के लिए आदर्श आरआरएनए निष्कासन और mRNA कैपिंग दक्षता का पता लगाने!
थर्मोस्टेबल RNase H, अपने असाधारण ताप प्रतिरोध के कारण, विशिष्टता और दक्षता दोनों में नियमित RNase H से बेहतर प्रदर्शन करता है!
आरएनसे एच का परिचय
ई. कोली आरएनसे एच (ई. कोली राइबोन्यूक्लिअस एच) एक एंजाइम है जो विशेष रूप से आरएनए-डीएनए हाइब्रिड स्ट्रैंड के आरएनए घटक को नष्ट करता है। यह डीएनए प्रतिकृति, मरम्मत और प्रतिलेखन जैसी प्रक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, डीएनए टेम्पलेट की अखंडता और स्थिरता को बनाए रखने के लिए आरएनए स्ट्रैंड को विभाजित करके। यह इसे आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों में व्यापक रूप से उपयोग करता है, जिसमें सीडीएनए संश्लेषण, आरआरएनए निष्कासन और आरएनए हस्तक्षेप अध्ययन शामिल हैं। हालाँकि, ई. कोली आरएनसे एच की कुछ सीमाएँ हैं:
- इससे एकल-रज्जुक वाले आरएनए या डीएनए का गैर-विशिष्ट विभाजन हो सकता है, जिससे प्रयोगात्मक परिणामों की सटीकता कम हो सकती है।
- इसकी खराब तापीय स्थिरता इसे उच्च तापमान पर सक्रियता बनाए रखने से रोकती है, जिससे यह उच्च तापमान रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन या पीसीआर जैसे प्रयोगों के लिए अनुपयुक्त हो जाता है, जिनमें उच्च तापमान की आवश्यकता होती है।
इन कमियों ने शोधकर्ताओं को थर्मोस्टेबल आरएनसे एच विकसित करने के लिए प्रेरित किया है ताकि इसके अनुप्रयोगों को व्यापक बनाया जा सके और प्रयोगात्मक दक्षता को बढ़ाया जा सके।
चित्र 1: आरएनएएस एच तंत्र
थर्मस थर्मोफिलस से थर्मोस्टेबल आरएनसे एच
थर्मोस्टेबल आरएनसे एच, थर्मस थर्मोफिलस से प्राप्त होता है, जो ई. कोली आरएनसे एच का समरूप है और समान राइबोन्यूक्लिअस फ़ंक्शन साझा करता है। यह डीएनए स्ट्रैंड की अखंडता को संरक्षित करते हुए आरएनए:डीएनए हाइब्रिड में आरएनए स्ट्रैंड के फॉस्फोडाइस्टर बॉन्ड को सटीक रूप से पहचानता है और कुशलतापूर्वक विभाजित करता है। गहन संरचनात्मक विश्लेषण से पता चलता है कि, हालांकि इसका समग्र स्थिरता वितरण ई. कोली आरएनसे एच के समान है, टी. थर्मोफिलस आरएनसे एच समग्र स्थिरता और स्थानीय अवशेष स्थिरता दोनों में महत्वपूर्ण सुधार प्रदर्शित करता है।
65 डिग्री सेल्सियस से ऊपर के इष्टतम गतिविधि तापमान के साथ, थर्मोस्टेबल आरएनेज एच उच्च प्रतिक्रिया तापमान पर बढ़ी हुई विशिष्टता और दक्षता प्रदान करता है, गैर-विशिष्ट दरार को कम करता है। यह गुण आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों में अपनी विशाल क्षमता को अनलॉक करता है, जिसमें शामिल हैं:
- आरआरएनए निष्कासन
- mRNA कैपिंग दर का पता लगाना
- पॉली(ए) से पॉली(डीटी) में संकरणित mRNA को हटाना
- सीडीएनए द्वितीय-स्ट्रैंड संश्लेषण के दौरान mRNA का निष्कासन
- उच्च तापमान रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन, आइसोथर्मल प्रवर्धन और पीसीआर प्रयोगों में बेहतर प्रवर्धन दक्षता
![Figure 2: Three-Dimensional Structure Comparison of Thermostable RNase H and E. coli RNase H [1]](https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/2_05d0884a-560e-4219-b16e-50c907eb4cbe_1024x1024.png?v=1742461692)
चित्र 2: थर्मोस्टेबल आरएनसे एच और ई. कोली आरएनसे एच की त्रि-आयामी संरचना तुलना [1]
यूसीएफ.एमई™थर्मोस्टेबल आरएनसे एच (कैट14545)
थर्मोस्टेबल आरएनसे एच का उपयोग अक्सर रोगजनक पहचान प्रयोगों में किया जाता है, जैसे कि मेटाजेनोमिक अनुक्रमण (एमएनजीएस) और रोगजनक-लक्षित अनुक्रमण (टीएनजीएस) में आरआरएनए हटाना। एंजाइम में अवशिष्ट मेजबान या पृष्ठभूमि जीवाणु न्यूक्लिक एसिड पहचान सटीकता को काफी हद तक प्रभावित कर सकते हैं। इसे संबोधित करने के लिए,
