विवरण
हिएफ़ एनजीएसटीएम इवोमैक्स आरएनए लाइब्रेरी प्रेप किट (डीयूटीपी) एक है पूर्वमिश्रित, एक्टिनोमाइसिन डी मुफ़्त और किनारा विशेष कुल आरएनए अनुक्रमण लाइब्रेरी प्रस्तुत करने का किट इल्युमिना और MGI प्लेटफ़ॉर्म के साथ संगत है। यह उत्पाद दो प्रकारों में उपलब्ध है: नली या सीलिंग किट, और यह किट अधिक है सुविधाजनक चाहे स्वचालित तरल हैंडलिंग डिवाइस द्वारा या मैन्युअल हेरफेर किट में आरएनए विखंडन अभिकर्मक, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मक, स्ट्रैंड-विशिष्ट डीएस-सीडीएनए संश्लेषण अभिकर्मक और लाइब्रेरी प्रवर्धन अभिकर्मक शामिल हैं। इसे mRNA शुद्धिकरण किट या rRNA निष्कासन किट के साथ जोड़ा जा सकता है mRNA या lncRNA अनुसंधान करें। यह उत्पाद एक्टिनोमाइसिन डी के बिना एक उच्च श्रृंखला विशिष्टता लाइब्रेरी प्राप्त करने के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन मॉड्यूल को अनुकूलित करता है, जो प्रयोगकर्ताओं की सुरक्षा को अधिक हद तक सुनिश्चित करता है। लाइब्रेरी की स्थिरता और दोहराव को अधिकतम करने के लिए सभी अभिकर्मकों को सख्त गुणवत्ता नियंत्रण और कार्यात्मक सत्यापन के अधीन किया गया था तैयारी।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 12340ES24/12340ES96/12340ES97/12340ES98 |
| आकार | 24 टी / 96 टी / 96 टी (स्वचालन) / 96 टी (प्लेट) |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 12340ES24 | 12340ES96 | 12340ES97 (स्वचालन) | 12340ES98 (थाली )** |
| 12340-ए | फ्रैग/प्राइम बफर | 450 μएल | 2×900 μL | 2×1064 μL | 8×266 μL |
| 12340-बी | प्रथम प्रतिक्रिया मॉड्यूल 2.0 | 192 μएल | 768 μएल | 960 μएल | 8×120 μL |
| 12340-सी | दूसरा रिएक्शन मॉड्यूल (dUTP) | 840 μएल | 3×1120 μL | 3×1280 μL | 8×480 μL |
| 12340-डी | लिगेशन रिएक्शन मॉड्यूल | 840 μएल | 3×1120 μL | 3×1280 μL | 8×480 μL |
| 12340-ई | 2×सुपर कैनेस® II हाई-फ़िडेलिटी मिक्स | 600 μएल | 2×1200 μL | 2×1360 μL | 8×340 μL |
| * | प्राइमर मिक्स* | / | / | / | / |
नोट: * नोटेशन से पता चलता है कि घटक किट में शामिल नहीं है। यदि पूर्ण एडाप्टर का उपयोग किया जाता है तो प्राइमर मिश्रण की आवश्यकता होती है, अन्यथा यह नहीं है'यह किट इल्युमिना और एमजीआई प्लेटफॉर्म के साथ संगत है, लेकिन अतिरिक्त प्राइमर मिक्स (कैट # 13334 प्राइमर मिक्स फॉर एमजीआई) की आवश्यकता हैटीएम और Illumina® के लिए कैट # 13335 प्राइमर मिक्स) Illumina® या MGI प्लेटफ़ॉर्म के लिए यदि पूर्ण एडाप्टर का उपयोग किया जाता है।
आकृति
प्लेट अभिकर्मक समूह का लेआउट.
चित्र 1: सीलिंग-प्लेट लाइब्रेरी किट का अभिकर्मक लेआउट
चित्र 2. के सरलीकृत घटक इवोमैक्स आरएनए लाइब्रेरी तैयारी किट.
