Le réactif de transfection PEI 25000 à base de polyéthylèneimine linéarisé est un polymère cationique hautement chargé qui lie facilement les molécules d'acide nucléique chargées négativement, forme un complexe et permet au complexe de pénétrer dans la cellule. Le réactif de transfection est un réactif de transfection transitoire présentant une faible cytotoxicité, une efficacité de transfection élevée et une efficacité d'expression génique élevée dans des cellules telles que HEK293 et ​​CHO. Il a été vérifié que le réactif de transfection PEI linéaire est largement applicable à une variété de lignées cellulaires, notamment les cellules HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 et Hela, etc. Le réactif est compatible avec les milieux contenant du sérum et peut introduire efficacement des acides nucléiques dans les cellules.

Spécification

Expédition et stockage

Le produit est expédié à température ambiante et la poudre peut être conservée à 2-8ºC pendant deux ans. La solution mère est conservée à 2-8 ºC pendant 3 mois.

Précautions


1) Une fois la solution PEI préparée sortie de -20 ºC et décongelée, elle peut être conservée au réfrigérateur à 4 ºC et ne doit pas être recongelée.

2) Pour la plupart des cellules, 3,0 μl de réactif de transfection PEI pour 1 μg d'ADN peuvent permettre d'obtenir une efficacité de transfection élevée. Vous pouvez également essayer d'utiliser un volume de 1,5 à 4 μl de réactif de transfection PEI linéaire pour 1 μg d'ADN à des fins d'optimisation.

3) Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire, des gants jetables et une hotte aspirante pour l'opération.

4) Ce produit est uniquement destiné à la recherche scientifique et non à l'usage humain.

Préparation de la solution mère (1 mg/mL)


1. Matériaux

PEI 25000, eau Milli-Q®/eau pour injection (WFI) ou eau de qualité biologique similaire, acide chlorhydrique (HCl) 12 mol/L, hydroxyde de sodium (NaOH) 10 mol/L, filtre stérile sous vide PES jetable de 0,1 à 0,2 μm, bouteille de stockage stérile en PEHD ou en polypropylène.

2. Préparez la solution mère (1 mg/mL)

1) Dans un bécher en verre de 1 L, ajoutez 1 g de poudre PEI 25000 dans 900 mL d’eau ultrapure Milli-Q® ou autre eau biologique équivalente, et remuez uniformément sur un agitateur magnétique pour produire un petit vortex.

2) Ajouter goutte à goutte de l'acide chlorhydrique (12 mol/L) tout en remuant pour ajuster le pH jusqu'à ce que pH < 2,0.

3) Couvrir le dessus du bécher et remuer pendant 3 heures jusqu'à dissolution complète ; maintenir le pH < 2,0 tout au long du processus.

【Remarque】: Il peut y avoir de petites particules fibreuses qui ne peuvent pas être dissoutes, ce qui est un phénomène normal.

4) Ajouter NaOH (10 mol/L) goutte à goutte tout en remuant pour ajuster le pH jusqu'à ce qu'il atteigne 6,9 ​​~ 7,1.

5) Transférer la solution dans une éprouvette graduée et ajouter de l'eau pour compléter jusqu'à 1 L.

6) Filtrer et stériliser avec un filtre à vide PES jetable de 0,1 à 0,2 µm pour obtenir une solution mère de 1 mg/mL.

7) Aliquoter selon les besoins et conserver à -20 °C, stable pendant 1 an.

【Remarque】: Après avoir décongelé la solution de stockage, elle peut être conservée à 4 °C et est stable pendant 2 semaines, mais elle ne doit pas être recongelée

Procédure de transfection (en prenant comme exemple une plaque à 6 puits)


1. Inoculation cellulaire : afin d'améliorer l'efficacité de la transfection, il est recommandé d'inoculer les cellules un jour avant la transfection, et la densité cellulaire au moment de la transfection est de préférence de 70 % à 80 %.

2. Préparez le complexe ADN-PEI : Préparez le complexe acide nucléique-réactif de transfection ADN-PEI selon le système suivant :

1) Pour chaque puits de cellules, diluez 2 μg d’ADN cible avec 100 μL de milieu sans sérum et mélangez soigneusement pour former une dilution d’ADN.

[Remarque] : Opti-MEM ou ddH2O est recommandé pour le diluant sans sérum

2) Ajoutez immédiatement 5 μL de réactif de transfection PEI 25000 à 100 μL de diluant ADN, vortexez pendant 10 secondes et mélangez bien.

3) Incuber à température ambiante pendant 10 à 25 minutes pour former un complexe réactif de transfection d'acide nucléique cationique ADN-PEI.

3. Cellules transfectées :

1) Pendant la formation du complexe, retirez le milieu de croissance cellulaire et ajoutez 2 ml de milieu complet préchauffé frais dans chaque puits.

2) Ajoutez 100 μL de complexe acide nucléique ADN-PEI-PEI directement aux cellules, agitez la plaque de culture et mélangez doucement.

3) Cultiver dans un incubateur à 37°C, 5% CO2, et l'expression du transgène peut être détectée dès 7 heures après la transfection. Veuillez déterminer vous-même le temps de test approprié.

4. Criblage à rotation constante (facultatif)

24 h après la transfection, les cellules ont été repiquées dans un milieu de croissance frais (diluer les cellules plus de 10 fois) et incubées toute la nuit à 37 °C dans un incubateur à 5 % de CO2. Le lendemain, un médicament de dépistage correspondant au gène de résistance à la transfection a été ajouté. Les clones résistants aux médicaments peuvent être sélectionnés en 1 à 2 semaines environ. Pendant cette période, le milieu de croissance contenant les médicaments de dépistage doit être remplacé fréquemment.

Dosage de transfection pour différents récipients de culture cellulaire (à titre indicatif uniquement) :