पृष्ठभूमि विवरण

प्रोटीन शुद्धिकरण प्रयोगात्मक नमूने में कुल प्रोटीन से लक्ष्य प्रोटीन को अलग करने की प्रक्रिया है, जबकि लक्ष्य प्रोटीन की जैविक गतिविधि और रासायनिक अखंडता को बनाए रखना भी आवश्यक है। वेक्टर के निर्माण के दौरान, कुछ आवश्यक अभिव्यक्ति तत्वों के अलावा, कोडन अनुकूलन और टैग के चयन पर विचार करना भी आवश्यक है। सही टैग चुनना न केवल प्रोटीन शुद्धिकरण और प्रोटीन घुलनशीलता को बढ़ावा देने के लिए फायदेमंद है, बल्कि प्रोटीन की संरचना और कार्य और डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों को भी प्रभावित नहीं करना चाहिए। यह खंड His और GST टैग को पेश करने पर केंद्रित है।

तालिका नंबर एक। उसका और जीएसटी टैग परिचय

टैग	आकार केडीए	अनुक्रम	पवित्रता	घुलनशीलता	टैग हटाना	टैग क्लीवेज एंजाइम
उसका	~0.84	ह्ह्ह्हह्ह	+	+	आवश्यक नहीं	टीईवी प्रोटीएज
जीएसटी	26	211 से बना अमीनो अम्ल	++	++	आवश्यक	3सी प्रोटीएज़/पीएसपी

हिज टैग प्रोटीन एफिनिटी शुद्धिकरण

हिससेप नी-एनटीए एगरोज रेजिन मैट्रिक्स के रूप में अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड एगरोज जेल पर आधारित है, जो लिगैंड के रूप में टेट्रा-कोऑर्डिनेटेड नाइट्रिलोट्राइएसिटिक एसिड (एनटीए) के साथ रासायनिक रूप से युग्मित है, और निकल आयनों (नी) को चिलेट करने के बाद²⁺), यह अष्टफलक के केंद्र में निकेल आयनों के साथ एक बहुत ही स्थिर अष्टफलकीय संरचना बनाता है। यह संरचना निकेल आयनों को छोटे अणु हमलों से बचा सकती है। Ni-IDA राल की तुलना में, यह अधिक स्थिर है और कठोर परिस्थितियों में कम करने वाले एजेंटों, विकृतीकरण एजेंटों या युग्मन एजेंटों की कुछ सांद्रता का सामना कर सकता है। Ni-TED राल की तुलना में, इसमें लक्ष्य प्रोटीन के लिए बड़ी सोखने की क्षमता है। यह प्रयोगशालाओं में His-टैग किए गए प्रोटीन को शुद्ध करने के लिए अपरिहार्य रेजिन में से एक बन गया है।

चित्र 1. हिज रेजिन का उत्पाद सिद्धांत आरेख।

तालिका 2. येसेन उनका शुद्धिकरण उत्पाद चयन गाइड

उत्पाद संख्या	20502ईएस	20503ईएस	20504ईएस/20505ईएस	20561ईएस
प्रोडक्ट का नाम	हिससेप नी-एनटीए एगरोज़ रेज़िन	हिससेप नी-एनटीए अगारोज रेजिन 6एफएफ	HisSep Ni-NTA 6FF क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 5 एमएल / 1 एमएल	HisSep Ni-NTA मैगबीड्स
मैट्रिक्स	क्रॉस-लिंक्ड 6% एगरोज़ जेल	अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड 6% एगरोज़ जेल	अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड 6% एगरोज़ जेल	चुंबकीय एगरोज़ माइक्रोस्फीयर
दबाव प्रतिरोध	0.1 एमपीए, 1 छड़	0.3 एमपीए, 3 छड़	0.3 एमपीए, 3 छड़	एन/ए
क्षमता	＞40 एमजी 6×हिस-टैग्ड प्रोटीन/एमएल मैट्रिक्स	＞40 एमजी 6×हिस-टैग्ड प्रोटीन/एमएल मैट्रिक्स		> 40 मिलीग्राम 6×हिस-टैग्ड प्रोटीन/एमएल चुंबकीय मोती
शुद्धिकरण सुझाव	मैट्रिक्स औसत दबाव प्रतिरोध के साथ, ऊष्मायन विधि के लिए उपयुक्त, गुरुत्वाकर्षण स्तंभ छोटे पैमाने पर शुद्धि	उच्च दबाव प्रतिरोध के साथ मैट्रिक्स, प्रोटीन शुद्धि उपकरण के साथ औद्योगिक बड़े पैमाने पर प्रोटीन शुद्धि के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है		चुंबकीय पृथक्करण के माध्यम से तेज और सुविधाजनक प्रोटीन शुद्धिकरण
सहनशीलता	8 एम यूरिया, 6 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड, 0.5-1 एमएम डीटीटी, 1 एमएम ईडीटीए, आदि।
आवेदन	हिस-टैग प्रोटीन शुद्धिकरण पहली पसंद है, उच्च भार, औसत सहनशीलता, विशेष रूप से प्रोकैरियोटिक अभिव्यक्ति शुद्धिकरण प्रणाली के लिए उपयुक्त

