विवरण
हिएफ़ एनजीएसटीएम वनपॉट प्रो डीएनए लाइब्रेरी प्रेप किट V3 एक नई पीढ़ी का एंजाइमेटिक फ़्रेग्मेंटेशन-आधारित लाइब्रेरी प्रेप किट है विशेष रूप से विकसित और डिजाइन किया गया Illumina &MGI अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म। पारंपरिक लाइब्रेरी निर्माण विधियों की तुलना में, यह उत्पाद उच्च-गुणवत्ता वाले विखंडन एंजाइमों का उपयोग करता है, जिससे बोझिल अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया समाप्त हो जाती है। यह विखंडन और अंतिम-मरम्मत मॉड्यूल को एक में मिलाकर ऑपरेशन को सरल बनाता है। इसके अतिरिक्त, लिगेशन मॉड्यूल के लिए एंजाइम और बफर पहले से मिश्रित होते हैं, जिससे लाइब्रेरी निर्माण का समय और लागत काफी कम हो जाती है। यह इसे स्वचालित लाइब्रेरी निर्माण के लिए अधिक उपयुक्त बनाता है। इस लाइब्रेरी तैयारी किट की लाइब्रेरी रूपांतरण दर बहुत अच्छी है और यह सभी सामान्य जानवरों, पौधों, सूक्ष्मजीवों आदि के नमूनों के साथ-साथ FFPE नमूनों के लिए भी उपयुक्त है। पुस्तकालय निर्माण किट की पिछली पीढ़ी के आधार पर, यह उत्पाद विखंडन में उच्च दक्षता प्रदर्शित करता है, पिछले संस्करणों की तुलना में अंत मरम्मत, डीए-टेलिंग और एडाप्टर लिगेशन। उच्च-निष्ठा एंजाइम प्रवर्धन की एकरूपता और निष्ठा में काफी सुधार करता है।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 12194ES08 / 12194ES24 / 12194ES96 |
| आकार | 8 टी/24 टी / 96 टी |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 12194ईएस08 | 12194ईएस24 | 12194ईएस96 |
| 12194-ए | स्मियरेज़टीएम बफर 3.0 | 80 μएल | 240 μएल | 960 μएल |
| 12194-बी | स्मियरेज़टीएम एनजाइम 3.0 | 80 μएल | 240 μएल | 960 μएल |
| 12194-सी | लिगेशन रेडी मिक्स | 200 μएल | 600 μएल | 3×800 μएल |
| 12194-डी | 2× अल्टिमा एचएफ एम्पलीफिकेशन मिक्स | 200 μएल | 600 μएल | 3×800 μएल |
[टिप्पणी]: किट के घटक दोनों के साथ संगत हैं Illumina &एमजीआई अनुक्रमण मंच, यदि पूर्ण एडाप्टर प्रयोग किया गया, हिएफ़ एनजीएसटीएम प्राइमर मिक्स (येसेन कैट#12190 या कैट#12191) की आवश्यकता है।
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए 1 वर्ष।
नोट्स
1. ऑपरेशन के बारे में
1. कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
2. घटकों को कमरे के तापमान पर पिघलाएँ। पिघलने के बाद, भँवर द्वारा अच्छी तरह मिलाएँ, ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ और बाद में उपयोग के लिए बर्फ पर रख दें।
3. प्रत्येक चरण के प्रतिक्रिया समाधान को तैयार करते समय, अच्छी तरह से मिश्रण करने या धीरे से हिलाने के लिए पिपेट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। जोरदार हिलाने से लाइब्रेरी आउटपुट में कमी आ सकती है।
4. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए फ़िल्टर किए गए पाइपेट टिप्स का उपयोग करना अत्यधिक अनुशंसित है। विभिन्न नमूनों को संसाधित करते समय पाइपेट टिप्स को बदलना सुनिश्चित करें।
5. अनुचित संचालन से एरोसोल संदूषण की संभावना हो सकती है, जिससे परिणाम की सटीकता प्रभावित हो सकती है। पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण क्षेत्रों और पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण परख क्षेत्रों के अनिवार्य भौतिक अलगाव की सिफारिश की जाती है। लाइब्रेरी निर्माण के लिए विशेष पिपेट जैसे उपकरणों से सुसज्जित। 0.5% सोडियम हाइपोक्लोराइट या 10% ब्लीच के साथ सतहों को पोंछकर प्रत्येक क्षेत्र के लिए नियमित सफाई करें
6. यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है।
2. डीएनए विखंडन
1. किट 100 पीजी के साथ संगत है - 1000 एनजी इनपुट डीएनए। A260/A280 = 1.8-2.0 के साथ उच्च गुणवत्ता वाले इनपुट डीएनए का उपयोग करना अत्यधिक अनुशंसित है।
2. यदि इनपुट डीएनए के साथ धातु केलेटिंग एजेंट जैसे लवणों की उच्च सांद्रता पेश की गई तो निम्नलिखित प्रयोग प्रभावित हो सकते हैं। हम डीएनए नमूने को निकालने की सलाह देते हैं डीडीएच2हे विखंडन के लिए.
