अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (एनजीएस) ने अपनी उच्च पहचान संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता और गुणात्मक और मात्रात्मक दोनों पहचान करने की क्षमता के कारण रोगजनक पहचान, ट्यूमर उत्परिवर्तन पहचान और प्रजनन आनुवंशिकी जैसे क्षेत्रों में अत्यंत व्यापक नैदानिक और वैज्ञानिक अनुसंधान अनुप्रयोग संभावनाएं दर्शाई हैं। एनजीएस में एक मुख्य चरण के रूप में लाइब्रेरी निर्माण, अनुक्रमण गुणवत्ता को सीधे प्रभावित करता है। इन-विट्रो डायग्नोस्टिक (आईवीडी) उत्पादों के लिए पंजीकरण समीक्षा दिशानिर्देशों के आधार पर, मुख्य कच्चे माल के शोध डेटा प्रदान किए जाने की आवश्यकता है। कच्चे माल के सबसे उपयुक्त स्रोत का निर्धारण करने के लिए बुनियादी जानकारी, पैरामीटर संकेतक और कच्चे माल की आपूर्ति स्रोतों जैसे कारकों को मिलाकर एक व्यापक विश्लेषण और सत्यापन किया जाना चाहिए। पारंपरिक डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया में मुख्य रूप से सीडीएनए संश्लेषण, डीएनए विखंडन, एडेप्टर लिगेशन और लाइब्रेरी प्रवर्धन जैसे प्रमुख चरण शामिल होते हैं। विभिन्न चरणों में कई प्रकार के कच्चे माल के एंजाइम शामिल होते हैं। कच्चे माल के एंजाइम की जांच से शोध चक्र लंबा हो जाता है। इस आधार पर, लागत प्रभावी और सरल पुस्तकालय निर्माण मॉड्यूल उत्पाद आईवीडी उत्पादों के विकास के लिए एक नया विकल्प बन गए हैं।
चित्र 1. पारंपरिक डीएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया (बाएं) और आरएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया (दाएं), इल्युमिना प्लेटफॉर्म को उदाहरण के रूप में लेते हुए
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन संश्लेषण मुख्य भाग है आरएनए-सीक का, नया उच्च प्रकार दक्षता रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, जो उच्च संवेदनशीलता, उच्च जैसे कई कार्यों को एकीकृत करता है उपज सीडीएनए की संरचना, तथा जटिल संरचनाओं के टेम्पलेट्स के साथ संगतता, एक शोध हॉटस्पॉट है। यीसेन के ज़ाइमएडिटर™ एंजाइम संशोधन प्लेटफार्म ने एम-एमएलवी के दिशात्मक संशोधन के माध्यम से व्यापक रूप से बेहतर प्रदर्शन के साथ एक सर्वांगीण रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उत्पाद प्राप्त किया है। इसका उपयोग कई अनुप्रयोग परिदृश्यों में किया जा सकता है, जैसे कि आरएनए-सीक, एकल-कोशिका अनुक्रमण, सीडीएनए क्लोनिंग और लाइब्रेरी निर्माण।
चित्र 2. RNA-seq में लागू 13488ES का प्रदर्शन
अनुक्रमण प्लेटफॉर्म की छोटी पठन लंबाई द्वारा सीमित, लाइब्रेरी निर्माण से पहले डीएनए को यादृच्छिक रूप से खंडित करने की आवश्यकता होती है। प्रारंभिक अवस्था में, एकरूपता और पूर्वाग्रह की समस्याओं के कारण एंजाइमी विखंडन कठिन था। येसेन बायोटेक्नोलॉजी दो अद्वितीय विखंडन एंजाइम विकसित किए हैं, एक जोरदार ढंग से कार्य करने वाला विखंडन एंजाइम जो 37℃ पर कार्य करता है 3-30 मिनट के लिए और एक हल्के से अभिनय विखंडन एंजाइम जो 30 डिग्री सेल्सियस पर कार्य करता है 10-40 मिनट के लिए। यादृच्छिक विखंडन पर आधारित एंजाइमेटिक विखंडन उत्पाद धीरे-धीरे अपनी कमियों में सुधार कर रहे हैं, इन्हें डीएनए विखंडन, अंत मरम्मत और ए-टेलिंग के लिए मॉड्यूलर उत्पादों में संयोजित किया जाता है, जो विभिन्न नमूनों और विभिन्न अनुक्रमण प्रकारों की असंख्य मांगों को पूरा करते हैं।
चित्र 3. विभिन्न डीएनए विखंडन एंजाइमों के विखंडन प्रभाव: सक्रिय रूप से कार्य करने वाला विखंडन एंजाइम (बाएं) और हल्का रूप से कार्य करने वाला विखंडन एंजाइम (दाएं)
