diluer la solution Universal-B avec le milieu Opti-MEM selon le tableau ci-dessous et mélanger doucement. | Milieu Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Diluez l’ADN avec le milieu Opti-MEM pour obtenir un prémélange d’ADN, puis ajoutez la solution Universal-A et mélangez doucement pour obtenir de l’ADN dilué. | Milieu Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universel-A (2 μL/μg ADN) | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Ajoutez l’ADN dilué à la solution Universal-B diluée (rapport 1:1). | Solution d'ADN diluée | 5 μL | 25 μL | 125 μL |
| Universel-B | 5 μL | 25 μL | 125 μL | |
| Incuber à température ambiante pendant 5 minutes. | ||||
| Complexe ADN-liposome | Composants (chaque puits) | 96 puits | 24 puits | 6 puits |
| Opti-MEM | 10 μL | 50 μL | 250 μL | |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universel-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Universel-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 μL | |
| Ajoutez goutte à goutte le complexe ADN-liposome aux cellules et mélangez doucement. | Complexe ADN-liposome | 10 μL | 50 μL | 250 μL |
[Remarque] La quantité utilisée dans le tableau est donnée à titre indicatif uniquement. La quantité spécifique d'ADN et de solution Universal-B utilisée doit être optimisée en fonction du type de cellule et des autres conditions expérimentales. Il est recommandé de maintenir le rapport entre 1:0,5 et 1:5.
(1) Q : Le sérum peut-il être présent lors de la préparation d’un complexe réactif de transfection d’acide nucléique ?
R : La présence de sérum affecte la formation des liposomes. Il est recommandé d'utiliser un milieu sans sérum (généralement un milieu MEM) lors de la préparation de complexes réactifs de transfection d'acide nucléique.
(2) Q : Le réactif de transfection peut-il être congelé ?
R : Ce réactif doit être conservé entre 2 et 8 °C et il faut éviter l'ouverture répétée et prolongée du bouchon, car une ouverture prolongée du bouchon provoquera l'oxydation des liposomes et affectera l'efficacité de la transfection.
(3) Q : À quoi dois-je faire attention lors de l'utilisation du réactif de transfection universel Hieff Trans™ ?
A : 1) Pendant l'opération de transfection, il est préférable que la confluence cellulaire atteigne 70 à 90 %, et la densité de placage spécifique est déterminée en fonction de la situation des cellules.
2) La préparation des complexes de transfection nécessite une dilution de l’ADN et des réactifs de transfection dans un milieu sans sérum.
3) Les antibiotiques ne peuvent pas être ajoutés au milieu pendant la transfection.
4) L’utilisation d’ADN ou d’ARN de haute pureté permet d’obtenir une efficacité de transfection plus élevée, et l’endotoxine dans les plasmides est l’ennemi de la transfection.
5) Conserver entre 2 et 8 °C, en veillant à ne pas ouvrir le couvercle à plusieurs reprises pendant une longue période.
6) La concentration en acide nucléique et le volume du réactif doivent être optimisés lors de la première utilisation afin d'obtenir la plus grande efficacité de transfection.
(4) Q : Est-il nécessaire de l’arrêter après la transfection ?
R : Pas besoin. Il n'est pas nécessaire de retirer le complexe acide nucléique-réactif de transfection ou de le remplacer par un milieu frais après la transfection, et le milieu frais peut également être remplacé après 4 à 6 heures en fonction de l'état nutritionnel des cellules.
(5) Q : Le réactif de transfection peut-il être utilisé pour la transfection de l'emballage du vecteur viral ?
R : Oui.L'efficacité de l'emballage du vecteur viral n'est pas nécessairement liée à l'efficacité de la transfection, mais également à la sélection des plasmides d'emballage et au rapport entre les plasmides.
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