ग्लाइकोप्रोटिओमिक्स और एंटीबॉडी दवा अनुसंधान के तेजी से विकास के साथ, ग्लाइकोसिलेशन संशोधन ने भी बहुत ध्यान आकर्षित किया है। कोशिकाओं और कोशिकाओं के बीच, और कोशिकाओं और रोगजनकों के बीच संपर्क मुख्य रूप से शर्करा और प्रोटीन की बातचीत के माध्यम से पूरा होता है, और ग्लाइकोसिलेशन ग्लाइकोकॉन्जुगेट्स के आसंजन गुणों को निर्धारित करता है। IgG में, Fc क्षेत्र में Asn297 पर संरक्षित N-लिंक्ड ग्लाइकोसिलेशन भी इसकी गतिविधि के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, कुछ एंटीबॉडी में अतिरिक्त N-ग्लाइकन भी होते हैं, जो Fc क्षेत्र में Asn297 पर संरक्षित साइट के साथ मिलकर एंटीबॉडी की पहचान, अर्ध-जीवन और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रभावित करते हैं।
प्रोटीन ग्लाइकोसिलेशन एक जटिल पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन है जिसमें प्रोटीन पर विशिष्ट साइटों पर ग्लाइकेन चेन का कनेक्शन शामिल है। ग्लाइकेन चेन के प्रकार के आधार पर, ग्लाइकोप्रोटीन को एन-लिंक्ड ग्लाइकोप्रोटीन, ओ-लिंक्ड ग्लाइकोप्रोटीन आदि में विभाजित किया जाता है; इसके अलावा, प्रोटीन ग्लाइकोसिलेशन भी मेजबान सेल प्रकार और किण्वन स्थितियों (जैसे संस्कृति माध्यम, पीएच मान, तापमान, आदि) से प्रभावित होता है। इसलिए, ग्लाइकोप्रोटीन में आमतौर पर ग्लाइकोसिलेशन पैटर्न में विविधता होती है, जिसमें ग्लाइकोसिलेशन साइट्स, ग्लाइकोसिलेशन स्तर और ग्लाइकेन चेन की विशिष्ट संरचना शामिल होती है, जिससे ग्लाइकेन चेन विश्लेषण और संरचनात्मक लक्षण वर्णन कार्य बेहद चुनौतीपूर्ण हो जाता है। ग्लाइकेन चेन संरचनात्मक जानकारी की अधिकतम मात्रा प्राप्त करने के लिए, ग्लाइकेन चेन विश्लेषण की मुख्य रणनीति पहले प्रोटीन से ग्लाइकेन चेन को मुक्त करना और फिर विस्तृत विश्लेषण और लक्षण वर्णन करना है। इस रणनीति में, एक कुशल, सटीक और स्थिर डीग्लाइकोसिलेशन विधि महत्वपूर्ण है।
वर्तमान में डिग्लाइकोसिलेशन के लिए एंजाइमेटिक विधियों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। एन-लिंक्ड ग्लाइकेन के लिए, आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले एंजाइमों में पीएनजीएज़ एफ, एंडो एच और एंडो एस शामिल हैं।
उत्पाद परिचय
पीएनजीएएसई एफ लगभग सभी एन-लिंक्ड को हटाने के लिए सबसे प्रभावी एंजाइमेटिक विधि है ग्लाइकोप्रोटीन में ऑलिगोसेकेराइड, जो एस्परैगिन द्वारा जुड़े उच्च-मैनोज़, हाइब्रिड और जटिल ऑलिगोसेकेराइड ग्लाइकोप्रोटीन को अलग कर सकते हैं, विशेष रूप से एन-लिंक्ड ग्लाइकेन को हटाते हैं। दरार स्थल है: सबसे भीतरी एन-एसिटाइलग्लुकोसामिन (GlcNAc) और एस्परैगिन अवशेष के बीच एमाइड बॉन्ड, जबकि एंजाइमेटिक हाइड्रोलिसिस के बाद प्रोटीन पर एस्परैगिन को एस्पार्टिक एसिड में परिवर्तित करना।
जब α1-6 फ्यूकोस GlcNAc कोर में स्थित होता है, तो PNGase F भी काट सकता है; केवल जब α1-3 फ्यूकोस GlcNAc कोर में स्थित होता है (पौधे और कीट ग्लाइकोप्रोटीन में सामान्य), तो PNGase F नहीं काट सकता।
हमारी कंपनी प्रदान करती है पारंपरिक PNGase एफ (कैट#20407ES)，हालाँकि, पारंपरिक PNGase F एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया में एंटीबॉडी N-ग्लाइकन को रिलीज़ करने के लिए कई घंटों की आवश्यकता होती है, और ग्लाइकन रिलीज़ के लिए प्राथमिकता के कारण, अपूर्ण डीग्लाइकोसिलेशन पक्षपाती परिणामों को जन्म दे सकता है, और प्राप्त ग्लाइकन वितरण चिकित्सीय एंटीबॉडी की सही संरचना का प्रतिनिधित्व नहीं कर सकता है। इसलिए, एंटीबॉडी और एंटीबॉडी फ़्यूज़न प्रोटीन और अन्य बायोथेरेप्यूटिक एजेंटों की उत्पादन प्रक्रिया के दौरान ग्लाइकोसिलेशन निगरानी के लिए जितनी जल्दी हो सके एक सटीक एन-ग्लाइकन प्रोफ़ाइल प्राप्त करना महत्वपूर्ण है।
फास्ट पीएनजीएएस एफ (कैट#20406ES) यह एक अनुकूलित पुनः संयोजक अभिकर्मक है जो कुछ ही मिनटों में एंटीबॉडी, इम्युनोग्लोबुलिन, फ्यूजन प्रोटीन और अन्य ग्लाइकोप्रोटीन को तेजी से और पूरी तरह से डीग्लाइकोसिलेट कर सकता है। यह एंजाइम जल्दी और बिना किसी वरीयता के सभी एन-ग्लाइकन को हटा सकता है और इसका उपयोग सीधे डाउनस्ट्रीम क्रोमैटोग्राफी या मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के लिए किया जा सकता है।
उत्पाद की विशेषताएँ:
तेज़: कुछ ही मिनटों में पूर्ण एवं तीव्र डीग्लाइकोसिलेशन।
उच्च शुद्धता: कोई प्रोटीएज़, ग्लाइकोसिडेज़ संदूषण नहीं, शुद्धता ≥95%.
