विवरण
Hieff NGS® DNA&RNA लाइब्रेरी को-प्रेप किट वी 2 Illumina®&MGI® अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म के लिए एक DNA&RNA सह-लाइब्रेरी किट है, जिसमें कुशल cDNA संश्लेषण अभिकर्मक और एंजाइम पाचन अभिकर्मक शामिल हैं। पारंपरिक लाइब्रेरी की तुलना में निर्माण विधि, यह उत्पाद कुशलतापूर्वक सीडीएनए संश्लेषण और डीएनए और आरएनए पुस्तकालय को पूरा कर सकता है निर्माण किट में डीएनए विखंडन के लिए उच्च गुणवत्ता वाले एंजाइम होते हैं और डीएनए विखंडन, अंत-मरम्मत और डीए-टेलिंग को एक चरण में संयोजित किया जाता है, जो लाइब्रेरी तैयार करने के समय और लागत को काफी कम कर देता है। इस लाइब्रेरी प्रेप किट में एक बेहतरीन लाइब्रेरी रूपांतरण दर है और यह सभी सामान्य जानवरों, पौधों, सूक्ष्मजीवों, आदि के नमूनों और FFPE नमूनों के लिए भी उपयुक्त है। नवीनतम अनुकूलित लिगेज का उपयोग करने वाली यह उन्नत किट एडेप्टर लिगेशन के दौरान स्व-लिगेशन दर को बहुत कम कर देती है। इसके अलावा, एक नए उच्च-निष्ठा पॉलीमरेज़ की शुरूआत प्रवर्धन की समरूपता और निष्ठा को और बेहतर बनाती है।
किट द्वारा प्रदान किए गए सभी घटकों को सख्त गुणवत्ता नियंत्रण और कार्यात्मक सत्यापन से गुजरना पड़ा है, जो लाइब्रेरी निर्माण की स्थिरता और दोहराव को सबसे बड़ी सीमा तक सुनिश्चित करता है।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 12305ES08 / 12305ईएस24 / 12305ES96 |
| आकार | 8 टी/24 टी / 96 टी |
अवयव
| नहीं। | नाम | 12305ईएस08 | 12305ईएस24 | 12305ES96 | |
| 12305-ए | रैंडम प्राइमर | 20 μएल | 60 μएल | 240 μएल | |
| 12305-बी | सीडीएनए प्रतिक्रिया बफर | 64 μएल | 192 μएल | 768 μएल | |
| 12305-सी | सीडीएनए एंजाइम मिक्स | 16 μएल | 48 μएल | 192 μएल | |
| 12305-डी | स्मियरेज़ बफर | 80 μएल | 240 μएल | 960 μएल | |
| 12305-ई | स्मीयरेज एंजाइम मिक्स | 40 μएल | 120 μएल | 480 μएल | |
| 12305-एफ | लिगेशन बढ़ाने वाला | 240 μएल | 720 μएल | 2×1440 μL | |
| 12305-जी | उपन्यास टी4 डीएनए लाइगेस | 40 μएल | 120 μएल | 480 μएल | |
| 12305-एच | 2×सुपर कैनेस® II उच्च-निष्ठा मिश्रण | 200 μएल | 600 μएल | 2×1200 μL | |
| * | प्राइमर मिक्स* | 40 μएल | 120 μएल | 480 μएल | |
टिप्पणी: * इंगित करता है कि यह अभिकर्मक इस किट में शामिल नहीं है और अतिरिक्त अभिकर्मकों की आवश्यकता है। किट है दोहरे प्लेटफॉर्म के साथ संगत Illumina®&एमजीआई®, लेकिन अतिरिक्त प्राइमर मिश्रण (कैट # 13334 एमजीआई के लिए प्राइमर मिश्रण® और कैट# 13335 इल्युमिना के लिए प्राइमर मिक्स®) आवश्यक है।
कार्य प्रवाह:
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए 1 वर्ष।
नोट्स
ऑपरेशन के बारे में
- 1. कृपया अपनी सुरक्षा के लिए लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें।
- घटकों को कमरे के तापमान पर पिघलाएँ।पिघलने के बाद, भँवर द्वारा अच्छी तरह मिलाएँ, ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ और बाद में उपयोग के लिए बर्फ पर रख दें।
- प्रत्येक प्रतिक्रिया चरण को गर्म ढक्कन वाले थर्मोसाइक्लर में करने की सलाह दी जाती है। उपयोग से पहले थर्मोसाइक्लर को निर्धारित तापमान पर पहले से गरम किया जाना चाहिए।
- कृपया RNase रहित उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करेंसंदूषण, और प्रयोगात्मक क्षेत्र की सफाई नियमित रूप से। थर्मोफिशर का RNAZapटीएम आरएनएएस संदूषण को हटाने के लिए उच्च दक्षता वाले न्यूक्लिक एसिड हटाने वाले स्प्रे की सिफारिश की गई।
