विवरण
हाईफ़ एनजीएस™ वन पॉट फ्लैश डीएनए लाइब्रेरी प्रेपकिट एक तीव्र एंजाइमेटिक डीएनए लाइब्रेरी किट है，चुड़ैल इसमें डीएनए विखंडन के लिए उच्च गुणवत्ता वाला एंजाइम होता है और यह डीएनए विखंडन, अंतिम-मरम्मत और डीए-टेलिंग को एक चरण में संयोजित करता है, जिससे लाइब्रेरी तैयार करने का समय और लागत काफी कम हो जाती है।
यह लाइब्रेरी तैयारी किट सभी सामान्य जानवरों, पौधों, सूक्ष्मजीवों आदि के 100 पीजी -500 एनजी नमूनों के साथ संगत है।
और एक ही ट्यूब में डीएनए विखंडन, टर्मिनल मरम्मत और ए-टेल एडिशन प्रतिक्रिया को जल्दी से साकार करें। किट को एडेप्टर और प्राइमरों के साथ मिलान करने की आवश्यकता है, और यह इल्लुमिना के साथ संगत है और एमजीआई उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म.
विशेषता
1) 100 पीजी-500 एनजी के जीनोमिक डीएनए नमूनों के लिए उपयुक्त।
2）इल्युमिना के साथ संगत और एमजीआई उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म.
3）विखंडन, अंत-मरम्मत और ए-टेलिंग अंदर की प्रतिक्रिया 5 मिनट.
4）कुशल लाइब्रेरी रूपांतरण दर और प्रवर्धन दक्षता।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 12316ES24 / 12316ES96 |
| आकार | 24 टी/96 टी |
अवयव
| नाम | 12316ES24 | 12316ES96 | |
| 12316-ए | स्मियरेज़ मिक्स | 240 μएल | 960 μएल |
| 12316-बी | लिगेशन बढ़ाने वाला | 720 μएल | 4×720 μएल |
| 12316-सी | फास्ट टी4 डीएनए लाइगेस | 120 μएल | 480 μएल |
| 12316-डी | 2×हद दर्जे का एचएफ प्रवर्धन मिश्रण | 600 μएल | 4×600 μएल |
| * | प्राइमर मिक्स* | 120 μएल | 480 μएल |
टिप्पणी: * इंगित करता है कि यह अभिकर्मक इस किट में शामिल नहीं है और अतिरिक्त अभिकर्मकों की आवश्यकता है.द किट है दोहरे प्लेटफॉर्म के साथ संगत इल्लुमिना और एमजीआई, लेकिन अतिरिक्त प्राइमर मिश्रण (कैट # 13334 एमजीआई के लिए प्राइमर मिश्रण और इल्लुमिना के लिए कैट# 13335 प्राइमर मिक्स) आवश्यक है।
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15 पर संग्रहित किया जाना चाहिए℃ 1 के लिए वर्ष।
आंकड़ों
चित्र 1. 10 प्रकार के सूक्ष्मजीवों के डीएनए का पता लगाना
पुस्तकालयों को तैयार किया गया बिल्ली#12316 शिष्टाचार ,10 ज़ाइमोबायोमिक्स माइक्रोबियल कम्युनिटी डीएनए स्टैंडर्ड (ज़ाइमो रिसर्च® #D6306) के अनुसार। लाइब्रेरी को एकत्र किया गया और इल्युमिना (एसई75).अनुक्रमण डेटा को 20M तक समरूपित किया गया और दोनों इनपुट स्तरों के लिए अपेक्षित और पता लगाई गई संरचना की तुलना की गई। विशिष्ट माइक्रोबियल जीडीएनए का पता लगाना अपेक्षित संरचना के अनुरूप था। अपेक्षित संरचना: क्रिप्टोकोकस नियोफॉर्मन्स 2%, सैकरोमाइसिस सेरेविसिया 2%, बैसिलस सबटिलिस 12%, एस्चेरिचिया कोली 12%, एंटरोकोकस फेकेलिस 12%, लैक्टोबैसिलस फर्मेंटम 12%, लिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स 12%, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा 12%, स्टैफिलोकोकस ऑरियस 12% और साल्मोनेला एंटरिका 12%।
ऑपरेशन के बारे में
1. कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
2. घटकों को कमरे के तापमान पर पिघलाएँ। पिघलने के बाद, भँवर द्वारा अच्छी तरह से मिलाएं, ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएं और बाद में उपयोग के लिए उन्हें बर्फ पर रखें।