गैर-चयनात्मक: शीघ्रता से और बिना किसी वरीयता के सभी एन-ग्लाइकेन को हटा दें।
अच्छी संगतता: सीधे डाउनस्ट्रीम क्रोमैटोग्राफी या मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है।
एंडो एच एक पुनः संयोजक ग्लाइकोसिडेस है जो एन-ग्लाइकोप्रोटीन में उच्च-मैनोज़ और कुछ हाइब्रिड-प्रकार के ओलिगोसेकेराइडों की चिटोबायोस कोर संरचना को विभाजित कर सकता है, और ग्लाइकोप्रोटीन से एन-लिंक्ड उच्च-मैनोज़ को हटा सकता है।
हमारी कंपनी वर्तमान में यीस्ट पुनः संयोजक व्यक्त एंडो एच (कैट # 20414ES) प्रदान करती है।
एंडो एस एक अत्यधिक विशिष्ट ग्लाइकोसिडेस है जो वाइल्ड-टाइप आईजीजी हेवी चेन की चिटोबायोज कोर संरचनाओं के बीच एन-लिंक्ड शर्करा को विभाजित कर सकता है। ग्लाइकोसिडेस एस की गतिविधि पेप्टाइड पर पूरी तरह से निर्भर नहीं है, इसलिए एक्स एक प्रोटीन, पेप्टाइड, एस्परैगिन या मुक्त ओलिगोसेकेराइड हो सकता है। ग्लाइकोसिडेस एस सब्सट्रेट पर कोर अल्फा1-6 फ्यूकोस या बाईसेक्टिंग एन-एसिटाइलग्लुकोसामिन की उपस्थिति की परवाह किए बिना सक्रिय है। हालांकि, यह उन ओलिगोसेकेराइड के खिलाफ निष्क्रिय है जो ट्राई- या टेट्रा-एंटेनेरी सियालिलेटेड और डिसियालेटेड हैं।
हमारी कंपनी वर्तमान में ई.कोली पुनः संयोजक व्यक्त एंडो एस (कैट#20413ईएस) प्रदान करती है।
खरीद गाइड
| उत्पाद संख्या | 20406ईएस | 20407ईएस | 20414ईएस | 20413ईएस |
| प्रोडक्ट का नाम | ||||
| स्रोत | यीस्ट पुनः संयोजक अभिव्यक्ति | यीस्ट पुनः संयोजक अभिव्यक्ति | यीस्ट पुनः संयोजक अभिव्यक्ति | इ.कोलाई पुनः संयोजक अभिव्यक्ति |
| विशिष्ट गतिविधि | लागू नहीं | 100000यू/एमएल | 1000000यू/एमएल | 8000 यू/एमजी |
| दरार स्थल | लगभग सभी एन-लिंक्ड ग्लाइकेन | लगभग सभी एन-लिंक्ड ग्लाइकेन | एन-लिंक्ड उच्च मैनोज़ ग्लाइकन्स | IgG भारी श्रृंखला की कोर डाइसैकेराइड संरचना के भीतर विदलित होता है |
| पाचन समय | 10 मिनट | 1-3 घंटे | 1-3 घंटे | 1 घंटा |
| ग्लाइकोसिलेशन | उपयुक्त | उपयुक्त | उपयुक्त | उपयुक्त |
| प्रोटीन संरचना | उपयुक्त | उपयुक्त | उपयुक्त | उपयुक्त |
परीक्षण डेटा
1.फास्ट पीएनजीएएस एफ परीक्षा
1: प्रोटीन मार्करकैट#20350ES) 2: प्रतियोगी + सब्सट्रेट या एंटीबॉडी 3: प्रतियोगी + सब्सट्रेट या एंटीबॉडी
4: येसेन फास्ट पीएनजीएएस एफ + सब्सट्रेट या एंटीबॉडी 5: येसेन फास्ट पीएनजीएएस एफ + सब्सट्रेट या एंटीबॉडी 6: सब्सट्रेट या एंटीबॉडी 7: येसेन फास्ट पीएनजीएएस एफ 8: प्रतियोगी
2.एंडो एच टेस्ट
चित्र 2. एंडो एच एंजाइमेटिक विखंडन प्रभाव (सब्सट्रेट)
3.एंडो एस टेस्ट
उत्पाद की जानकारी
| प्रोडक्ट का नाम | उत्पाद संख्या | विनिर्देश |
| 20406ईएस20/50 | 20 टी/50 टी | |
| 20407ईएस01/02 | 15000 यू /75000 यू | |
| 20414ईएस92/97 | 10000 यू /50000 यू | |
| 20413ईएस80/90 | 1000 यू/5 x 1000 यू |