- अनुचित संचालन से एरोसोल संदूषण होने की संभावना हो सकती है, जिससे परिणाम की सटीकता प्रभावित हो सकती है।पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण क्षेत्रों और पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण परख क्षेत्रों के अनिवार्य भौतिक अलगाव की सिफारिश की जाती है। लाइब्रेरी निर्माण के लिए विशेष पिपेट जैसे उपकरणों से सुसज्जित।
- 6. यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है।
एडाप्टर लिगेशन
- इल्युमिना या एमजीआई लांग एडाप्टर (बारकोडेड एडाप्टर) किट और शॉर्ट एडाप्टर किट ग्राहकों के लिए उनकी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार चयन करने के लिए उपलब्ध हैं।
- उच्च गुणवत्ता वाले, वाणिज्यिक एडाप्टर का चयन करने की सिफारिश की गई थी। यदि स्व-निर्मित एडाप्टर का चयन किया जाता है, तो कृपया NGS प्राइमर संश्लेषण में अनुभव वाली कंपनी को सौंपें और सख्त संदूषण नियंत्रण की आवश्यकता पर टिप्पणी करें। इसके अलावा, एक साफ बेंच में डीएनए एनीलिंग समाधान तैयार करने और क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए हर बार केवल एक प्रकार के एडाप्टर को संचालित करने की सिफारिश की जाती है।
- कृपया एडाप्टरों को बर्फ पर या 4°C पर पिघलाएं; कमरे के तापमान पर संचालन करते समय, एडाप्टरों को विकृत होने से बचाने के लिए प्रयोगशाला का तापमान 25°C से अधिक नहीं होना चाहिए।
- एडाप्टर की सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी उपज को प्रभावित करती है। किट में जोड़ा गया एडाप्टर वॉल्यूम 5 μl पर तय किया गया है। एडाप्टर को 0.1×TE बफर के साथ पतला करने की सिफारिश की जाती है और पतला एडाप्टर 48 घंटों के लिए 4°C पर संग्रहीत किया जा सकता है। तालिका1 इनपुट आरएनए की विभिन्न मात्राओं के लिए अनुशंसित एडाप्टर राशि को सूचीबद्ध करता है।
तालिका 1-1 अनुशंसित इल्युमिना® विभिन्न इनपुट के लिए एडाप्टर राशि डीएनए और आरएनए
| इनपुट कुल डीएनए&शाही सेना | Illumina® एडाप्टर स्टॉक सांद्रता |
| <10 एनजी | 3 माइक्रोएम |
| ≥10 एनजी | 15 माइक्रोन |
तालिका 1-2 अनुशंसित एम.जी.आई.® विभिन्न इनपुट के लिए एडाप्टर राशि डीएनए और आरएनए
| इनपुट कुल डीएनए और आरएनए | एमजीआई® एडाप्टर स्टॉक सांद्रता |
| <10 एनजी | 5 माइक्रोन |
| ≥10 एनजी | 10 माइक्रोन |
*एडाप्टर के उपयोग को विभिन्न प्रकार के कुल आरएनए नमूनों और इनपुट मात्रा के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
लाइब्रेरी प्रवर्धन
प्रवर्धन चक्र संख्याओं को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए। अपर्याप्त प्रवर्धन से लाइब्रेरी यील्ड कम हो सकती है; अधिक प्रवर्धन से पूर्वाग्रह, त्रुटियाँ, दोहराए गए रीड और काइमेरिक उत्पाद बढ़ सकते हैं। तालिका 2 1 μg की लाइब्रेरी उपज को लक्षित करते हुए अनुशंसित चक्र संख्याओं को सूचीबद्ध करता है।
मेज़ 2 डीएनए और आरएनए लाइब्रेरी उत्पन्न करने के लिए चक्रों की अनुशंसित संख्या *
| कुल डीएनए और आरएनए इनपुट करें | चक्रों की संख्या |
| <1 एनजी | 10~12 |
| 1 एनजी | 9~10 |
| 10 एनजी | 6~7 |
| 50 एनजी | 4~5 |
| 100~1000 एनजी | 4 |
नोट: * लाइब्रेरी की उपज न केवल इनपुट मात्रा और प्रवर्धन चक्रों की संख्या से संबंधित है, बल्कि नमूनों की गुणवत्ता, विखंडन की स्थिति और छंटाई की स्थिति से भी प्रभावित होती है। लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया में, वास्तविक स्थिति के अनुसार सबसे उपयुक्त स्थितियों का चयन करें।
मनका-आधारित डीएनए सफाई और आकार चयन
