विवरण
क्विक टी4 डीएनए लिगेज एक एकल एंजाइम उत्पाद है जिसका उपयोग एनजीएस लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया में डीएनए टुकड़ों और एडेप्टर के बंधन के लिए किया जा सकता है। इस उत्पाद को उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण द्वारा सत्यापित किया गया है और इसकी गुणवत्ता उत्कृष्ट है। जिन ग्राहकों को प्रायोगिक सिस्टम समायोजन की आवश्यकता नहीं है, उनके लिए Hieff NGSTM फास्ट-पेस डीएनए लिगेशन मॉड्यूल (कैट # 12607) खरीदने की सिफारिश की जाती है।
उत्पाद घटक
| घटक संख्या | अवयव | 10301ईएस40 | 10301ईएस42 |
| 10301-ए | त्वरित T4 डीएनए लाइगेस (400 U/µL) | 100 µएल | 1 एमएल |
| 10301-बी | 10 × T4 डीएनए लाइगेस बफर | 250 µएल | 2×1,250 µL |
शिपिंग और भंडारण
यह उत्पाद बर्फ के पैक के साथ भेजा जाता है और इसे -20°C तापमान पर दो वर्षों तक भंडारित किया जा सकता है।
इकाई परिभाषा
20 μL लिगेशन प्रतिक्रिया प्रणाली में, जब 6 μg λDNA-Hind Ⅲ को 16℃ पर 30 मिनट के लिए प्रतिक्रिया दी जाती है, तो DNA खंडों के 50% से अधिक लिगेशन के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा को एक इकाई (U) के रूप में परिभाषित किया गया था।
चेतावनी
1. यदि बफर पिघलते समय थोड़ी मात्रा में अवक्षेपण होता है, तो कृपया उपयोग करने से पहले इसे पलटें और अच्छी तरह मिलाएं;
2. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
3. यह उत्पाद केवल अनुसंधान हेतु है!
निर्देश
1. वर्तमान मुख्यधारा डीएनए लाइब्रेरी निर्माण किट आम तौर पर अंत की मरम्मत और ए-टेलिंग उपचार के बाद शुद्ध नहीं होते हैं, और सीधे एडाप्टर लिगेशन करते हैं। कृपया प्रतिक्रिया प्रणाली के लिए निम्नलिखित तैयारी देखें। अच्छी तरह से भंवर, संक्षेप में स्पिन और 20 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए सेते हैं।
| अवयव | आयतन (μL) |
| डीए-टेल्ड डीएनए | 60 |
| 10 × T4 डीएनए लाइगेस बफर | 10 |
| 50% पीईजी 6000 | 10* |
| डीएनए एडाप्टर | एक्स** |
| त्वरित T4 डीएनए लाइगेस | 1-5*** |
| डीडीएच2ओ | 100 तक |
[नोट]: * किट में 50% PEG 6000 प्रदान नहीं किया गया है, आपको इसे स्वयं तैयार करना होगा।
**एडेप्टर की मात्रा के लिए निम्नलिखित तालिका देखें।
*** आवश्यकतानुसार क्विक टी4 डीएनए लाइगेस की मात्रा 1-5 μL तक बढ़ाई जा सकती है।
2. उपयोग किए जाने वाले एडाप्टर की गुणवत्ता और सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी यील्ड को प्रभावित करती है। बहुत अधिक एडाप्टर उपयोग से अधिक एडाप्टर डिमर उत्पन्न हो सकते हैं, जबकि कम उपयोग से लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी यील्ड प्रभावित हो सकती है। निम्न तालिका इस किट का उपयोग करके विभिन्न इनपुट डीएनए स्थितियों में उपयोग किए जाने वाले एडाप्टर की अनुशंसित मात्रा को सूचीबद्ध करती है।
| इनपुट डीएनए | एडाप्टर: इनपुट डीएनए (दाढ़ अनुपात) | इनपुट डीएनए | एडाप्टर: इनपुट डीएनए (दाढ़ अनुपात) |
| 1 माइक्रोग्राम | 10:1 | 50 एनजी | 100:1 |
| 500 एनजी | 20:1 | 25 एनजी | 200:1 |
| 250 एनजी | 40:1 | 1 एनजी | 200:1 |
| 100 एनजी | 100:1 | 500 पृष्ठ | 400:1 |
[नोट]: इनपुट डीएनए मोल (पीएमओएल)≈ इनपुट डीएनए(एनजी)/ [0.66 × इनपुट डीएनए औसत लंबाई(बीपी)].
एडाप्टर बंधन गणना उदाहरण: जब इनपुट डीएनए 100 एनजी और लंबाई 300 बीपी है तो कितना एडाप्टर जोड़ा जाना चाहिए?
चरण 1: इनपुट डीएनए के मोलों की संख्या की गणना करें। सूत्र: इनपुट डीएनए मोल (pmol)≈ इनपुट डीएनए(ng)/ [0.66 × इनपुट डीएनए औसत लंबाई(bp)]; इनपुट डीएनए मोल (pmol)=100 ÷ (0.66×300) = 0.5 pmol;
चरण 2: उपरोक्त तालिका के अनुसार, जोड़े गए एडाप्टर के मोलों की संख्या की गणना करें।; जब इनपुट डीएनए 100 एनजी है, एडाप्टर का मोलर अनुपात: इनपुट डीएनए 100: 1 है, और जोड़े गए एडाप्टर के मोलों की संख्या = 100 × 0.5 pmol = 50 pmol;
चरण 3: एडाप्टर की मात्रा की गणना करें। एडाप्टर सांद्रता = 15 μmol/L (यदि आप किसी अन्य कंपनी का एडाप्टर इस्तेमाल करते हैं, तो आपको उसके निर्देशों के अनुसार उसकी सांद्रता निर्धारित करनी होगी); जोड़ा गया एडाप्टर का आयतन = जोड़ा गया एडाप्टर का मोल (50 pmol) ÷ एडाप्टर की सांद्रता (15 μmol/L) = 3.34 μL (नोट: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);
संक्षेप में, वह आयतन जिसमें एडाप्टर को जोड़ा जा सकता है, 3.4 μL है। (नोट: एडाप्टर की अधिकतम मात्रा 5 μL से अधिक नहीं होनी चाहिए)।
एएसई बफर.
भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
आपको यह भी पसंद आ सकता हैं
उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।