विवरण
उत्पाद वर्णन
2×हिएफ कैनेस™ प्लस पीसीआर मास्टर मिक्स (डाई के साथ) एक तैयार-से-उपयोग 2 × पूर्व-मिश्रित समाधान है जिसमें हिएफ कैनेस शामिल है™ साथ ही हाई-फ़िडेलिटी डीएनए पोलीमरेज़, डीएनटीपी और एक अनुकूलित बफ़र सिस्टम। मिश्रण में दो मोनोक्लोनल एंटीबॉडी शामिल हैं जो कमरे के तापमान पर पोलीमरेज़ गतिविधि और 3'→5'एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि को रोकते हैं, जिससे अत्यधिक विशिष्ट हॉट स्टार्ट पीसीआर सक्षम होता है। बढ़ाव कारकों को जोड़ने से 13 केबी तक के लक्ष्य टुकड़ों के साथ लंबे-टुकड़े प्रवर्धन की अनुमति मिलती है। यह एंजाइम 5'→3' डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि और 3'→5' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि प्रदर्शित करता है, जिसकी फ़िडेलिटी Taq डीएनए पोलीमरेज़ से 83 गुना और साधारण Pfu डीएनए पोलीमरेज़ से 9 गुना अधिक है। यह जटिल टेम्पलेट्स को बढ़ाने, ब्लंट-एंड पीसीआर उत्पादों का उत्पादन करने के लिए उपयुक्त है।
2×हिएफ कैनेस™ प्लस पीसीआर मास्टर मिक्स (डाई के साथ) सरलता, उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता और उत्कृष्ट स्थिरता जैसे लाभ प्रदान करता है। प्रतिक्रिया प्रणाली में केवल प्राइमर और टेम्पलेट को जोड़ने की आवश्यकता होती है, और प्रक्रिया को सरल बनाने और समय बचाने के लिए दो-चरणीय पीसीआर प्रोटोकॉल का उपयोग किया जा सकता है। उत्पाद में इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्रैकिंग डाई शामिल है, जो जेल विश्लेषण के लिए पीसीआर उत्पादों को सीधे लोड करने की अनुमति देता है। इसके अतिरिक्त, इसमें एक विशेष सुरक्षात्मक एजेंट होता है जो बार-बार फ्रीज-थॉ चक्रों के बाद भी स्थिर गतिविधि सुनिश्चित करता है।
विशेष विवरण
| कैट.एनहे. | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
| आकार | 100 μL / 1 एमएल / 5×1 एमएल / 100×1 एमएल |
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए 1 साल।
निर्देश
1. अनुशंसित पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणालियाँ.
| अवयव | आयतन（μएल） | अंतिम एकाग्रता |
| 2× हिएफ़ कैनेस™ प्लस पीसीआर मास्टर मिक्स (डाई के साथ)* | 25 | 1× |
| टेम्पलेट*** | एक्स | - |
| आगे पीरिमर（10 μमोल/एल）** | 2 | 0.4 μमोल/एल |
| आरएवर्स पीरिमर（10 μमोल/एल）** | 2 | 0.4 μमोल/एल |
| डीडीएच2हे | 50 तक | - |
*मिश्रण की 1× अंतिम सांद्रता में 1 U/50 μL पॉलीमरेज़, 2 mmol/L Mg शामिल हैं2+, और 200 μmol/L dNTPs.
**पीसीआर प्रतिक्रिया में प्राइमरों की अनुशंसित अंतिम सांद्रता 0.2-1 μmol/L है, जिसमें 0.4 μmol/L को प्राथमिकता दी जाती है.
***25 μL प्रतिक्रिया प्रणाली के लिए अनुशंसित टेम्पलेट मात्रा:
| टेम्पलेट प्रकार | खंड आकार (1 केबी-10 केबी) |
| जीनोमिक डीएनए | 50 एनजी-200 एनजी |
| प्लाज्मिड या वायरल डीएनए | 10 पीजी-20 एनजी |
| सीडीएनए | 1-2.5 μL (कुल PCR मात्रा के 1/10 से अधिक नहीं) |
2. प्रतिक्रिया कार्यक्रम.
1)दो-चरणीय प्रोटोकॉल (पसंदीदा):
| चक्र कदम | टीकर्मचारी | समय | साइकिल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण | 98℃ | 3 मिन | 1 |
| विकृतीकरण | 98℃ | 10 सेकंड | 30-35 |
| विस्तार | 68℃ | 30 सेकंड/केबी | |
| एफआंतरिक ईएक्सटेंशन | 72℃ | 5 मिन | 1 |
2)तीन-चरण प्रोटोकॉल (पारंपरिक):
| चक्र कदम | टीकर्मचारी | समय | साइकिल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण* | 98℃ | 3 मिन | 1 |
| विकृतीकरण | 98℃ | 10 सेकंड | 30-35 |
| एनीलिंग** | 60℃ | 20 सेकंड | |
| विस्तार*** | 72℃ | 30 सेकंड/केबी | |
| एफआंतरिक ईएक्सटेंशन | 72℃ | 5 मिन | 1 |
*प्रारंभिक विकृतीकरण: 98°C पर 3 मिनट के लिए अनुशंसित (उच्च-GC टेम्पलेट्स के लिए 5-10 मिनट)।
**एनीलिंग: 20 सेकंड के लिए 60°C पर अनुशंसित (10-30 सेकंड के बीच समायोज्य)। लंबे समय तक एनीलिंग करने से जैल पर दाग लग सकते हैं।
***विस्तार: 72°C पर 30 सेकंड/kb के लिए अनुशंसित (जटिल टेम्पलेट्स के लिए 60 सेकंड/kb तक)।
3）ग्रेडिएंट एनीलिंग प्रोटोकॉल (कठिन लक्ष्यों के लिए अनुशंसित):
| चक्र कदम | टीकर्मचारी | समय | साइकिल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण | 98℃ | 3 मिन | 1 |
| विकृतीकरण | 98℃ | 10 सेकंड | 15 (प्रति चक्र 1°C की कमी) |
| ग्रेडिएंट एनीलिंग | 70-55° सेल्सियस | 20 सेकंड | |
| विस्तार | 72℃ | 30 सेकंड/केबी | |
| विकृतीकरण | 98° सेल्सियस | 10 सेकंड | 20 |
| एनीलिंग | 55° सेल्सियस | 20 सेकंड | |
| विस्तार | 72° सेल्सियस | 30 सेकंड/केबी | |
| एफआंतरिक ईएक्सटेंशन | 72℃ | 5 मिन | 1 |
4）विभिन्न पीसीआर प्रोटोकॉल की विशेषताएं:
| प्रोटोकॉल प्रकार | रफ़्तार | विशेषता | पीसीआर उपज | पता लगाने की दर |
| दो-चरण | सबसे तेजी से | उच्च | मध्यम | उच्च |
| तीन चरणों | मध्यम | मध्यम | उच्चतम | मध्यम |
| ग्रेडिएंट एनीलिंग | धीमा | उच्च | मध्यम | उच्च |
नोट्स
1.यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
2. कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
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उपवास
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कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
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