- 1.लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया में कई चरण हैं जिनमें डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोतियों की आवश्यकता होती है। हम डीएनए शुद्धिकरण और आकार-चयन के लिए Hieff NGS™ डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या AMPure® XP चुंबकीय मोती (बेकमैन कैट#A63880) की सलाह देते हैं।
- 2.चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए, अन्यथा उपज कम हो जाएगी और आकार चयन प्रभाव प्रभावित होगा।
- 3.चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिश्रित किया जाना चाहिए।
- 4.सुपरनैटेंट को स्थानांतरित करते समय मोतियों को चूसें नहीं, मोतियों की थोड़ी सी मात्रा भी निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकती है।
- 5. 80% इथेनॉल ताजा तैयार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करेगा।
- 6. उत्पाद को निकालने से पहले चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर सुखाया जाना चाहिए। अपर्याप्त सूखापन आसानी से इथेनॉल अवशेषों को बाद की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने का कारण बनेगा; अत्यधिक सूखापन चुंबकीय मोतियों को दरार करने और शुद्धिकरण उपज को कम करने का कारण बनेगा। आम तौर पर, मोतियों को पूरी तरह से सूखने देने के लिए कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सुखाना पर्याप्त होता है।
- 7.यदि आवश्यक हो, तो शुद्ध या आकार-चयनित डीएनए नमूने1× टीई बफर को 4°C पर 1-2 सप्ताह तक या -20°C पर एक महीने तक भंडारित किया जा सकता है।
पुस्तकालय गुणवत्ता विश्लेषण
- निर्मित पुस्तकालयों की गुणवत्ता का विश्लेषण आम तौर पर सांद्रता और आकार वितरण को मापकर किया जाता है।
- लाइब्रेरीज़ की सांद्रता को क्यूबिट और पिकोग्रीन या क्यूपीसीआर जैसी फ्लोरोसेंट-आधारित विधियों द्वारा मापा जा सकता है।
- नैनोड्रॉप जैसे अवशोषण-आधारित परिमाणीकरण विधियों का उपयोग करना अनुशंसित नहीं है।
- लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के लिए qPCR विधि का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है: क्यूबिट और पिकोग्रीन जैसी फ्लोरोसेंट-आधारित विधियाँ अपूर्ण dsDNA संरचनाओं (एडेप्टर के बिना या केवल एक छोर को एडॉप्टर से लिगेट किए गए इंसर्ट) को पूर्ण लाइब्रेरी से अलग नहीं कर सकती हैं। qPCR विधि केवल उन पूर्ण लाइब्रेरी को बढ़ाएगी और मापेगी जिनके दोनों छोर एडॉप्टर (सीक्वेंसेबल लाइब्रेरी) से लिगेट किए गए हैं, इस प्रकार लोडिंग के लिए अधिक सटीक माप प्रदान करती है।
- लाइब्रेरी के आकार वितरण का विश्लेषण एजिलेंट बायोएनालाइजर या केशिका वैद्युतकणसंचलन या माइक्रोफ्लुइडिक्स के सिद्धांतों पर आधारित अन्य उपकरणों का उपयोग करके किया जा सकता है।
अन्य सामग्री
- 1.डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोती: हाईफ़ एनजीएस™ डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या एएमप्योर®एक्सपी बीड्स (A63880) या अन्य समकक्ष उत्पाद।
2.एडाप्टर: इल्युमिना के लिए पूर्ण एडाप्टर (येसेन कैट#13519-13520 या अन्य समतुल्य उत्पाद) या एमजीआई के लिए पूर्ण एडाप्टर (येसेन कैट#13360-13362 या अन्य समतुल्य उत्पाद)।
- लाइब्रेरी गुणवत्ता विश्लेषण: एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर डीएनए 1000 चिप/ उच्च संवेदनशीलता चिप या अन्य समतुल्य उत्पाद; लाइब्रेरी मात्रात्मक अभिकर्मक।
- अन्य सामग्रियां: पूर्ण इथेनॉल, स्टेराइल अल्ट्राशुद्ध जल, कम प्रतिधारण पिपेट टिप्स, पीसीआर ट्यूब, चुंबकीय स्टैंड, थर्मल साइक्लर, आदि।
दस्तावेज़:
नियमावली
12305ES-Hieff NGS® DNA&RNA लाइब्रेरी को-प्रेप किट V2.pdf
भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।