के तेजी से विकास के साथ पीरोटीन एसविज्ञान के क्षेत्र में, प्रोटीन शोधन तकनीक का जैविक अनुसंधान और जैव प्रौद्योगिकी उद्योग के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण हिस्सा है। एक मुख्य तकनीक के रूप में, इसमें आनुवंशिक इंजीनियरिंग विधियों के माध्यम से मेजबान कोशिकाओं में लक्ष्य प्रोटीन की कोडिंग जानकारी को एकीकृत करना शामिल है, ताकि उन्हें आवश्यक प्रोटीन का कुशलतापूर्वक उत्पादन करने के लिए प्रेरित किया जा सके। इसके बाद, प्रोटीन के उच्च-शुद्धता निष्कर्षण को प्राप्त करने के लिए परिष्कृत इन विट्रो ऑपरेशन चरणों की एक श्रृंखला की जाती है। प्रोटीन शोधन वैज्ञानिकों को एकल प्रकार के प्रोटीन को अलग करने में सक्षम बनाता है, जो प्रोटीन की संरचना और कार्य, नई दवाओं के विकास, रोग निदान और जैव प्रौद्योगिकी के अनुप्रयोग को बढ़ावा देने पर गहन अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण है। यह तकनीक न केवल वैज्ञानिक प्रयोगों की सटीकता सुनिश्चित करती है बल्कि जीवन विज्ञान के विकास को भी निरंतर आगे बढ़ाती है।
चित्र 1. एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी का योजनाबद्ध आरेख[1]
प्रोटीन इंजीनियरिंग के क्षेत्र में, फ़्यूज़न टैग एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में काम करते हैं, जो लक्ष्य प्रोटीन से जुड़कर विभिन्न प्रयोगात्मक उद्देश्यों को सुविधाजनक बना सकते हैं। सामान्य फ़्यूज़न टैग के कार्यों को संदर्भ के लिए नीचे दी गई तालिका में सूचीबद्ध किया गया है। हालाँकि, जब ये टैग अपने प्रारंभिक सहायक कार्यों को पूरा करने के बाद फ़्यूज़न प्रोटीन पर बने रहते हैं, तो वे बाद के प्रयोगों पर प्रतिकूल प्रभाव डाल सकते हैं, जैसे कि पशु प्रतिरक्षा प्रयोगों में हस्तक्षेप करना या प्रोटीन की जैविक गतिविधि को प्रभावित करना। इसलिए, प्रोटीन के सामान्य कार्य और प्रयोगों की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए इन अनावश्यक फ़्यूज़न टैग को हटाना महत्वपूर्ण है।
तालिका 1. सामान्य फ्यूजन टैग और एंजाइम क्लीवेज विधियों के कार्यों का परिचय
| फ्यूजन टैग | आकार (केडीए) | समारोह | सामान्य एंजाइमी विखंडन विधियां |
| उसका | 0.84 | शुद्धिकरण के लिए लाभदायक, घुलनशील/समावेशी शरीर प्रोटीन को शुद्ध करने में सक्षम। | टीईवी प्रोटीएज |
| झंडा | 1.01 | उद्देश्य प्रोटीन F के साथ जुड़ गयाअंतराल टैग को एफ के खिलाफ एंटीबॉडी द्वारा पहचाना जा सकता हैअंतराल, ताकि F युक्त संलयन प्रोटीनअंतराल टैग का पता वेस्टर्न ब्लॉट, एलिसा और अन्य तरीकों से लगाया और पहचाना जा सकता है। | एंटरोकाइनेज |
| जीएसटी | 26 | प्रोटीन घुलनशीलता को बढ़ाएं, केवल घुलनशील प्रोटीन को शुद्ध करने और विषाक्त प्रोटीन को ढालने में सक्षम। | थ्रोम्बिन |
| एमबीपी | 44.4 | प्रोटीन घुलनशीलता बढ़ाएँ और विषैले प्रोटीन से रक्षा करते हैं। | टीईवी प्रोटीएज |
| नुसा | 55 | प्रोटीन घुलनशीलता बढ़ाएँ और विषैले प्रोटीन से रक्षा करते हैं। | थ्रोम्बिन |
| सूमो | 11.2 | प्रोटीन की घुलनशीलता को बढ़ाएं, प्रोटीयोलाइटिक से प्रोटीन को बढ़ावा दें हाइड्रोलिसिस, और प्रोटीन की स्थिरता में सुधार। | सूमो प्रोटीएज |
आज, हम आपको फ्यूजन टैग को कुशलतापूर्वक और सटीक रूप से हटाने के लिए एक अत्याधुनिक उत्पाद - UCF.ME से परिचित कराने में प्रसन्न हैं।टीएम आरटीईवी प्रोटीज। अपनी सरल और आसान प्रयोगात्मक प्रक्रिया के साथ, यह एंजाइम आसानी से संलयन प्रोटीन से अनावश्यक टैग को अलग कर सकता है, जिससे उच्च शुद्धता वाले लक्ष्य प्रोटीन प्राप्त होते हैं।
यूसीएफ.एमईटीएम आरटीईवी प्रोटीएज
TEV प्रोटीज एक प्रोटीज है जिसका व्यापक रूप से पुनः संयोजक प्रोटीन संलयन टैग के विभाजन के लिए उपयोग किया जाता है, जो अपनी उच्च साइट विशिष्टता के लिए जाना जाता है। यह सख्ती से सात-अमीनो-एसिड अनुक्रम EXXYXQ↓(G/S) को पहचानता है और ग्लूटामाइन और ग्लाइसिन या सेरीन के बीच सटीक विभाजन करता है। सबसे आम सात-अमीनो-एसिड अनुक्रम Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly है। यह विशिष्टता प्रोटीन प्रसंस्करण प्रक्रिया में सटीकता और दक्षता सुनिश्चित करती है।
