मधुमेह रोगियों के लिए अधिक उपचार विकल्प प्रदान करने के लिए, 21वीं सदी की शुरुआत में कुछ नई मधुमेह दवाएँ सामने आईं, जैसे कि ग्लूकागन-जैसे पेप्टाइड-1 (GLP-1) एनालॉग। GLP-1 एनालॉग की प्रतिनिधि दवाओं में से एक के रूप में सेमाग्लूटाइड, कई नैदानिक परीक्षण अध्ययनों में विभिन्न मौखिक हाइपोग्लाइसेमिक दवाओं के साथ संयुक्त होने पर रक्त शर्करा को प्रभावी ढंग से नियंत्रित करने के लिए सिद्ध हुआ है, और रोगियों को वजन कम करने, सिस्टोलिक दबाव को कम करने और अग्नाशय के β-कोशिका कार्य को बेहतर बनाने में मदद कर सकता है। इसके तीन फॉर्मूलेशन (हाइपोग्लाइसेमिक इंजेक्शन ओज़ेम्पिक, मौखिक हाइपोग्लाइसेमिक दवा राइबेलसस और वजन घटाने वाला इंजेक्शन वेगोवी) ने 2023 में बिक्री में $20 बिलियन को पार कर लिया। रक्त शर्करा में कमी और वजन में कमीउद्योग को उम्मीद है कि सेमाग्लूटाइड कुछ समय के लिए मजबूत बिक्री गति बनाए रखेगा, जिससे कई कंपनियां लेआउट के लिए प्रतिस्पर्धा करने के लिए आकर्षित होंगी!
सेमाग्लूटाइड की मुख्य श्रृंखला संरचना 29-एमिनो एसिड मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड Arg34GLP-1(9-37) या 27-एमिनो एसिड मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड Arg34GLP-1(11-37) है। इस मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड के उत्पादन और विनिर्माण में मुख्य रूप से रासायनिक संश्लेषण और बायोप्रेपरेशन विधियाँ शामिल हैं। रासायनिक संश्लेषण की तुलना में, बायोप्रेपरेशन ने क्षमता की अड़चन को तोड़ दिया है और बड़े पैमाने पर निरंतर उत्पादन के लिए अधिक उपयुक्त है, जो उत्पादन लागत को और कम कर सकता है और अधिक महत्वपूर्ण आर्थिक लाभ ला सकता है।
तालिका 1. सेमाग्लूटाइड मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड्स के लिए बायोप्रेपरेशन विधियों के उदाहरण
| बायोप्रेपरेशन विधि（उदाहरण 1）
| बायोप्रेपरेशन विधि（उदाहरण 2）
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| जीन संश्लेषण | एक फ्यूजन प्रोटीन अनुक्रम को संश्लेषित करें, जिसमें एक फ्यूजन पेप्टाइड, एंटरोकाइनेज क्लीवेज साइट और लक्ष्य मुख्य अणु अनुक्रम शामिल है | जीएलपी-1(9-37) जीन अनुक्रम के साथ एक अग्रानुक्रम अभिव्यक्ति अनुक्रम को संश्लेषित करें |
| इंजीनियरिंग बैक्टीरिया निर्माण | पुनः संयोजक इंजीनियर बैक्टीरिया के निर्माण के लिए ई. कोली में प्रवेश करें | पुनः संयोजक इंजीनियर बैक्टीरिया के निर्माण के लिए ई. कोली में प्रवेश करें |
| फ्यूजन प्रोटीन अभिव्यक्ति | फ्यूजन पेप्टाइड अनुक्रम को अनुकूलित करके, प्रोटीन के आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु और हाइड्रोफिलिसिटी को बदलकर, फ्यूजन प्रोटीन की अभिव्यक्ति को प्रभावी ढंग से बढ़ाया जाता है
| उच्च घनत्व किण्वन प्रेरण के बाद, एक अग्रानुक्रम अभिव्यक्ति समावेशन शरीर प्रोटीन GLP-1(9-37) व्यक्त करता है, और पुनर्संयोजन एक घुलनशील प्रोटीन उत्पन्न करता है |
| मध्यवर्ती पेप्टाइड अधिग्रहण | संलयन प्रोटीन के एंटरोकाइनेज विभाजन, शुद्धिकरण और अन्य चरणों से गुजरने के बाद, सेमाग्लूटाइड मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड Arg34GLP-1(9-37) प्राप्त किया जा सकता है | घुलनशील प्रोटीन को केएक्स2 एंजाइम और कार्बोक्सीपेप्टिडेज़ बी के साथ दो-चरण एंजाइम क्लीवेज और शुद्धिकरण चरणों से गुजरने के बाद प्राप्त किया जा सकता है, जिससे सेमाग्लूटाइड मध्यवर्ती पॉलीपेप्टाइड जीएलपी-1 (9-37) प्राप्त किया जा सकता है। |
कार्बोक्सीपेप्टिडेज़ बी के साथ संयुक्त एंटरोकाइनेज या केएक्स2 एंजाइम सेमाग्लूटाइड (बायोप्रेपरेशन विधि) की मुख्य पेप्टाइड श्रृंखला के लिए एक महत्वपूर्ण एंजाइम है, और एंजाइम काटने का प्रभाव और लागत उत्पादन के लिए महत्वपूर्ण हैं।यिशेंग बायोलॉजी फार्मास्युटिकल कंपनियों के लिए स्थिर एंजाइम कच्चे माल उपलब्ध कराने के लिए प्रतिबद्ध है, जो ग्राहकों को उत्पादन क्षमता और बैच स्थिरता में सुधार करने, लागत कम करने और जल्दी से प्रवेश करने में मदद करने के लिए उच्च गुणवत्ता वाले एंजाइम और पूर्ण गुणवत्ता नियंत्रण मानकों की पेशकश करता है। बाजार.