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए 1 साल।
निर्देश
1. 20 μL प्रणाली में जोड़ने के लिए अनुशंसित मात्रा है 0.1-1 इकाइयाँ (यू), और इनपुट मात्रा को वास्तविक परिणामों के आधार पर समायोजित किया जा सकता है।
2. प्रयोग की मांग के अनुसार, dUTP की अंतिम सांद्रता 0.2 ~ 0.6 mM के बीच समायोजित की जा सकती है, और 0.2 mM dTTP को चुनिंदा रूप से जोड़ा जा सकता है।
3. 25~37℃ पर प्रतिक्रिया समय प्रयोगात्मक आवश्यकता के अनुसार 5 ~ 10 मिनट के भीतर समायोजित किया जा सकता है।
नोट्स
1. संचालन
1) कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
2) घटकों को कमरे के तापमान पर पिघलाएँ। कई बार ऊपर-नीचे करके अच्छी तरह मिलाएँ, थोड़ी देर घुमाएँ और उपयोग के लिए बर्फ़ पर रखें।
3) प्रत्येक चरण की प्रतिक्रिया को गर्म ढक्कन वाले थर्मल साइक्लर में करने की सलाह दी जाती है। उपयोग से पहले थर्मल साइक्लर को निर्धारित तापमान पर पहले से गरम किया जाना चाहिए।
4) RNase संदूषण से मुक्त आपूर्ति और नियमित रूप से प्रयोगात्मक क्षेत्र की सफाई आवश्यक है। थर्मोफिशर का RNAZapटीएम आरएनएएस संदूषण को हटाने के लिए उच्च दक्षता वाले न्यूक्लिक एसिड हटाने वाले स्प्रे की सिफारिश की गई।
5) अनुचित संचालन से एरोसोल संदूषण की संभावना हो सकती है, जिससे परिणाम की सटीकता प्रभावित हो सकती है। पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण क्षेत्रों और पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण परख क्षेत्रों के अनिवार्य भौतिक अलगाव की सिफारिश की जाती है। पुस्तकालय निर्माण के लिए विशेष पिपेट जैसे उपकरणों से सुसज्जित।
6) यह अभिकर्मक एक बार उपयोग के लिए है। एक से अधिक बार उपयोग करना सख्त वर्जित है।
7) यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है।
2. एडाप्टर लिगेशन
1) इल्युमिना या एमजीआई लांग एडाप्टर (बारकोडेड एडाप्टर) किट और शॉर्ट एडाप्टर किट ग्राहकों के लिए उनकी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार चयन करने के लिए उपलब्ध हैं।
2) उच्च गुणवत्ता वाले, वाणिज्यिक एडाप्टर का चयन करने की सिफारिश की गई थी। यदि स्व-निर्मित एडाप्टर का चयन किया जाता है, तो कृपया NGS प्राइमर संश्लेषण में अनुभव वाली कंपनी को सौंपें और सख्त संदूषण नियंत्रण की आवश्यकता पर टिप्पणी करें। इसके अलावा, एक साफ बेंच में डीएनए एनीलिंग समाधान तैयार करने और क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए हर बार केवल एक प्रकार के एडाप्टर को संचालित करने की सिफारिश की जाती है।
3) कृपया एडाप्टरों को बर्फ पर या 4°C पर पिघलाएं; कमरे के तापमान पर संचालन करते समय, एडाप्टरों को विकृत होने से बचाने के लिए प्रयोगशाला का तापमान 25°C से अधिक नहीं होना चाहिए।