चित्र 2. टीईवी प्रोटीएज़ की क्रियाविधि का योजनाबद्ध आरेख[2]
यूसीएफ.एमईटीएम आरटीईवी प्रोटीज एक पुनः संयोजक प्रोटीज है जिसे आनुवंशिक रूप से इंजीनियर किया गया है और अच्छी तरह से शुद्ध किया गया है। यह न केवल प्राकृतिक टीईवी एंजाइम की पूरी कार्यात्मक गतिविधि को बरकरार रखता है, बल्कि व्यापक तापमान सीमा पर उत्कृष्ट स्थिरता और विशिष्टता भी प्रदर्शित करता है। मेजबान gDNA अवशेष टी काउसका उत्पाद है बहुत कम, व्यावहारिक अनुप्रयोगों में प्रोटीन संलयन टैग की उच्च काटने की दक्षता सुनिश्चित करना और बहिर्जात पदार्थ अवशेषों को पेश करने के जोखिम को प्रभावी ढंग से कम करना। यूसीएफ.एमईटीएम आरटीईवी प्रोटीज पीएच 7.0 और 30 डिग्री सेल्सियस की स्थितियों के तहत इष्टतम गतिविधि प्रदर्शित करता है। हालांकि, यह पीएच 6.0-8.5 और तापमान 4-30 डिग्री सेल्सियस के साथ स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला के तहत भी गतिविधि बनाए रखता है, ताकि विभिन्न प्रोटीन प्रसंस्करण आवश्यकताओं को पूरा किया जा सके। यह उल्लेखनीय है कि UCF.MEटीएम आरटीईवी प्रोटीएज के एन-टर्मिनस पर 6×हिस टैग होता है, जिसे नी-एनटीए रेजिन द्वारा कुशलतापूर्वक हटाया जा सकता है, जिससे लक्ष्य प्रोटीन का सटीक शुद्धिकरण प्राप्त होता है।
प्रदर्शन प्रदर्शन
1. उच्च विखंडन दक्षता: प्रोटीन टैग को अधिक अच्छी तरह से विखंडित किया जाता है
UCF.ME युक्त फ्यूजन प्रोटीन (3 μg) का उपयोग करनाटीएम सब्सट्रेट के रूप में rTEV प्रोटीएज क्लीवेज साइट, UCF.MEटीएम 10, 5, और 3 यू पर आरटीईवी प्रोटीज को क्रमशः जोड़ा गया, और प्रतिक्रिया 30 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए की गई। दरार प्रभाव का पता एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा लगाया गया। परिणामों से पता चला कि वाईआराम करना's UCF.MEटीएम जब इनपुट मात्रा 3 U से अधिक थी, तब rTEV प्रोटीएज़ सब्सट्रेट को कुशलतापूर्वक विभाजित कर सकता था, तथा विभाजन दक्षता >90% थी।
चित्र 3. यूसीएफ.एमई की दरार गतिविधि का सत्यापनटीएम आरटीईवी प्रोटीएज
2. कम मेज़बान जीडीएनए अवशेष: बहिर्जात पदार्थ अवशेषों को पेश करने के जोखिम को प्रभावी ढंग से कम करें
होस्ट का परीक्षण करके (ई कोलाई) UCF.ME के विभिन्न बैचों में gDNA अवशेषटीएम आरटीईवी प्रोटीज, परिणामों से पता चला कि यूसीएफ.एमई के मेजबान जीडीएनए अवशेषटीएम आरटीईवी प्रोटीएज <1 कॉपी/यू से काफी नीचे था।
चित्र 4. UCF.ME में मेजबान gDNA अवशेष के परिणामटीएम आरटीईवी प्रोटीएज
3. विस्तृत अनुप्रयोग स्थितियां: विभिन्न प्रोटीन प्रसंस्करण आवश्यकताओं को पूरा करने में सक्षम।
UCF.ME की दरार गतिविधि की पुष्टि करकेटीएम rTEV प्रोटीज को विभिन्न परिस्थितियों में परखने पर, परिणामों से पता चला कि UCF.MEटीएम आरटीईवी प्रोटीएज़ की 4-30°C की परिस्थितियों में मजबूत गतिविधि थी, जो ग्राहकों की विभिन्न अनुप्रयोग आवश्यकताओं को पूरा कर सकती थी।
| समय की प्रतिक्रिया (एच) | विभिन्न तापमानों पर विदलन गतिविधि (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
यआराम करना'की अनुशंसित फ्यूजन टैग कटिंग प्रोटीन उत्पाद
| उत्पाद नाम | उत्पाद एनभूरा रंग | |
| टीईवी प्रोटीज | यूसीएफ.एमईटीएम आरटीईवी प्रोटीएज | 20427तों |
| एंटरोकाइनेज | एंटरोकाइनेज, रिकॉम्बिनेंट | 20395ईएस |
| सूमो प्रोटीएज | सूमो प्रोटीएज | 20410ईएस |
| 3सी प्रोटीएज़ | 3सी प्रोटीएज़ | 20409ईएस |
संदर्भ:
[1] पारिख आई, क्वाट्रेकास पी. एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी[जे].वॉक्स सैंगुइनिस, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.
[2] पथ्थम्पेरुमा सी, पेज आर सी. टीईवी प्रोटीज की गतिविधि के लिए फ्लोरोसेंस डीक्वेंचिंग परख [जे]। एनालिटिकल बायोकेमिस्ट्री, 2022, 659: 114954।