एकल और दोहरे ल्यूसिफ़रेज़ पहचान अनुप्रयोगों के बीच अंतर

रिपोर्टर जीन परख को मुख्य रूप से सिंगल-लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख और दोहरे-लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख में विभाजित किया जाता है। विशिष्ट अनुप्रयोगों में, आप यह कैसे निर्धारित कर सकते हैं कि प्रयोग में सिंगल-लूसिफ़ेरेज़ या दोहरे-लूसिफ़ेरेज़ पहचान प्रणाली का उपयोग किया गया है? आइए अंतरों पर एक नज़र डालें।

एकल लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर परख प्रणाली

रिपोर्टर जीन की संख्या: एक एकल जुगनू ल्यूसिफ़रेज़ रिपोर्टर जीन;

ट्रांसफ़ेक्शन प्रकार: एकल रिपोर्टर जीन प्लाज्मिड, ट्रांसफ़ेक्शन के बाद, दवा चयन का उपयोग ल्यूसिफ़रेज़ को व्यक्त करने वाली एक स्थिर रिपोर्टर जीन सेल लाइन का निर्माण करने के लिए किया जाता है;

पता लगाने की प्रक्रिया: केवल जुगनू ल्यूसिफ़रेज़ सिग्नल का पता लगाने की आवश्यकता है, सरल ऑपरेशन, छोटी पहचान अवधि, उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त;

अनुप्रयोग परिदृश्य विश्लेषण: यह आमतौर पर एक स्थिर ओवरएक्सप्रेसिंग मोनोक्लोनल सेल लाइन के निर्माण के माध्यम से होता है, क्योंकि इन सेल लाइनों का अभिव्यक्ति स्तर अपेक्षाकृत स्थिर और समान होता है, बिना ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता और सेल व्यवहार्यता के कारण प्रयोगात्मक विविधताओं के प्रभाव के। ऑपरेशन सरल है, और चूंकि केवल जुगनू ल्यूसिफ़रेज़ सिग्नल का पता लगाया जाता है, इसलिए डेटा विश्लेषण अधिक सुविधाजनक है। कम पता लगाने के समय के फायदों के साथ, यह विशेष रूप से उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है और बड़े पैमाने पर नमूना पहचान की जरूरतों को पूरा करता है।

डुअल-लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन डिटेक्शन सिस्टम

रिपोर्ट की गई जीन मात्रा: फायरफ्लाई ल्यूसिफ़रेज़ और रेनिला ल्यूसिफ़रेज़ के दोहरे रिपोर्टर जीन;

ट्रांसफ़ेक्शन प्रकार: दो रिपोर्टर जीन प्लास्मिडों का सह-संक्रमण, मुख्य रूप से क्षणिक संक्रमण के माध्यम से;

पता लगाने की प्रक्रिया: सबसे पहले जुगनू सिग्नल और फिर रेनिला सिग्नल का पता लगाना आवश्यक है, और अंतिम डेटा गणना के लिए दोनों के अनुपात (जुगनू/रेनिला) का उपयोग किया जाता है;

अनुप्रयोग परिदृश्य विश्लेषण: यह आम तौर पर क्षणिक अभिकर्मक के माध्यम से होता है, जिसमें आंतरिक संदर्भ के रूप में रेनिला ल्यूसिफेरेज जीन युक्त प्लास्मिड का सह-अभिकर्मक होता है, जो प्रयोग के लिए एक बेंचमार्क प्रदान करता है, जिससे कोशिका व्यवहार्यता और अभिकर्मक दक्षता जैसे बाहरी कारकों के हस्तक्षेप को कम किया जा सकता है। अनुपात गणना के माध्यम से, कोशिका संख्या, अभिकर्मक दक्षता और कोशिका गतिविधि में भिन्नताओं को ठीक करना संभव है, जिससे प्रयोगात्मक परिणामों की सटीकता में सुधार होता है। यह जीन अभिव्यक्ति विनियमन, संकेत पारगमन मार्ग और दवा स्क्रीनिंग के क्षेत्रों में एक महत्वपूर्ण उपकरण है।