3. कृपया तालिका देखें 6 मानक डीएनए नमूनों के विखंडन समय के लिए। किट में विखंडन पूर्वाग्रह कम है और यह जीसी रचनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ डीएनए नमूनों के लिए एक समान जीसी कवरेज प्रदान करता है। कृपया अपनी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर विखंडन समय समायोजित करें।
4. सटीक विखंडन के लिए, कृपया प्रतिक्रिया बर्फ पर तैयार करें।
3. एडाप्टर लिगेशन
1. इल्युमिना या एमजीआई लांग एडाप्टर (बारकोडेड एडाप्टर) किट और शॉर्ट एडाप्टर किट ग्राहकों के लिए उनकी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार चयन करने के लिए उपलब्ध हैं।
2. उच्च गुणवत्ता वाले, वाणिज्यिक एडाप्टर का चयन करने की सिफारिश की गई थी। यदि स्व-निर्मित एडाप्टर का चयन किया जाता है, तो कृपया NGS प्राइमर संश्लेषण में अनुभव वाली कंपनी को सौंपें और सख्त संदूषण नियंत्रण की आवश्यकता पर टिप्पणी करें। इसके अलावा, एक साफ बेंच में डीएनए एनीलिंग समाधान तैयार करने और क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए हर बार केवल एक प्रकार के एडाप्टर को संचालित करने की सिफारिश की जाती है।
3. कृपया एडाप्टरों को बर्फ पर या 4°C पर पिघलाएं; कमरे के तापमान पर संचालन करते समय, एडाप्टरों को विकृत होने से बचाने के लिए प्रयोगशाला का तापमान 25°C से अधिक नहीं होना चाहिए।
4. एडाप्टर की गुणवत्ता और सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी यील्ड को प्रभावित करेगी। एडाप्टर की बहुत अधिक सांद्रता एडाप्टर डिमर गठन को बढ़ावा देती है जबकि बहुत कम एडाप्टर लिगेशन दर और लाइब्रेरी यील्ड को कम करता है। एडाप्टर का उपयोग करते समय इनपुट डीएनए राशि के अनुसार TE बफर के साथ संगत कमजोरीकरण। तालिका 1-2 इल्युमिना या एमजीआई अनुक्रमण प्लेटफार्मों के लिए इस किट का उपयोग करके इनपुट डीएनए की विभिन्न मात्राओं के लिए पारंपरिक और यूएमआई एडाप्टर के लिए अनुशंसित कमजोरीकरण विधियों को सूचीबद्ध करता है।
मेज़ 1 अनुशंसित इल्युमिना विभिन्न इनपुट के लिए एडाप्टर राशि डीएनए
| इनपुट डीएनए | सीपारंपरिक एडाप्टर कमजोर पड़ने अनुपात | एकाग्रता | यूएमआई एडाप्टर कमजोरीकरण अनुपात | एकाग्रता |
| ＜1 एनजी | 7.5-गुना | 2 माइक्रोन | 15 गुना | 1 माइक्रोन |
| 1 एनजी ~ 10 एनजी | 3-गुना | 5 माइक्रोन | 3-गुना | 5 माइक्रोएम |
| 10 एनजी ~ 200 एनजी | 1.5 गुना | 10 माइक्रोन | 2-गुना | 7.5 माइक्रोएम |
| ＞200 एनजी | 0-गुना | 15 माइक्रोएम | 0-गुना | 15 माइक्रोएम |
मेज़ 2 अनुशंसित एमजीआई विभिन्न इनपुट के लिए एडाप्टर राशि डीएनए
| इनपुट डीएनए | सीपारंपरिक एडाप्टर कमजोर पड़ने अनुपात | एकाग्रता | यूएमआई एडाप्टर कमजोरीकरण अनुपात | एकाग्रता |
| ＜1 एनजी | 5 गुना | 2 माइक्रोन | 10 गुना | 1 माइक्रोन |
| 1 एनजी ~ 10 एनजी | 2-गुना | 5 माइक्रोन | 2-गुना | 5 माइक्रोएम |
| 10 एनजी ~ 200 एनजी | 0-गुना | 10 माइक्रोन | 1.25 गुना | 8 माइक्रोन |
| ＞200 एनजी | 0-गुना | 10 माइक्रोन | 0-गुना | 10 माइक्रोन |
4. मनका-आधारित डीएनए सफाई और आकार चयन
1. डीएनए आकार का चयन अंत मरम्मत/डीए-टेलिंग से पहले, एडाप्टर लिगेशन के बाद, या प्रवर्धन के बाद किया जा सकता है।
2. यदि इनपुट डीएनए मात्रा 50 एनजी से अधिक है तो एडेप्टर लिगेशन के ठीक बाद आकार-चयन करने की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, कृपया प्रवर्धन के बाद आकार-चयन करें।
3. लिगेशन एन्हांसर में PEG की उच्च सांद्रता होती है, जो सटीक आकार-चयन पर महत्वपूर्ण प्रभाव डाल सकती है। इस प्रकार, यदि आकार-चयन एडाप्टर लिगेशन के ठीक बाद किया जाना है, तो आकार-चयन से पहले बीड्स क्लीन-अप चरण जोड़ने की दृढ़ता से अनुशंसा की जाती है। आकार चयन चरण सीधे किया जा सकता है यदि इसे अंतिम मरम्मत/डीए-टेलिंग से पहले या बाद में किया जाता है पुस्तकालय प्रवर्धन.
4. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए, अन्यथा उपज कम हो जाएगी और आकार चयन प्रभाव प्रभावित होगा।
5. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिश्रित किया जाना चाहिए।
6. सतह पर तैरने वाले तरल को स्थानांतरित करते समय मोतियों को चूसें नहीं, मोतियों की अल्प मात्रा भी निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकती है।
7. 80% इथेनॉल ताजा तैयार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करेगा।
8. सटीक आकार-चयन के लिए, 100 μL से अधिक की मात्रा से शुरू करने की अनुशंसा की जाती है। यदि कम है, तो अल्ट्रा-शुद्ध पानी के साथ मात्रा को 100 μL तक लाने की अनुशंसा की जाती है।
9. उत्पाद को निकालने से पहले चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर सुखाया जाना चाहिए। अपर्याप्त सूखापन आसानी से इथेनॉल अवशेषों को बाद की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने का कारण बनेगा; अत्यधिक सूखापन चुंबकीय मोतियों को दरार करने और शुद्धिकरण उपज को कम करने का कारण बनेगा। आम तौर पर, मोतियों को पूरी तरह से सूखने देने के लिए कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सुखाना पर्याप्त होता है।
10. यदि आवश्यक हो, तो शुद्ध या आकार-चयनित डीएनए नमूनों को 0.1× टीई बफर को 4°C पर 1-2 सप्ताह तक या -20°C पर एक महीने तक भंडारित किया जा सकता है।
5. लाइब्रेरी प्रवर्धन
1. लाइब्रेरी एम्पलीफिकेशन करना है या नहीं, यह डीएनए इनपुट की मात्रा, एडेप्टर के प्रकार, अनुक्रमण डेटा एप्लीकेशन आदि पर निर्भर करता है। आंशिक एडेप्टर का उपयोग करते समय एम्पलीफिकेशन चरण की आवश्यकता होती है। पूर्ण लंबाई वाले एडेप्टर का उपयोग करते समय, यदि इनपुट डीएनए <200 एनजी है, तो एम्पलीफिकेशन करने की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, एम्पलीफिकेशन आवश्यक नहीं है।
2. प्रवर्धन चक्र संख्याओं को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए। अपर्याप्त प्रवर्धन से लाइब्रेरी यील्ड कम हो सकती है; अधिक प्रवर्धन से पूर्वाग्रह, त्रुटियाँ, दोहराए गए रीड और काइमेरिक उत्पाद बढ़ सकते हैं। तालिका 3 1 μg की लाइब्रेरी उपज को लक्षित करते हुए अनुशंसित चक्र संख्याओं को सूचीबद्ध करता है।
मेज़ 3 उत्पन्न करने के लिए चक्रों की अनुशंसित संख्या 1,000 एनजी लाइब्रेरी उपज
| इनपुट डीएनए | 1 μg लाइब्रेरी उपज उत्पन्न करने के लिए आवश्यक चक्रों की संख्या |
| 1000-2000 एनजी | 2 - 4 |
| 500 एनजी | 2 - 4 |
| 250 एनजी | 4 - 6 |
| 100 एनजी | 5 - 7 |
| 50 एनजी | 7 - 9 |
| 10 एनजी | 9 - 11 |
| 5 एनजी | 10 - 12 |
| 1 एनजी | 12 - 15 |
| 100 पृ. | 16 - 18 |
टिप्पणी
1.तालिका 3 लगभग 200 बीपी के उच्च गुणवत्ता वाले इनपुट डीएनए परीक्षणों का उपयोग करके लूप मापदंडों की संख्या को दर्शाता है। एफएफपीई डीएनए गुणवत्ता बहुत भिन्न होती है, और जब डीएनए गुणवत्ता खराब होती है या लाइब्रेरी की लंबाई लंबी होती है, तो पर्याप्त लाइब्रेरी प्राप्त करने के लिए चक्रों की संख्या को उचित रूप से बढ़ाने की आवश्यकता होती है।
2.यदि पुस्तकालय निर्माण प्रक्रिया के दौरान आकार का चयन आवश्यक हो, तो पुस्तकालय प्रवर्धन के लिए उच्च चक्र संख्या की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, कम चक्र संख्या की सिफारिश की जाती है।