येसेन सेमाग्लूटाइड के लिए समग्र समाधान
1.रिकॉम्बिनेंट एंटरोकाइनेज
रिकॉम्बिनेंट एंटरोकाइनेज (आरईके) यह एक उच्च शुद्धता वाला गोजातीय आंत्र एंटरोकिनेज लाइट चेन सबयूनिट है, जिसमें प्राकृतिक रूप से निकाले गए एंटरोकिनेज के समान ही विशिष्ट कटिंग एंजाइम गतिविधि होती है, जिसमें एस्प-एस्प-एस्प-एस्प-लिस की कटिंग साइट होती है, जो प्रोटीन के एन-टर्मिनस पर स्थित फ्यूजन प्रोटीन को हटाने में सक्षम होती है ताकि अनावश्यक फ्यूजन टैग को हटाया जा सके, और यह एन-टर्मिनल फ्यूजन के लिए आम तौर पर चुना जाने वाला प्रोटीज है। इसमें अन्य अवशेषों पर अनियमित कटिंग का स्तर कम होता है।
यिशेंग वर्तमान में विभिन्न स्रोतों, विभिन्न ग्रेडों से पुनः संयोजक एंटरोकिनेस प्रदान करता है, तथा ग्राहकों को चुनने के लिए His टैग के साथ उपलब्ध कराता है।
येसेन रिकॉम्बिनेंट साँड़ का एंटरोकिनेज, हिस, यीस्ट में व्यक्त एक उच्च शुद्धता, उच्च गतिविधि, और अत्यधिक विशिष्ट गोजातीय एंटरोकिनेज है जो पिचिया पास्टोरिस स्राव द्वारा व्यक्त किया जाता है। यह एक विस्तृत पीएच रेंज (4.5-9.5) और एक विस्तृत तापमान रेंज के भीतर संलयन प्रोटीन को प्रभावी ढंग से विभाजित कर सकता है, और अभी भी विभिन्न डिटर्जेंट और डिनेचुरेंट्स के तहत आंशिक रूप से सक्रिय है। इस उत्पाद में हिस टैग है, जिसे आसानी से Ni के माध्यम से हटाया जा सकता है2+ काटने की प्रतिक्रिया के बाद आत्मीयता स्तंभ को शुद्ध करने से बाद की शुद्धिकरण प्रक्रिया बहुत सरल हो जाती है।
विशेषताएँ
उच्च विशिष्टता: एक विशिष्ट प्रोटीएज़ जो लाइसिन के कार्बोक्सिल छोर पर काटता है जिसमें चार एस्पार्टिक एसिड होते हैं: एस्प-एस्प-एस्प-एस्प-लिस;
उच्च शुद्धता: कोई अन्य प्रोटीएज़ नहीं, कोई गैर-विशिष्ट कटिंग नहीं;
कोई पशु मूल नहीं: पुनः संयोजक उत्पादन, कोई बहिर्जात वायरल संदूषण नहीं, उत्पादन प्रक्रिया में किसी भी पशु-व्युत्पन्न कच्चे माल का उपयोग नहीं;
स्थिर गुणवत्ता: बैच उत्पादन स्थिर और निरंतर बैच उत्पादन सुनिश्चित कर सकता है; कोई बैच-दर-बैच अंतर नहीं, स्थिर गुणवत्ता;
पर्याप्त क्षमता: 500L किण्वक ~ 50 एमयू एंटरोकाइनेज प्राप्त कर सकता है, येसेन में उत्पाद बैच आवश्यकताओं के लिए विभिन्न चरणों में विभिन्न ग्राहक आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए 5L-1500L विभिन्न सिस्टम किण्वक हैं;
विभिन्न ग्रेड उत्पाद की आपूर्ति: आर एंड डी ग्रेड (20395ES), जीएमपी ग्रेड (20396ES), जीएमपी ग्रेड उत्पाद आईएसओ 13485 गुणवत्ता प्रबंधन प्रणाली का अनुपालन करते हैं।
परीक्षण डेटा
एंटरोकाइनेज गतिविधि परीक्षण:
चित्र 1. एंजाइम काटने का प्रभाव येसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) के अनुरूप है प्रतियोगी नं.