उत्पाद श्रृंखला

येसेन लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन डिटेक्शन उत्पाद श्रृंखला एक सुविधाजनक और कुशल मात्रात्मक पहचान समाधान प्रदान करती है। एकल-घटक डिज़ाइन उपयोग प्रक्रिया को सरल बनाता है, और 5 घंटे के सुपर लंबे सिग्नल हाफ-लाइफ के साथ उच्च संवेदनशीलता का सही संयोजन बड़े पैमाने पर ड्रग स्क्रीनिंग डिटेक्शन की ज़रूरतों को पूरा करता है। हम तीन उत्पाद पेश करते हैं: बायो-वन स्टेप, स्टेडी-वन स्टेप और ब्राइट-वन स्टेप, जो अलग-अलग संवेदनशीलता और स्थिरता आवश्यकताओं के अनुकूल हैं।

प्रोडक्ट का नाम	बायो-वन स्टेप	स्थिर-एक कदम	ब्राइट-वन स्टेप
उत्पाद कोड	11411ईएस	11413ईएस	11412ईएस
अनुप्रयोग परिदृश्य और विशेषताएं	यह किट सिग्नल की तीव्रता और स्थिरता के बीच एक सापेक्ष संतुलन बनाता है। यह अपेक्षाकृत उच्च सिग्नल तीव्रता बनाए रखता है, साथ ही एक निश्चित अवधि में सिग्नल की तीव्रता को अपेक्षाकृत स्थिर भी रखता है।	अर्ध-आयु 5 घंटे से अधिक तक चल सकती है। विशेष रूप से पहले 2 घंटों के भीतर, ल्यूमिनेसेंस मान में परिवर्तन न्यूनतम होते हैं। यह अल्ट्रा-हाई थ्रूपुट या 384-वेल प्लेट परख के लिए उपयुक्त है।	उच्च संवेदनशीलता और उच्च संकेत तीव्रता। उच्च संवेदनशीलता की आवश्यकता वाले प्रयोगों के लिए उपयुक्त।
सिग्नल अर्ध-जीवन	60 मिनट	5 घंटे	30 मिनट
परिचालन विशेषताएँ	एक कदम	एक कदम	एक कदम

उत्पाद लाभ

लम्बा सिग्नल अर्ध-जीवन: सिग्नल अर्ध-जीवन 5 घंटे तक पहुंच सकता है, जो उच्च-थ्रूपुट प्रयोगों की जरूरतों को पूरा करता है और बड़ी संख्या में नमूनों के कारण पहले और अंतिम कुओं के बीच समय के अंतर के कारण होने वाले सिग्नल अंतर से बचता है, जिससे अधिक स्थिर और विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित होते हैं।

प्रबल प्रतिदीप्ति संकेत: संकेत मान 8 क्रम परिमाण तक पहुंच सकता है, जिससे प्रारंभिक दवा स्क्रीनिंग और प्रभावकारिता मूल्यांकन के लिए एक बड़ी पहचान खिड़की और मजबूत डेटा समर्थन उपलब्ध होता है।

आसान कामकाज: एक-चरणीय ऑपरेशन जटिल प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं से बचाता है। बस डिटेक्शन अभिकर्मक जोड़ें और डिटेक्शन के लिए मशीन शुरू करने से पहले 5 मिनट तक प्रतीक्षा करें।

बहुविकल्पीय: विभिन्न अनुप्रयोग परिदृश्यों के अनुसार, 3 अलग-अलग उत्पाद उपलब्ध हैं, जिन्हें सिग्नल मूल्य और सिग्नल स्थिरता के लिए प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर चुना जा सकता है।