4) एडाप्टर की सांद्रता सीधे तौर पर लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी उपज को प्रभावित करती है। किट में जोड़े गए एडाप्टर की मात्रा 5 μl तय की गई है। एडाप्टर को 0.1×TE बफर के साथ पतला करने की सिफारिश की जाती है और पतला एडाप्टर 48 घंटों के लिए 4°C पर संग्रहीत किया जा सकता है। तालिका 1 इनपुट आरएनए की विभिन्न मात्राओं के लिए अनुशंसित एडाप्टर राशि को सूचीबद्ध करता है।
तालिका 1-1 विभिन्न इनपुट आरएनए के लिए अनुशंसित इल्युमिना एडाप्टर राशि
| कुल आरएनए इनपुट करें | Illumina® एडाप्टर स्टॉक सांद्रता |
| 10 एनजी | 1 माइक्रोएम |
| 100 एनजी | 1.5 माइक्रोएम |
| 500 एनजी | 3 माइक्रोएम |
| ≥1 माइक्रोग्राम | 5 माइक्रोएम |
तालिका 1-2 विभिन्न इनपुट आरएनए के लिए अनुशंसित एमजीआई एडाप्टर राशि
| कुल आरएनए इनपुट करें | MGI® एडाप्टर स्टॉक सांद्रता |
| 10~99 एनजी | 1 माइक्रोएम |
| 100~499 एनजी | 2 माइक्रोएम |
| 500~4000 एनजी | 5 माइक्रोएम |
* एडाप्टर का उपयोग विभिन्न प्रकार के कुल आरएनए नमूनों और इनपुट मात्रा के अनुसार समायोजित किया जा सकता है
3.लाइब्रेरी प्रवर्धन
1) प्रथम पीढ़ी के डीएनए पॉलीमरेज़ के आधार पर, किट में उच्च-निष्ठा डीएनए पॉलीमरेज़ ने अपनी प्रवर्धन एकरूपता में काफी सुधार किया है और कोई प्रवर्धन पूर्वाग्रह प्रदर्शित नहीं करता है।
2) प्रवर्धन चक्र संख्याओं को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए। अपर्याप्त प्रवर्धन से लाइब्रेरी यील्ड कम हो सकती है; अधिक प्रवर्धन से पूर्वाग्रह, त्रुटियाँ, दोहराए गए रीड, काइमेरिक उत्पाद और विस्तार उत्परिवर्तन का संचय हो सकता है। तालिका 2 में पीसीआर प्रवर्धन के लिए अनुशंसित चक्र संख्याएं सूचीबद्ध हैं।
3) तालिका 2 में सुझाए गए चक्रों की अनुशंसित संख्या लाइब्रेरी तैयारी आवश्यकताओं के विशाल बहुमत को पूरा कर सकती है। यदि आपका नमूना खराब गुणवत्ता का है (जैसे कि गंभीर गिरावट वाले एफएफपीई नमूने), तो वास्तविक स्थिति के अनुसार चक्रों की संख्या उचित रूप से बढ़ाई जा सकती है। ध्यान दें कि mRNA विभिन्न प्रजातियों और ऊतकों से भिन्न होता है, प्रवर्धन चक्रों की संख्या को समायोजित किया जाना चाहिए।
तालिका 2 इनपुट कुल आरएनए मात्रा और अनुशंसित प्रवर्धन चक्र तालिका *
| कुल आरएनए इनपुट करें | चक्रों की संख्या |
| 10 एनजी | 16 |
| 100 एनजी | 14 |
| 500 एनजी | 12 |
| 1 माइक्रोग्राम | 11 |
[नोट]: *लाइब्रेरी की उपज न केवल इनपुट मात्रा और प्रवर्धन चक्रों की संख्या से संबंधित है, बल्कि नमूनों की गुणवत्ता, विखंडन की स्थिति और छंटाई की स्थिति से भी प्रभावित होती है। लाइब्रेरी निर्माण की प्रक्रिया में, वास्तविक स्थिति के अनुसार सबसे उपयुक्त स्थितियों का चयन करें।
4. मनका-आधारित डीएनए सफाई और आकार चयन
1) लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया में कई चरण हैं जिनमें डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोतियों की आवश्यकता होती है। हम डीएनए शुद्धिकरण और आकार-चयन के लिए Hieff NGS™ डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या AMPure® XP चुंबकीय मोती (बेकमैन कैट#A63880) की सलाह देते हैं।