परिशिष्ट: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) उत्पाद विशेषताएँ

1. पारंपरिक पूर्व-पैक कॉलम और रेजिन की तुलना में, नमूनों के कई सेंट्रीफ्यूजेशन और नमूना प्रवाह दर के नियंत्रण की आवश्यकता नहीं होती है, जिससे शुद्धिकरण का समय बहुत कम हो जाता है।
2. एक-चरण शुद्धिकरण से लक्ष्य प्रोटीन की 95% से अधिक शुद्धता प्राप्त की जा सकती है।
3. उच्च लक्ष्य प्रोटीन उपज: उपज 70-80% तक पहुंच सकती है।
4. 5 बार तक पुनः उपयोग किया जा सकता है।
5. लक्ष्य प्रोटीन की सांद्रता और मात्रा को समायोजित करना आसान है।
6. प्रोटीन की थोड़ी हानि होती है, तथा प्रोटीन विकृतीकरण या अवक्षेपण का कोई खतरा नहीं होता।

जीएसटी टैग प्रोटीन एफिनिटी शुद्धिकरण मीडिया

जीएसटी टैग प्रोटीन एफिनिटी क्रोमैटोग्राफी सल्फर बॉन्ड के माध्यम से जीएसटी फ्यूजन प्रोटीन और फिक्स्ड ग्लूटाथियोन (जीएसएच) के बीच सहसंयोजक आत्मीयता का उपयोग करती है, और जीएसएच एक्सचेंज एल्यूशन के सिद्धांत के आधार पर शुद्ध करती है। इस शुद्धिकरण में, एक ग्लूटाथियोन को सल्फर बॉन्ड के माध्यम से जेल की भुजा के साथ जोड़ा जाता है, और फिर ग्लूटाथियोन और ग्लूटाथियोन एस-ट्रांसफरेज (यानी, जीएसटी-टैग) के बीच विशिष्ट क्रिया बल का उपयोग जीएसटी-टैग किए गए फ्यूजन प्रोटीन को जेल पर भुजा ग्लूटाथियोन के साथ संयोजित करने के लिए किया जाता है, जिससे लेबल किए गए प्रोटीन को अन्य प्रोटीन से अलग किया जाता है। ग्लूटाथियोन में आमतौर पर ऑक्सीकृत रूप GSSG और कम किया हुआ रूप GSH होता है। जब हम GSH एल्यूशन का उपयोग करते हैं, तो GSH फ्यूजन प्रोटीन के साथ संयोजन करने के लिए जेल के ग्लूटाथियोन के साथ प्रतिस्पर्धा करेगा, जिससे लक्ष्य प्रोटीन को हटा दिया जाएगा।

जीएसटीसेप ग्लूटाथियोन एगरोज़ रेज़िन एक जीएसटी टैग प्रोटीन शुद्धिकरण रेज़िन है, जो संरचनात्मक रूप से 12-परमाणु भुजा के माध्यम से मैट्रिक्स के रूप में 6% एगरोज़ जेल के साथ कम किए गए ग्लूटाथियोन को रासायनिक रूप से सहसंयोजक रूप से संयोजित करके बनाया गया है। इस डिज़ाइन ने रेज़िन की शुद्धिकरण दक्षता में बहुत सुधार किया है, जिससे यह माध्यम के प्रति मिलीलीटर 20 मिलीग्राम से अधिक जीएसटी फ़्यूज़न प्रोटीन ले जाने में सक्षम है। उत्पाद में अच्छी विशिष्टता और लागत प्रदर्शन है, और इसका उपयोग एक चरण में विभिन्न ग्लूटाथियोन एस-ट्रांसफ़रेज़, ग्लूटाथियोन-निर्भर प्रोटीन और ग्लूटाथियोन पुनः संयोजक व्युत्पन्न को शुद्ध करने के लिए किया जा सकता है।