नोट: सकारात्मक सब्सट्रेट (20391ES) एक फ्यूजन प्रोटीन है जो DDDDK (एंटरोकिनेज पहचान और कटिंग साइट) द्वारा जुड़े दो विशिष्ट प्रोटीन अनुक्रमों से बना है, जिसका कुल आणविक भार लगभग 64.6 kDa है, जिसे एंटरोकिनेज द्वारा दो स्वतंत्र प्रोटीन टुकड़ों में काटा जा सकता है, जिनका आणविक भार क्रमशः लगभग 27.9 kDa और 36.6 kDa है। एंटरोकिनेज सब्सट्रेट के रूप में इस उत्पाद का उपयोग पुनः संयोजक या प्राकृतिक एंटरोकिनेज की अर्ध-मात्रात्मक या गुणात्मक एंजाइम गतिविधि का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।
एंटरोकाइनेज शुद्धता परीक्षण:
नोट: एंटरोकिनेज का सैद्धांतिक मूल्य 22.7 kDa है। पिचिया पास्टोरिस में अभिव्यक्ति के बाद ग्लाइकोसिलेशन प्रभाव के कारण, SDS-PAGE दिखाता है कि लक्ष्य प्रोटीन का आणविक भार लगभग 40 kDa है। आम तौर पर, ग्लाइकोसिलेटेड बैंड में ऊपर की ओर चलने वाला थोड़ा फैला हुआ बैंड होगा (जैसा कि दाएं चित्र में दिखाया गया है)। हमारी कंपनी ग्राहकों को डीग्लाइकोसिलेशन एंजाइम एंडो एच (कैट # 20414) भी प्रदान कर सकती है ताकि शुद्धता को मापने के लिए जेल को डीग्लाइकोसिलेट और चलाया जा सके (जैसा कि बाएं चित्र में दिखाया गया है)।
एंटरोकाइनेज कटिंग विशिष्टता परीक्षण:
चित्र 3. येसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) में आयातित प्रतियोगी एन की तुलना में कम गैर-विशिष्ट कटिंग है
नोट: समान परिस्थितियों में, येसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) और आयातित प्रतियोगी एन के एंटरोकाइनेज का उपयोग एंजाइम कटिंग परीक्षणों के लिए किया गया था। परिणाम बताते हैं कि शुद्धिकरण के बाद, द्वारा उत्पादित गैर-विशिष्ट कटिंग अशुद्धियाँ येसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) की सांद्रता आयातित प्रतिस्पर्धी एन.
एंटरोकाइनेज बार-बार फ्रीज-थॉ, त्वरित स्थिरता परीक्षण:
चित्र 4. येसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) के बार-बार फ्रीज-थॉ, त्वरित स्थिरता परीक्षण से पता चलता है कि एंजाइम गतिविधि में महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ।
नोट: यीसेन एंटरोकाइनेज (20395ES) को यादृच्छिक रूप से 2 बैचों में चुना गया, 10 बार, 20 बार फ्रीज-थॉ दोहराया गया, एंजाइम गतिविधि प्रारंभिक एंजाइम गतिविधि से महत्वपूर्ण रूप से नहीं बदली।
25°C पर 7, 16, 32 दिन, 37°C पर 7, 14 दिन भंडारण पर, एंजाइम गतिविधि में प्रारंभिक एंजाइम गतिविधि से महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुआ।
2.रीकॉम्बिनेंट केएक्स2 एंजाइम, कार्बोक्सीपेप्टिडेज़ बी
तालिका 2. येसेन रिकॉम्बिनेंट केएक्स2 एंजाइम, कार्बोक्सीपेप्टिडेज़ बी उत्पाद चयन गाइड
| उत्पाद संख्या | 20418ईएस | 20417ईएस |
| उत्पाद नाम | पुनः संयोजक Kex2 प्रोटीज़, खमीर में व्यक्त
| पुनः संयोजक सीपीबी, ई.कोली में व्यक्त
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| उत्पाद ग्रेड | जीएमपी ग्रेड | जीएमपी ग्रेड |
| स्रोत | पिचिया पास्टोरिस से पुनः संयोजक अभिव्यक्ति | ई. से पुनः संयोजक अभिव्यक्ति. कोलाई |