पुस्तकालय रूपांतरण दर पुस्तकालय की गुणवत्ता के मूल्यांकन के लिए एक महत्वपूर्ण संकेतक है, कुछ हद तक उच्च पुस्तकालय रूपांतरण दर का मतलब बेहतर पुस्तकालय समृद्धि और अनुक्रमित डेटा की बेहतर एकरूपता है। परम्परागत T4 DNA लाइगेज उच्च दक्षता वाले लिगेशन को अनुकूलित करने पर केंद्रित है, लेकिन इसके टुकड़े स्वयं लिगेशन के लिए प्रवण होते हैं, जिससे लाइब्रेरी रूपांतरण दर कम हो जाती है और लाइब्रेरी समृद्धि और अनुक्रमण गुणवत्ता प्रभावित होती है। येसेन ज़ाइमएडिटर™ एंजाइम इंजीनियरिंग प्लेटफॉर्म एक नया उत्परिवर्ती प्राप्त करने के लिए टी4 डीएनए लाइगेस पर दिशात्मक संशोधन करता है, सावधानीपूर्वक अनुकूलित बंधन बफर के साथ संयुक्त, उच्च तापीय स्थिरता और कम खंड स्व-बंधन दर के साथ बंधन मॉड्यूल उत्पाद विकसित किया गया है, जो लाइब्रेरी रूपांतरण दर में काफी सुधार करता है।
चित्र 4. थर्मल स्थिरता और लिंकर अवशेष विश्लेषण 12996ईएस
एनजीएस लाइब्रेरी तैयारी विधियों में पीसीआर प्रवर्धन एंजाइम की आवश्यकता होती है। अधिकांश उच्च-निष्ठा डीएनए पॉलीमरेज़ में 5'→3' पॉलीमरेज़ गतिविधि और 3'→5' एक्सोन्यूक्लिऐस गतिविधि होती है, यह 5'→3' दिशा में डीएनए को संश्लेषित कर सकता है, तथा त्रुटिपूर्ण रूप से सम्मिलित क्षारों को सही कर सकता है, इस प्रकार, यह तेजी से और उच्च निष्ठा के साथ डीएनए खंडों को बढ़ा सकता है। लेकिन कुछ एंजाइम विशेष रूप से एनजीएस के लिए डिज़ाइन किए गए हैं, ऐसे बहुत कम लाइब्रेरी प्रवर्धन उत्पाद हैं जो कुशल, सटीक, विशिष्ट हों, तथा विभिन्न आकारों और GC सामग्री के लक्ष्यों को बिना किसी पूर्वाग्रह के प्रवर्धित करने में सक्षम हों, तथा साथ ही प्राइमरों को पहले से मिश्रित करने की क्षमता रखते हों। यीसेन बायोटेक्नोलॉजी ने एक अद्वितीय डिजाइन और एक अनुकूलित हॉट स्टार्ट पीसीआर प्रीमिक्स के साथ एक अत्यधिक सटीक डीएनए पॉलीमरेज़ विकसित किया है, यह विशेष रूप से कुशल, उच्च-निष्ठा और कम-पूर्वाग्रह एनजीएस लाइब्रेरी प्रवर्धन के लिए डिज़ाइन किया गया है, जो जटिल एनजीएस लाइब्रेरी प्रवर्धन की चुनौतियों का समाधान करता है।
चित्र 5. 12980ES की स्थिरता और प्रवर्धन त्रुटि दर विश्लेषण
एनजीएस लाइब्रेरी निर्माण मॉड्यूल उत्पाद की उपरोक्त श्रृंखला के अलावा, हम वन-स्टॉप कच्चे एंजाइम उत्पाद भी प्रदान करते हैं, विभिन्न ग्राहकों की संयुक्त आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए। येसेन के एनजीएस पुस्तकालय निर्माण कच्चे माल के उत्पाद सख्त कारखाने गुणवत्ता नियंत्रण मानकों, सख्त बैच प्रदर्शन और स्थिरता गुणवत्ता नियंत्रण से गुजरते हैं, ताकि आप बिना किसी चिंता के पुस्तकालयों का निर्माण कर सकें।
| उत्पाद श्रेणी | प्रोडक्ट का नाम | कैट.नं. | टिप्पणी |
| कुशल सीडीएनए संश्लेषण | हाईफेयर™ अल्ट्रा रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस（200 U/μL） | 14604ईएस | रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन एंजाइम |
| हाईफ़ एनजीएस™ डीएस-सीडीएनए संश्लेषण किट | 13488ईएस | सीडीएनए संश्लेषण मॉड्यूल | |
| डीएनए विखंडन और अंत-मरम्मत और ए-टेलिंग | हाईएफ़™ स्मेरेज़ | 12907ईएस | डीएनए फ्रैगमेंटेज |
| Hieff NGS™ OnePot प्रो डीएनए विखंडन मॉड्यूल (अंत मरम्मत और dA-tailing प्लस) | 12619ईएस | डीएनए विखंडन और अंत-मरम्मत और ए-टेलिंग मॉड्यूल | |
| मरम्मत और ए-टेलिंग | Hieff NGS® फास्ट-पेस एंड रिपेयर/dA-टेलिंग मॉड्यूल | 12608ईएस | अंतिम मरम्मत और ए-टेलिंग मॉड्यूल |
| एडाप्टर बंधन | 10299ईएस | टी4 डीएनए लाइगेज | |
| पुस्तकालय प्रवर्धन | 2× अल्टिमा एचएफ एम्पलीफिकेशन मिक्स | 13344ईएस | उच्च-निष्ठा एंजाइम |