हाल के वर्षों में, mRNA तकनीक के विकास और अनुप्रयोग ने ध्यान आकर्षित करना जारी रखा है। mRNA दवाओं में मानव शरीर में एंटीजन प्रोटीन को एनकोड करने वाले mRNA को टीका लगाना शामिल है। मानव कोशिकाओं के अंदर आनुवंशिक सामग्री का उपयोग करके, वे एंटीजन प्रोटीन को व्यक्त और संश्लेषित करते हैं। यह प्रक्रिया एंटीजन प्रोटीन के माध्यम से शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली को प्रेरित और सक्रिय करती है, जिसका उद्देश्य बीमारियों को रोकना और उनका इलाज करना है। mRNA दवाओं के फायदे जैसे सुरक्षा, दक्षता और छोटा चक्र है। वे एक साथ हास्य और सेलुलर प्रतिरक्षा को प्रेरित कर सकते हैं और ट्यूमर, संक्रामक रोगों, दुर्लभ रोगों, हृदय रोगों और अन्य सहित विभिन्न संकेतों में लागू किए गए हैं।
mRNA दवा विकास की पूरी प्रक्रिया को मोटे तौर पर कई चरणों में विभाजित किया जा सकता है:
अनुक्रम निर्धारण और डिजाइन- mRNA इन विट्रो प्रतिलेखन- एनकैप्सुलेशन तैयारी
पारंपरिक mRNA इन विट्रो प्रतिलेखन (IVT) के चरणों में शामिल हैं:
प्लास्मिड डीएनए निष्कर्षण और रेखीयकरण—प्लास्मिड डीएनए शुद्धिकरण—इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन (सह-ट्रांसक्रिप्शनल कैपिंग)—शुद्धिकरण—एमआरएनए स्टॉक समाधान
वनपॉट mRNA इन विट्रो प्रतिलेखन (IVT) प्रक्रिया में शामिल हैं:
प्लास्मिड डीएनए निष्कर्षण और रेखीयकरण—इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन (सह-ट्रांसक्रिप्शनल कैपिंग) - शुद्धिकरण - mRNA स्टॉक समाधान
वर्तमान में, अधिकांश मौजूदा प्रक्रियाओं में IVT चरण से पहले एंजाइमेटिक क्लीवेज के बाद प्लास्मिड डीएनए के लिए एक एकल शुद्धिकरण चरण शामिल है। एक परिपक्व mRNA अनुप्रयोग विकास केंद्र पर आधारित येसेन बायोटेक्नोलॉजी ने "वनपॉट mRNA ट्रांसक्रिप्शन" प्रक्रिया विकसित की है। इस प्रक्रिया में, एंजाइमेटिक क्लीवेज के बाद सर्कुलर प्लास्मिड डीएनए को शुद्ध नहीं किया जाता है; इसके बजाय, इसका उपयोग सीधे इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन के लिए किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप उच्च गुणवत्ता वाला mRNA स्टॉक समाधान प्राप्त होता है। यह पूरी प्रक्रिया, उत्पाद और प्रक्रिया की गुणवत्ता सुनिश्चित करते हुए, मौजूदा प्रक्रिया की अवधि को छोटा करती है।
प्रक्रिया लाभ:
- प्रक्रिया अनुकूलन, सरल संचालन के लिए IVT चरणों को कम करना।
- सामग्री की लागत कम हो जाती है, जिससे दरार के बाद शुद्धिकरण और गुणवत्ता निरीक्षण की आवश्यकता समाप्त हो जाती है।
- mRNA की गुणवत्ता और उपज को बनाए रखना।
डेटा:
1. पैदावार और अखंडता:
का उपयोग रेखीयकृत 2K, 4K, और 9K प्लाज्मिड के 1μg से, वनपॉट प्रक्रिया 150-200μg mRNA उत्पन्न कर सकती है।
| लंबाई | पैदावार | अखंडता |
| 2के | 200 माइक्रोग्राम | 94.00 % |
| 4के | 185 माइक्रोग्राम | 92.20 % |
| 9के | 150 माइक्रोग्राम | 87.50 % |
2K, 4K और 9K लंबाई वाले टुकड़ों की अखंडता का आकलन करने के लिए केशिका वैद्युतकणसंचलन (CE) का उपयोग करके अखंडता परीक्षण किया गया। 2K और 4K टुकड़ों की अखंडता >92% थी, और 9K टुकड़ों की अखंडता >87% थी।
2. mRNA कैपिंग दक्षता का पता लगाना
2K अनुक्रम की कैपिंग दक्षता का आकलन करने के लिए LC-MS का उपयोग किया गया, जिससे 99.5% की कैपिंग दक्षता सामने आई।
शीर्ष छवि: HPLC UV क्रोमैटोग्राम
निचली छवि: विखंडित आणविक भार स्पेक्ट्रम
3. mRNA पॉलीएडेनिलेशन दक्षता का पता लगाना
नमूनों की पॉलीएडेनिलीकरण दक्षता का पता लगाने के लिए एलसी-एमएस का उपयोग किया गया, जिससे परिणाम सामान्य रूप से वितरित हुए।
शीर्ष छवि: लिक्विड क्रोमैटोग्राफी टीआईसी क्रोमैटोग्राम
निचली छवि: विखंडित आणविक भार स्पेक्ट्रम
4.mRNA अभिव्यक्ति परख
दोनों का उपयोग करके संश्लेषित mRNA उत्पादों के साथ 293T कोशिकाओं का संक्रमण पारंपरिक प्रक्रिया (बाएं, रेखीयकृत प्लास्मिड व(i) शुद्धि (i) और एक-पॉट प्रक्रिया (दाएं, शुद्धिकरण के बिना रैखिककृत प्लास्मिड) ने 24 घंटे की संस्कृति के बाद प्रतिदीप्ति प्रोटीन अभिव्यक्ति में कोई अंतर नहीं दिखाया।
आदेश की जानकारी