3.प्रत्येक चरण में प्रतिक्रिया समाधान तैयार करते समय, समान रूप से मिश्रण करने के लिए पिपेट का उपयोग करने या धीरे से हिलाने की सिफारिश की जाती है। हिंसक रूप से हिलाने से लाइब्रेरी आउटपुट कम हो सकता है।
4. नमूनों के क्रॉस संदूषण से बचने के लिए, फ़िल्टर तत्व के साथ गन हेड का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है। कृपया अलग-अलग नमूनों को अवशोषित करते समय गन हेड को बदलें।
5. प्रत्येक प्रतिक्रिया चरण को गर्म ढक्कन वाले थर्मोसाइक्लर में करने की सलाह दी जाती है। उपयोग से पहले थर्मोसाइक्लर को निर्धारित तापमान पर गर्म किया जाना चाहिए।
6. अनुचित संचालन से एरोसोल संदूषण की संभावना हो सकती है, जिससे परिणाम की सटीकता प्रभावित हो सकती है। पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण क्षेत्रों और पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण परख क्षेत्रों के अनिवार्य भौतिक अलगाव की सिफारिश की जाती है। लाइब्रेरी निर्माण के लिए विशेष पिपेट जैसे उपकरणों से सुसज्जित।
7. यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है।
डीएनए विखंडन के बारे में
1. इस किट की संगत रेंज 100 पीजी है–500 एनजी इनपुट डीएनए। A260/A280 = 1.8-2.0 के साथ उच्च गुणवत्ता वाले इनपुट डीएनए का यथासंभव उपयोग किया जाना चाहिए।
2. यदि इनपुट डीएनए में धातु आयन चेलेटिंग एजेंट या अन्य लवणों की उच्च सांद्रता है, तो यह बाद के प्रयोगों को प्रभावित कर सकता है। डीएनए को ddH2O या टेबफ़र (10 मिमी ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.0-8.5; 0.1 मिमी EDTA) में पतला करने की सिफारिश की जाती है।
3. अधिकांश उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए के लिए, पाचन समय तालिका 1 में दिखाया गया है। किट की प्राथमिकता कम है और यह जीसी सामग्री वाले विभिन्न टेम्पलेट्स को सहन कर सकता है।
तालिका नंबर एक। पारंपरिक जीनोमिक डीएनए विखंडन का अनुशंसित समय
| शिखर आकार डालें | विखंडन समय | अनुकूलन सीमा |
| 200 बीपी | 5 मिनट | 3-8 मिनट |
| 150 बीपी | 8 मिनट | 5-10 मिनट |
एडाप्टर लिगेशन
1. एडाप्टर की सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी उपज को प्रभावित करती है। एडाप्टर के अत्यधिक उपयोग से अधिक एडाप्टरडिमर का उत्पादन हो सकता है; कम खुराक से प्रभावित हो सकता है बंधाव दक्षता और लाइब्रेरी उपज। तालिका 2 और 3 में अनुशंसित मात्रा सूचीबद्ध है इस किट का उपयोग करके विभिन्न इनपुट डीएनए इनपुट के लिए एडाप्टर का उपयोग किया जा सकता है।
तालिका 2. अनुशंसित इल्युमिना विभिन्न इनपुट डीएनए के लिए एडाप्टर राशि
| इनपुट डीएनए | 15 μएम एडाप्टर कमजोरीकरण गुणक | आयतन |
| 50 एनजी-500 एनजी | 10 | 5 μएल |
| 1 एनजी-50 एनजी | 20 | 5 μएल |
| 100 पीजी-1 एनजी | 30 | 5 μएल |
टेबल तीन। अनुशंसित एम.जी.आई. विभिन्न इनपुट डीएनए के लिए एडाप्टर राशि
| इनपुट डीएनए | 10 μएम एडाप्टरडिल्यूशन मल्टीपल | आयतन |
| 50 एनजी-500 एनजी | कमजोरीकरण गुणक | 5 μएल |
| 10 एनजी-50 एनजी | 10 | 5 μएल |
| 100 पीजी-10 एनजी | 5 | 5 μएल |
लाइब्रेरी प्रवर्धन
प्रवर्धन चक्र संख्याओं को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए। अपर्याप्त प्रवर्धन से लाइब्रेरी यील्ड कम हो सकती है; अधिक प्रवर्धन से पूर्वाग्रह, त्रुटियाँ, दोहराए गए रीड और काइमेरिक उत्पाद बढ़ सकते हैं। तालिका 4 1 की लाइब्रेरी उपज को लक्षित करते हुए अनुशंसित चक्र संख्याओं को सूचीबद्ध करता है μजी।
