विवरण
पुनः संयोजक गोजातीय ईन्यूरोकिनेस यह गोजातीय एंटरोकिनेज लाइट चेन का एक उच्च शुद्धता वाला पुनः संयोजक टुकड़ा है, जिसमें अमीनो एसिड अनुक्रम गोजातीय एंटरोकिनेज लाइट चेन के समान है। इसमें प्राकृतिक रूप से निकाले गए एंटरोकिनेज के समान ही विशिष्ट दरार स्थल है, जो एस्प-एस्प-एस्प-एस्प-लिस (DDDDK) है। इसका उपयोग प्रोटीन के एन-टर्मिनस पर स्थित फ्यूजन प्रोटीन को हटाने के लिए किया जा सकता है ताकि अवांछित फ्यूजन टैग को हटाया जा सके, जिससे पुनः संयोजक फ्यूजन प्रोटीन का सटीक एन-टर्मिनल अनुक्रम सुनिश्चित हो सके। साथ ही, पुनः संयोजक साँड़ का एंटरोकाइनेज में प्राकृतिक एंजाइमों की तुलना में काटने की क्रियाशीलता अधिक होती है।
आरईकोम्बिनेंट साँड़ का इन्यूरोकिनेस, उसका, खमीर में व्यक्त यह एक उच्च शुद्धता, उच्च गतिविधि और अत्यधिक विशिष्ट गोजातीय एंटरोकिनेज है जो पिचिया पास्टोरिस स्राव द्वारा व्यक्त किया जाता है। यह एक विस्तृत पीएच रेंज (4.5-9.5) और एक विस्तृत तापमान रेंज के भीतर संलयन प्रोटीन को प्रभावी ढंग से विभाजित कर सकता है, और अभी भी विभिन्न डिटर्जेंट और डिनेचुरेंट्स के तहत आंशिक रूप से सक्रिय है। इस उत्पाद में His टैग है, जिसे Ni के माध्यम से आसानी से हटाया जा सकता है2+ काटने की प्रतिक्रिया के बाद आत्मीयता स्तंभ को शुद्ध करने से बाद की शुद्धिकरण प्रक्रिया बहुत सरल हो जाती है।
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विशेषताएँ
1. मजबूत विशिष्टता—एक विशिष्ट प्रोटीएज़ वह काटनाएस द कार्बोक्सिल टर्मिनुस लाइसिन का रोकनाइंग चार एस्पार्टिक एसिडसामने है: एस्प-एस्प-एस्प-एस्प-एस्प-लिस.
2. एचअघ पवित्रता—नहीं अन्य प्रोटीएज़,कोई गैर-विशिष्ट कटाई नहीं.
3. पशु मुक्त—पुनर्संयोजी रूप से उत्पादित, बहिर्जात वायरल संदूषण से मुक्त, तथा उत्पादन प्रक्रिया में किसी भी पशु-व्युत्पन्न सामग्री का उपयोग नहीं किया जाता है।
4.गुणवत्ता स्थिरता: बैच उत्पादन स्थिर और निरंतर बैच विनिर्माण सुनिश्चित करता है; उत्पाद बैचों के बीच कोई अंतर नहीं होता है, जिससे निरंतर गुणवत्ता सुनिश्चित होती है।
5. पर्याप्त क्षमता: एक 500L किण्वक लगभग 50 MU एंटरोकाइनेज उत्पन्न कर सकता है, और येसेन के पास 5L से 1500L तक के किण्वक हैं, जो विभिन्न चरणों में विभिन्न ग्राहकों की अलग-अलग बैच आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।
अनुप्रयोग
एल संलयन पेप्टाइड्स और प्रोटीन की उत्पादन प्रक्रिया में, इसका उपयोग प्रोटीन के एन-टर्मिनस पर स्थित संलयन प्रोटीन को हटाने के लिए किया जाता है, ताकि अवांछित संलयन टैग को हटाया जा सके, जिससे पुनः संयोजक संलयन प्रोटीन का सटीक एन-टर्मिनल अनुक्रम सुनिश्चित हो सके।
विशेष विवरण
| स्रोत | यीस्ट पुनः संयोजक अभिव्यक्ति |
| आणविक वजन* | सैद्धांतिक मान 22.7 kDa |
| उपस्थिति | बाँझ तरल |
| भंडारण बफर | 50 मिमी ट्रिस-एचसीएल, 250 मिमी NaCl, 2 मिमी CaCl2, 50% ग्लिसरॉल, पीएच 8.0 |
| एंजाइम सांद्रता | 5 यू/μएल |
| पवित्रता | ≥95% |
| गतिविधि परिभाषा | क्रियाशीलता की एक इकाई को 25°C, 12-16 घंटे, 25 mM ट्रिस-HCl बफर सिस्टम, pH 8.0 की स्थिति में एंटरोकाइनेज क्लीवेज साइट के साथ 500 μg फ्यूजन प्रोटीन के 95% को काटने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है। |
*पिचिया पास्टोरिस में अभिव्यक्ति के बाद ग्लाइकोसिलेशन प्रभाव के कारण, एसडीएस-पीएजीई द्वारा दिखाया गया लक्ष्य प्रोटीन का आणविक भार लगभग 40 केडीए है।
एंटरोकाइनेज (ईके) की प्रति इकाई विभाजित पुनः संयोजक प्रोटीन की मात्रा
| आपूर्तिकर्ताओं | येसेन 5 U/μL | थर्मो 1 यू/μएल | एनईबी 16 यू/μएल |
| गतिविधि | 500 माइक्रोग्राम/यू | 20 μg/यू | 25 माइक्रोग्राम/यू |
भंडारण
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कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।