3.यदि अपूर्ण एडाप्टर का उपयोग किया जाता है, तो पूर्ण एडाप्टर बनाने के लिए कम से कम 2 चक्रों को प्रवर्धित करने की आवश्यकता होती है।
6. पुस्तकालय गुणवत्ता विश्लेषण
1. निर्मित पुस्तकालयों की गुणवत्ता का विश्लेषण आम तौर पर सांद्रता और आकार वितरण को मापकर किया जाता है।
2. लाइब्रेरी की सांद्रता को फ्लोरोसेंट-आधारित विधियों जैसे कि क्यूबिट और पिकोग्रीन या qPCR द्वारा मापा जा सकता है।
3. नैनोड्रॉप जैसे अवशोषण-आधारित परिमाणीकरण विधियों का उपयोग करना अनुशंसित नहीं है।
4. लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के लिए qPCR विधि का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है: क्यूबिट और पिकोग्रीन जैसी फ्लोरोसेंट-आधारित विधियाँ अपूर्ण dsDNA संरचनाओं (एडेप्टर के बिना या केवल एक छोर को एडॉप्टर से लिगेट किए गए इंसर्ट) को पूर्ण लाइब्रेरी से अलग नहीं कर सकती हैं। qPCR विधि केवल उन पूर्ण लाइब्रेरी को बढ़ाएगी और मापेगी जिनके दोनों छोर एडॉप्टर (सीक्वेंसेबल लाइब्रेरी) से लिगेट किए गए हैं, इस प्रकार लोडिंग के लिए अधिक सटीक माप प्रदान करती है।
5. लाइब्रेरी के आकार वितरण का विश्लेषण एजिलेंट बायोएनालाइजर या केशिका वैद्युतकणसंचलन या माइक्रोफ्लुइडिक्स के सिद्धांतों पर आधारित अन्य उपकरणों का उपयोग करके किया जा सकता है।
7. अन्य सामग्री
1. डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोती: हाईफ़ एनजीएसटीएम डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या AMPure® एक्सपी बीड्स (A63880) या अन्य समकक्ष उत्पाद।
2.एडाप्टर: इल्युमिना के लिए पूर्ण एडाप्टर: येसेन कैट#13519-13520; 384 डुअल सीडीआई प्राइमर्स: येसेन कैट#12412~कैट#12413; 384 अद्वितीय दोहरे सूचकांक (यूडीआई) प्राइमर्स: येसेन कैट#12312~कैट#12315; यूएमआई यूडीआई एडाप्टर: येसेन Cat#13370~Cat#13371; MGI के लिए पूर्ण एडाप्टर: Yeasen Cat#13360-13362. डीएनए प्राइमर मिक्स:बिल्ली#12190 या कैट#12191.
3. लाइब्रेरी गुणवत्ता विश्लेषण: एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर डीएनए 1000 चिप/ उच्च संवेदनशीलता चिप या अन्य समतुल्य उत्पाद; लाइब्रेरी मात्रात्मक अभिकर्मक।
4. अन्य सामग्रियां: पूर्ण इथेनॉल, स्टेराइल अल्ट्राशुद्ध जल, कम प्रतिधारण पिपेट टिप्स, पीसीआर ट्यूब, चुंबकीय स्टैंड, थर्मल साइक्लर, आदि।
8. कार्यप्रवाह
चित्र 1. का कार्यप्रवाह वनपॉट प्रो डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट
आंकड़ों
विभिन्न विखंडन स्थितियों के तहत प्राप्त सम्मिलित टुकड़ों के आकार
500 एनजी मानक जीडीएनए को टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल करते हुए, इस किट के साथ लाइब्रेरी का निर्माण किया गया। विखंडन की स्थितियाँ क्रमशः 5, 10, 15, 20 और 30 मिनट के लिए 32°C, 35°C और 37°C पर एंजाइमेटिक पाचन थीं। विखंडित उत्पादों को 1.2x चुंबकीय मोतियों से शुद्ध किया गया और 21 μL ddH के साथ निक्षालित किया गया2ओ. सांद्रता को क्यूबिट का उपयोग करके मापा गया था, और पुनर्प्राप्त सम्मिलित टुकड़ों का वितरण निम्नलिखित चित्र में दिखाया गया है।
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चित्र 2. विभिन्न एंजाइम पाचन समय के लिए 32°C पर लाइब्रेरी प्रोफाइल
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भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।