तालिका 4. 100 पीजी-500 एनजी इनपुट डीएनए के अनुशंसित चक्र
| इनपुट डीएनए (एनजी) | 1 उत्पन्न करने के लिए आवश्यक चक्रों की संख्या μजी |
| 500 एनजी | 2-4 |
| 250 एनजी | 4-6 |
| 100 एनजी | 5-7 |
| 50 एनजी | 7-9 |
| 5 एनजी | 11-13 |
| 100 पृ. | 14-16 |
मनका-आधारित डीएनए सफाई और आकार चयन
1. लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया में कई चरण हैं जिनमें डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोतियों की आवश्यकता होती है। हम Hieff NGS की अनुशंसा करते हैं™ डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या AMPure™ डीएनए शुद्धिकरण और आकार-चयन के लिए एक्सपी चुंबकीय मोती (बेकमैन कैट#A63880)।
2. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए, अन्यथा उपज कम हो जाएगी और आकार चयन प्रभाव प्रभावित होगा।
3. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिश्रित किया जाना चाहिए।
4. सतह पर तैरने वाले तरल को स्थानांतरित करते समय मोतियों को चूसें नहीं, मोतियों की अल्प मात्रा भी निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकती है।
5. 80% इथेनॉल ताजा तैयार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करेगा।
6. उत्पाद को निकालने से पहले चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर सुखाया जाना चाहिए। अपर्याप्त सूखापन आसानी से इथेनॉल अवशेषों को बाद की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने का कारण बनेगा; अत्यधिक सूखापन चुंबकीय मोतियों को दरार करने और शुद्धिकरण उपज को कम करने का कारण बनेगा। आम तौर पर, मोतियों को पूरी तरह से सूखने देने के लिए कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सुखाना पर्याप्त होता है।
7. यदि आवश्यक हो, तो शुद्ध या आकार-चयनित डीएनए नमूनों को 0.1× टीई बफर को 4°C पर 1-2 सप्ताह तक या -20°C पर एक महीने तक भंडारित किया जा सकता है।
पुस्तकालय गुणवत्ता विश्लेषण
1. निर्मित पुस्तकालयों की गुणवत्ता का विश्लेषण आम तौर पर सांद्रता और आकार वितरण को मापकर किया जाता है।
2. लाइब्रेरी सांद्रता को फ्लोरोसेंट-आधारित विधियों जैसे कि क्यूबिट और पिकोग्रीन या qPCR द्वारा मापा जा सकता है।
3. नैनोड्रॉप जैसे अवशोषण-आधारित परिमाणीकरण विधियों का उपयोग करना अनुशंसित नहीं है।
4. लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के लिए qPCR विधि का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है: क्यूबिट और पिकोग्रीन जैसी फ्लोरोसेंट-आधारित विधियाँ अपूर्ण dsDNA संरचनाओं (एडेप्टर के बिना या केवल एक छोर को एडॉप्टर से लिगेट किए गए इंसर्ट) को पूर्ण लाइब्रेरी से अलग नहीं कर सकती हैं। qPCR विधि केवल उन पूर्ण लाइब्रेरी को बढ़ाएगी और मापेगी जिनके दोनों छोर एडॉप्टर (सीक्वेंसेबल लाइब्रेरी) से लिगेट किए गए हैं, इस प्रकार लोडिंग के लिए अधिक सटीक माप प्रदान करती है।
5. लाइब्रेरी के आकार वितरण का विश्लेषण एजिलेंट बायोएनालाइजर या केशिका वैद्युतकणसंचलन या माइक्रोफ्लुइडिक्स के सिद्धांतों पर आधारित अन्य उपकरणों का उपयोग करके किया जा सकता है।
दस्तावेज़:
सुरक्षा डेटा पत्रक
12316_एमएसडीएस_एचबी250211_EN.पीडीएफ
नियमावली
12316_मैनुअल_Ver.Eएन20241225.पीडीएफ
भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।