उत्पाद डेटा

01 येसेन के प्रदर्शन की तुलना अलग रिपोर्टर जीन परख किट

तीन प्रकार के परख किटों का सत्यापन फायरफ्लाई ल्यूसिफ़रेज़ को स्थिर रूप से व्यक्त करने वाली कोशिका रेखाओं पर आयोजित किया गया था, और परिणामों से पता चला कि ब्राइट-वन स्टेप उत्पाद में उच्च सिग्नल मान हैं; स्टेडी-वन स्टेप उत्पाद में लंबा सिग्नल अर्ध-जीवन और अधिक स्थिर सिग्नल हैं; बायो-वन स्टेप उत्पाद में न केवल उच्च सिग्नल मान हैं, बल्कि यह लंबा सिग्नल अर्ध-जीवन भी बनाए रखता है।

चित्र 1. विभिन्न येसेन रिपोर्टर जीन परख किटों के प्रदर्शन की तुलना

02 येसेन बायो-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन डिटेक्शन रिएजेंट की प्रतिस्पर्धी उत्पादों के साथ तुलना

जब येसेन बायो-वन स्टेप, प्रतियोगी पी, तथा प्रतियोगी वी का उपयोग एक सेल लाइन पर किया जाता है जो फायरफ्लाई ल्यूसिफ़रेज़ को स्थिर रूप से अधिक अभिव्यक्त करती है, तो परिणाम दर्शाते हैं कि येसेन बायो-वन स्टेप का संकेत मान तथा संकेत अर्ध-आयु प्रतियोगी पी के साथ अनिवार्यतः सुसंगत है, तथा संकेत अर्ध-आयु प्रतियोगी वी से बेहतर है।

चित्र 2. यीसेन बायो-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन डिटेक्शन रिएजेंट की प्रतिस्पर्धियों के साथ तुलना

03 येसेन बायो-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन डिटेक्शन रिएजेंट फ़्रीज़-थॉ स्थिरता परीक्षण

येसेन बायो-वन स्टेप लूसिफेरेज रिपोर्टर जीन डिटेक्शन रिएजेंट पर बार-बार फ्रीज-थॉ प्रयोग किए गए हैं, और परिणाम दर्शाते हैं कि 5 फ्रीज-थॉ चक्रों के बाद भी, उत्पाद का प्रदर्शन स्थिर बना हुआ है और इसमें कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ है।

चित्र तीन।येसेन बायो-वन स्टेप लूसिफेरेज रिपोर्टर जीन डिटेक्शन रिएजेंट का बार-बार फ्रीज-थॉ परीक्षण

परिचालन प्रक्रिया

01 सेल ट्रांसफ़ेक्शन

अभिकर्मक को सीधे कोशिका निलंबन में जोड़ें, फिर पूरी तरह से मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए 5 बार ऊपर और नीचे पिपेट करें, पूर्ण कोशिका विघटन के लिए 5 मिनट तक प्रतीक्षा करें।

02 नमूना लोड हो रहा है

मिश्रण (पहचान अभिकर्मक + कोशिका संवर्धन माध्यम) के 100 μL को पहचान प्लेट के प्रत्येक वेल में पिपेट से डालें।

03 प्रतिदीप्ति जांच

प्लेट रीडर पर पैरामीटर सेट करें। डिटेक्शन प्लेट को प्लेट रीडर में रखें, इसे कुछ सेकंड के लिए वाइब्रेट करें, और फिर डिटेक्शन के साथ आगे बढ़ें।

उत्पादों की सूची

उत्पाद श्रेणी	प्रोडक्ट का नाम	उत्पाद कोड	उत्पाद विनिर्देश
लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट	बायो-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ परख किट	11411ईएस60/80/81	100टी/10×100टी/1000टी
	स्टेडी-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ परख किट	11413ईएस60/80/81	100टी/10×100टी/1000टी
	ब्राइट-वन स्टेप लूसिफ़ेरेज़ परख किट	11412ईएस60/80/81	100टी/10×100टी/1000टी
डुअल-लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट	डुअल लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट	11402ईएस60/80	100टी/1000टी
	डुअल ग्लो लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट	11405ईएस60/80	100टी/1000टी