उत्पाद लाभ:
- उच्च सक्रियता और उत्कृष्ट बैच-टू-बैच स्थिरता
- अत्यंत कम मेजबान gDNA अवशेष: <0.02 प्रतियां/यू
- कोई एक्सोन्यूक्लिऐस, एंडोन्यूक्लिऐस या आरएनेज़ अवशेष नहीं
- उत्कृष्ट स्थिरता: 4°C पर 32 दिन, 25°C पर 16 दिन, या 37°C पर 7 दिन के बाद एंजाइम गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण हानि नहीं हुई
UCF.ME का प्रदर्शन प्रदर्शन™ थर्मोस्टेबल आरएनसे एच (कैट14545)
1. उच्च गतिविधि और बैच स्थिरता
UCF.ME के तीन बैच™ थर्मोस्टेबल आरएनेज एच को आरएनए:डीएनए सब्सट्रेट के साथ इनक्यूबेट किया गया, और बैंड परिवर्तनों का विश्लेषण एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के माध्यम से किया गया। परिणाम दर्शाते हैं कि इस एंजाइम का केवल 0.05 यू 20 पीएमओएल आरएनए:डीएनए सब्सट्रेट में आरएनए को प्रभावी ढंग से विभाजित करता है, उत्कृष्ट बैच-टू-बैच स्थिरता के साथ, इसकी स्थिरता और विश्वसनीयता को उजागर करता है।
चित्र 3: UCF.ME के गतिविधि पहचान परिणाम™ थर्मोस्टेबल आरएनसे एच
नोट: प्रतिक्रिया की स्थितियाँ: 20 मिनट के लिए 50°C; RNA:DNA सब्सट्रेट – 20 pmol
2. कम होस्ट जीडीएनए अवशेष: <0.02 प्रतियां/यू
कई बैचों में मेजबान (ई. कोली) जीडीएनए अवशेष परीक्षण से पता चलता है कि यूसीएफ.एमई के सभी तीन बैच™ थर्मोस्टेबल आरएनेज एच में अवशेष स्तर 0.02 प्रतियां/यू से काफी नीचे है, जो उच्च शुद्धता और प्रयोगात्मक विश्वसनीयता सुनिश्चित करता है।
चित्र 4: UCF.ME के होस्ट gDNA अवशेष परिणाम™ थर्मोस्टेबल आरएनसे एच
3. कोई एक्सोन्यूक्लिऐस, एंडोन्यूक्लिऐस या आरएनेज अवशेष नहीं
25 यू.सी.एफ.एम.ई. ™ थर्मोस्टेबल RNase H को न्यूक्लिक एसिड सब्सट्रेट के साथ इनक्यूबेट किया गया और बैंड में होने वाले बदलावों का मूल्यांकन एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा किया गया। तीनों बैचों में से किसी में भी एक्सोन्यूक्लिएज, एंडोन्यूक्लिएज या RNase अवशेष नहीं पाए गए, जिससे परिणाम की सटीकता और विश्वसनीयता का पक्का आश्वासन मिला।
चित्र 5: UCF.ME में एक्सोन्यूक्लिऐस, एंडोन्यूक्लिऐस और आरएनेज़ अवशेषों का पता लगाने के परिणाम™ थर्मोस्टेबल आरएनसे एच
4. उत्कृष्ट स्थिरता
यूसीएफ.एमई™ थर्मोस्टेबल आरएनेज एच को स्थिरता परीक्षणों के अधीन किया गया: 4 डिग्री सेल्सियस पर 32 दिन, 25 डिग्री सेल्सियस पर 16 दिन और 37 डिग्री सेल्सियस पर 7 दिन। एंजाइम गतिविधि माप में कोई महत्वपूर्ण गिरावट नहीं देखी गई, जिससे व्यापक तापमान सीमा में इसकी असाधारण स्थिरता और दीर्घकालिक भंडारण और विविध प्रयोगात्मक स्थितियों के लिए इसकी उपयुक्तता साबित हुई।
चित्र 6: UCF.ME के त्वरित स्थिरता परिणाम™ थर्मोस्टेबल आरएनसे एच
अनुशंसित संबंधित उत्पाद
| स्रोत | प्रोडक्ट का नाम | बिल्ली एनओ |
| टी. थर्मोफिलस | 14545ईएस | |
| इ.कोलाई | 12906ईएस |
संदर्भ
1. होलियन जे, मार्कुसी एस. थर्मोफिलिक एंजाइम में स्थिरता का संरचनात्मक वितरण [जे]। नेशनल एकेडमी ऑफ साइंसेज की कार्यवाही, 1999, 96(24): 13674-13678।
2. वुल्फ ईजे, दाई एन, चैन एसएच. साइट-विशिष्ट एंडोरिबोन्यूक्लिअस के साथ डीएनए जांच-निर्देशित संवर्धन द्वारा mRNA 5'एंड-कैपिंग का चयनात्मक लक्षण वर्णन [जे]। [2025-03-03]।
3. गु एच, सन वाईएच, ली एक्सजेड। एवियन प्रजातियों के लिए कुल आरएनए अनुक्रमण और राइबोसोम प्रोफाइलिंग के लिए नवीन आरआरएनए-कमी विधियाँ विकसित की गईं [जे]। पोल्ट्री साइंस, 2021, 100(7): 101321. डीओआई:10.1016/j.psj.2021.101321।
