विवरण
हाईफेयर™ एडवांसफास्ट 1 स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट (नो डाई) हाईफेयर™ के आधार पर विकसित एक तीव्र रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट है III 1st स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस किट (कोई डाई नहीं), PCR एम्पलीफिकेशन और RT-qPCR प्रयोगों के लिए उपयुक्त। Hifair™ की तुलना में III प्रथम स्ट्रैंड cDNA सिंथेसिस किट (कोई डाई नहीं), इसमें स्थिर पहचान दर, विशिष्टता और उपज आश्वासन है, साथ ही कुल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय संभावित रूप से 6 मिनट से भी कम हो जाता है, जिससे प्रयोगात्मक अवधि काफी कम हो जाती है।
किट में gDNA डाइजेस्टर मिक्स शामिल है, जो RNA टेम्प्लेट में बचे जीनोमिक DNA संदूषण को खत्म कर सकता है, जिससे बाद के परिणाम अधिक विश्वसनीय हो सकते हैं। किट दो प्रकार के cDNA संश्लेषण प्राइमर प्रदान करता है: रैंडम प्राइमर N6 और ओलिगो (dT)18उपयोगकर्ता रैंडम प्राइमर्स N6, ओलिगो (dT) के बीच चयन कर सकते हैं18, या जीन विशिष्ट प्राइमर को उनकी ज़रूरतों के अनुसार रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्राइमर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। संश्लेषित एकल-स्ट्रैंडेड सीडीएनए उत्पाद को बाद की पीसीआर या क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए सीधे इस्तेमाल किया जा सकता है।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| आकार | 10 टी/100 टी |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 11150ईएस10 | 11150ईएस60 |
| 11150-ए | 4× हाईफेयर™एडवांसफास्ट सुपरमिक्स (कोई डाई नहीं) | 50 μएल | 500 μएल |
| 11150-बी | 5×gDNA डाइजेस्टर मिक्स | 20 μएल | 200 μएल |
| 11150-सी | रैंडम प्राइमर (50 μmol/L) | 20 μएल | 200 μएल |
| 11150-डी | ओलिगो डी(टी)18 प्राइमर (50 μmol/L) | 20 μएल | 200 μएल |
| 11150-ई | आरएनेज़-मुक्त जल | 200 μएल | 2×1 एमएल |
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए 1 वर्ष।
निर्देश
- यदि प्रयोग के लिए अवशिष्ट जीनोमिक डीएनए को हटाने की आवश्यकता हो
1）जीडीएनए पाचन
RNase-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में, निम्नलिखित मिश्रण तैयार करें और अच्छी तरह से मिलाने के लिए धीरे से पिपेट करें। 2 मिनट के लिए 42℃ पर इनक्यूबेट करें।
| अवयव | आयतन (μL) |
| आरएनेज़-मुक्त जल | 10 μL तक |
| 5× जीडीएनए डाइजेस्टर मिक्स | 2 μएल |
| कुल आरएनए* | 10 पीजी-5 μg |
| या mRNA* | 10 पीजी-500 एनजी |
* यह अनुशंसित है कि कुल आरएनए की इनपुट मात्रा 2 μg से अधिक नहीं होनी चाहिए। यदि लक्ष्य जीन का अभिव्यक्ति स्तर कम है, तो इनपुट मात्रा को अधिकतम 5 μg कुल आरएनए तक बढ़ाया जा सकता है।
2）रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन सिस्टम तैयारी (20 μL सिस्टम)
| अवयव | आयतन (μL) |
| पिछले चरण से प्रतिक्रिया समाधान | 10 μएल |
| 4×Hifair™AdvanceFast सुपरमिक्स (कोई डाई नहीं) | 5 μएल |
| ओलिगो डी(टी)18 प्राइमर (50 μmol/L)** | 2 μएल |
| या रैंडम प्राइमर्स (*qPCR के लिए) (50 μmol/L)** | या 2 μL |
| आरएनेज़-मुक्त जल | 20 μL तक |
* प्राइमर की मात्रा को टेम्पलेट इनपुट की मात्रा के अनुसार समायोजित किया जा सकता है। यदि qPCR प्रयोगों के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उत्पाद का उपयोग किया जाता है, तो सिस्टम में अनुशंसित मात्रा के अनुसार रैंडम प्राइमर जोड़े जा सकते हैं।
** यह अनुशंसा की जाती है कि पहले 4× हाईफेयर™एडवांसफास्ट सुपरमिक्स (डाई नहीं) डालें, अच्छी तरह मिलाएं, और फिर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्राइमर डालें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि प्राइमर जीडीएनए डाइजेस्टर से प्रभावित नहीं है।
3）रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रक्रिया सेटिंग्स
| अस्थायी | समय |
| 55℃* | 5 मिनट** |
| 85℃ | 5 सेकंड |
* उच्च GC सामग्री या जटिल टेम्पलेट्स वाले टेम्पलेट्स के लिए, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन तापमान को 60°C तक बढ़ाया जा सकता है।
** यह उत्पाद 14 केबी से कम के सीडीएनए अनुक्रमों को संश्लेषित कर सकता है। यदि आपको लंबे सीडीएनए उत्पादों की आवश्यकता है, तो आप रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय को उचित रूप से बढ़ा सकते हैं।
- यदि प्रयोग में जीनोमिक डीएनए को हटाने की आवश्यकता नहीं है
1）रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन सिस्टम तैयारी (20 μL सिस्टम)
| अवयव | आयतन (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast सुपरमिक्स (कोई डाई नहीं) | 5 μएल |
| ओलिगो डी(टी)18 प्राइमर (50 μmol/L)** | 2 μएल |
| या रैंडम प्राइमर्स (*qPCR के लिए) (50 μmol/L)** | या 2 μL |
| कुल आरएनए* | 10 पीजी -5 μg |
| या mRNA | 10 पीजी - 500 एनजी |
| आरएनेज़-मुक्त जल | 20 μL तक |
* यह अनुशंसा की जाती है कि कुल आरएनए की इनपुट मात्रा 2 μg से अधिक नहीं होनी चाहिए। यदि लक्ष्य जीन का अभिव्यक्ति स्तर कम है, तो इनपुट मात्रा को अधिकतम 5 μg कुल आरएनए तक बढ़ाया जा सकता है।
** प्राइमर की मात्रा को टेम्पलेट इनपुट की मात्रा के अनुसार समायोजित किया जा सकता है। यदि qPCR प्रयोगों के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उत्पाद का उपयोग किया जाता है, तो सिस्टम में अनुशंसित मात्रा के अनुसार रैंडम प्राइमर जोड़े जा सकते हैं।
2）रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रक्रिया सेटिंग्स
| अस्थायी | समय |
| 55℃* | 5 मिनट** |
| 85℃ | 5 सेकंड |
* उच्च GC सामग्री या जटिल टेम्पलेट्स वाले टेम्पलेट्स के लिए, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन तापमान को 60°C तक बढ़ाया जा सकता है।
** यह उत्पाद 14 केबी से कम के सीडीएनए अनुक्रमों को संश्लेषित कर सकता है। यदि आपको लंबे सीडीएनए उत्पादों की आवश्यकता है, तो आप रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय को उचित रूप से बढ़ा सकते हैं।
नोट्स
- सभी ऑपरेशन बर्फ पर किए जाने चाहिए और इस प्रकार किए जाने चाहिए कि RNase संदूषण से बचा जा सके।
- यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
- कृपया अपनी सुरक्षा के लिए लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें।
दस्तावेज़:
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।