| गतिविधि | ≥10.0 यूनिट/एमजी प्रो
| ≥170 यूएसपी यूनिट/एमजी प्रति
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| दरार स्थल | विशेष रूप से आर्ग-आर्ग, लाइस-आर्ग जैसे द्विक्षारकीय अमीनो अम्लों के कार्बोक्सिलिक अम्ल टर्मिनल पर पेप्टाइड बंधों को पहचानता है और उन्हें तोड़ता है | सी-टर्मिनस पर मूल अमीनो एसिड (लाइसिन, आर्जिनिन, हिस्टिडीन) के अमीनो-टर्मिनल पक्ष पर प्रोटीन को विशेष रूप से हाइड्रोलाइज करता है |
| उत्पाद व्यवहार्यता | 1. पेप्टाइड दवा उत्पादन में एंजाइम दरार की प्रक्रिया। 2. प्रोटीन का एंजाइमेटिक पाचन और पेप्टाइड मैपिंग, अनुक्रमण, आदि। | 1. पुनः संयोजक इंसुलिन और उसके एनालॉग का उत्पादन। 2.प्रोटीन के सी-टर्मिनस पर अमीनो एसिड का निर्धारण। 3. प्रोटीन के सी-टर्मिनस पर हिस्टिडीन टैग को हटाना। 4. अन्य पुनः संयोजक पेप्टाइड पदार्थों का उत्पादन। 5. कुछ विशेष यौगिकों का एंजाइमेटिक संश्लेषण। |
केएक्स2 एंजाइम को कार्बोक्सीपेप्टिडेज़ बी के साथ संयोजित किया गया: टेंडेम अभिव्यक्ति प्रक्रिया की आवश्यकताएं, एंजाइम काटने के बाद सेमाग्लूटाइड मध्यवर्ती की उच्च उपज
यआराम करना जीएमपी ग्रेड एंजाइम उत्पादन आधार
आईएसओ प्रमाणित अल्ट्रा-क्लीन आणविक एंजाइम उत्पादन आधार - UCF.MEऔद्योगिक-ग्रेड AKTA शुद्धिकरण और भौतिक-रासायनिक विश्लेषण उपकरण, सौ-लीटर उच्च-घनत्व किण्वन इकाइयों, दस-हज़ार-ग्रेड मानक स्वच्छ कार्यशालाओं और स्वचालित उत्पादन लाइनों से सुसज्जित है। इसमें 5L, 10L, 30L, 100L, 500L और 1,500L सहित विभिन्न विशिष्टताओं के किण्वन और शुद्धिकरण सिस्टम हैं, जिसमें आणविक एंजाइम औद्योगिकीकरण के क्षेत्र में 5L से 1,500L तक उत्पादन बढ़ाने की क्षमता है, जो अनुसंधान और विकास, पायलट पैमाने और बड़े पैमाने पर उत्पादन जैसे विभिन्न चरणों में डाउनस्ट्रीम ग्राहकों की मुख्य एंजाइम कच्चे माल की जरूरतों को पूरी तरह से पूरा करता है।
येसेन के पास एक मजबूत अनुसंधान एवं विकास टीम और उन्नत एंजाइम उत्पादन आधार है, जो निरंतर तकनीकी नवाचार और अनुकूलन के माध्यम से सेमाग्लूटाइड उत्पादन (रीकॉम्बिनेंट एंटरोकिनेस) के लिए प्रमुख एंजाइमों की गुणवत्ता और क्षमता में लगातार सुधार कर रहा है, तथा विभिन्न उत्पादन चरणों में ग्राहकों की विभिन्न आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए विभिन्न विशिष्टताओं के लिए ग्रेडिएंट मूल्य निर्धारण की पेशकश कर रहा है।
प्रचारात्मक उत्पाद जानकारी
| प्रोडक्ट का नाम | उत्पाद संख्या | विनिर्देश | सूची मूल्य($） | प्रोमोशनल मूल्य($） |
| 20395ईएस60/76/90/ 92/94 | 100 यू/500 यू/ 5000 यू/ 100 केयू/ 1 एमयू (1000 केयू) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
संबंधित उत्पाद जानकारी
| प्रोडक्ट का नाम | उत्पाद संख्या | विनिर्देश |
| 20391ईएस03/11 | 1 मिलीग्राम/ 4 एमजी | |
| पुनः संयोजक Kex2 प्रोटीज़, खमीर में व्यक्त | 20418ईएस60 | 100 माइक्रोग्राम |
| 20417ईएस03/10 | 1 मिलीग्राम/10 मिलीग्राम | |
| 20414ईएस92/97 | 10000 यू/50000 यू |