टेबल तीन। येसेन जीएसटी शुद्धिकरण उत्पाद चयन गाइड

उत्पाद संख्या	20507ईएस	20508ईएस	20509ईएस/20510ईएस	20562ईएस
प्रोडक्ट का नाम	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन एगरोज़ रेज़िन	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन एगरोज़ रेज़िन 4FF	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन 4एफएफ क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 1 एमएल / 5 एमएल	जीएसटीसेप ग्लूटाथियोन मैगबीड्स
मैट्रिक्स	क्रॉस-लिंक्ड 6% एगरोज़ जेल	अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड 4% एगरोज़ जेल	अत्यधिक क्रॉस-लिंक्ड 4% एगरोज़ जेल	चुंबकीय एगरोज़ माइक्रोस्फीयर
दबाव प्रतिरोध	0.1 एमपीए, 1 छड़	0.3 एमपीए, 3 छड़	0.3 एमपीए, 3 छड़	एन/ए
क्षमता	>20 मिलीग्राम जीएसटी प्रोटीन (40 केडीए)/एमएल मैट्रिक्स	>10 मिलीग्राम जीएसटी प्रोटीन (40 केडीए)/एमएल मैट्रिक्स		5-10 मिलीग्राम जीएसटी टैग फ्यूजन प्रोटीन/एमएल चुंबकीय मोती
आवेदन	उच्च भार, मैट्रिक्स औसत दबाव प्रतिरोध के साथ, ऊष्मायन विधि के लिए उपयुक्त, गुरुत्वाकर्षण स्तंभ छोटे पैमाने पर शुद्धि, प्रयोगशाला पैमाने पर ग्राहकों के लिए अनुशंसित	अनुप्रयोग कम भार, उच्च मैट्रिक्स दबाव प्रतिरोध, प्रोटीन शुद्धिकरण उपकरण के साथ औद्योगिक बड़े पैमाने पर प्रोटीन शुद्धिकरण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, स्केल अप करना आसान है		चुंबकीय पृथक्करण के माध्यम से न्यूनतम भार, तेज और सुविधाजनक प्रोटीन शुद्धिकरण

परिशिष्ट: जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन मैगबीड्स (कैट#20562ईएस) उत्पाद विशेषताएँ

1. एक चरण में चुंबकीय पृथक्करण के माध्यम से जैविक नमूनों से उच्च शुद्धता वाले लक्ष्य प्रोटीन को सीधे शुद्ध करना, शुद्धिकरण प्रक्रिया को बहुत सरल बनाना और शुद्धिकरण दक्षता में सुधार करना, वैज्ञानिक अनुसंधान और औद्योगिक क्षेत्रों में सुविधाजनक जीएसटी संलयन प्रोटीन शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है।
2. जीएसटी पुल-डाउन प्रयोगों के लिए इस चुंबकीय मनका का उपयोग करने से, चूंकि चुंबकीय पृथक्करण के लिए कई सेंट्रीफ्यूजेशन और लंबे समय तक ऊष्मायन की आवश्यकता नहीं होती है, इसलिए पारंपरिक क्रोमैटोग्राफी विधियों की तुलना में ऑपरेशन सरल, तेज और अधिक स्वचालित है।

उत्पाद की जानकारी

उत्पाद स्थिति	प्रोडक्ट का नाम	उत्पाद संख्या	विनिर्देश
उनका टैग प्रोटीन शुद्धिकरण	HisSep Ni-NTA अगारोज़ राल	20502ईएस10/50/60	10 एमएल/50 एमएल/100 एमएल
	HisSep Ni-NTA अगारोज़ रेज़िन 6FF	20503ईएस10/50/60	10 एमएल/50 एमएल/100 एमएल
	HisSep Ni-NTA 6FF क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 5 एमएल	20504ईएस08/25	5 एमएल/5x5 एमएल
	HisSep Ni-NTA 6FF क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 1 एमएल	20505ईएस03/08	1 एमएल/5x1 एमएल
	HisSep Ni-NTA मैगबीड्स	20561ईएस08/25	5 एमएल/25 एमएल
जीएसटी टैग प्रोटीन शुद्धिकरण	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन एगरोज़ रेज़िन	20507ईएस10/50/60	10 एमएल/50 एमएल/100 एमएल
	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन एगरोज़ रेज़िन 4FF	20508ईएस10/50/60	10 एमएल/50 एमएल/100 एमएल
	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन 4एफएफ क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 1 एमएल	20509ईएस03/08	1 एमएल/5x1 एमएल
	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन 4एफएफ क्रोमैटोग्राफी कॉलम, 5 एमएल	20510ईएस08/25	5 एमएल/5x5 एमएल
	जीएसटीसेप ग्लूटाथिऑन मैगबीड्स	20561ईएस08/25	5 एमएल/25 एमएल