2) चुंबकीय मनका को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए, अन्यथा उपज कम हो जाएगी और आकार चयन प्रभाव प्रभावित होगा।
3) चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिश्रित किया जाना चाहिए।
4) सतह पर तैरने वाले तरल को स्थानांतरित करते समय मोतियों को चूसें नहीं, मोतियों की अल्प मात्रा भी निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकती है।
5) 80% इथेनॉल ताजा तैयार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करेगा।
6) उत्पाद को निकालने से पहले चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर सुखाया जाना चाहिए। अपर्याप्त सूखापन आसानी से इथेनॉल अवशेषों को बाद की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने का कारण बनेगा; अत्यधिक सूखापन चुंबकीय मोतियों को दरार करने और शुद्धिकरण उपज को कम करने का कारण बनेगा। आम तौर पर, मोतियों को पूरी तरह से सूखने देने के लिए कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सुखाना पर्याप्त होता है।
7) यदि आवश्यक हो, तो TE बफर में निकाले गए शुद्ध या चयनित आकार के DNA नमूनों को 4°C पर 1-2 सप्ताह तक या -20°C पर एक माह तक भंडारित किया जा सकता है।
5.पुस्तकालय गुणवत्ता विश्लेषण
सामान्यतः, निर्मित लाइब्रेरी की गुणवत्ता का मूल्यांकन सांद्रता पहचान और लंबाई वितरण पहचान द्वारा किया जा सकता है।
6. अन्य सामग्री
1) mRNA संवर्धन किट: Hieff NGS® mRNA आइसोलेशन मास्टर किट V2 (येसेन कैट # 12629)।
2) आरआरएनए रिमूवल किट: हाईएफ़ एनजीएस® मैक्सअप ह्यूमन आरआरएनए डिप्लेशन किट (आरआरएनए और आईटीएस / ईटीएस) (येसेन कैट # 12257) या अन्य आरआरएनए रिमूवल किट।
3) चुंबकीय मोतियों का आरएनए शुद्धिकरण: हाईफ़ एनजीएस® आरएनए क्लीनर (येसेन कैट # 12602) या अन्य समकक्ष उत्पाद।
4) डीएनए शुद्धिकृत चुंबकीय मोती: हाईफ एनजीएस® डीएनए सिलेक्शन मोती (येसेन कैट # 12601) या एएमप्योर® एक्सपी मोती (ए63880) या अन्य समकक्ष उत्पाद।
5) आरएनए गुणवत्ता नियंत्रण: एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर आरएनए 6000 नैनो / पिको चिप या अन्य समकक्ष उत्पाद।
6) एडाप्टर: इल्युमिना® उपयोग के लिए पूर्ण एडाप्टर (कैट # 13519-13520 या अन्य समतुल्य) या एमजीआई® उपयोग के लिए पूर्ण एडाप्टर (कैट # 13360-13362 या अन्य समतुल्य)।
7. पुस्तकालय गुणवत्ता निरीक्षण
एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर डीएनए 1000 चिप / उच्च संवेदनशीलता चिप या अन्य समकक्ष उत्पाद; लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन अभिकर्मक।
8. अन्य सामग्री
निर्जल इथेनॉल, बाँझ अल्ट्रा शुद्ध पानी, कम अवशोषण गन हेड, पीसीआर ट्यूब, चुंबकीय फ्रेम, पीसीआर उपकरण, आदि।
प्रवाह चार्ट
चित्र 1: आरएनए लाइब्रेरी निर्माण प्रक्रिया
विभिन्न गुणवत्ता वाले एफएफपीई नमूनों के लिए आरएनए लाइब्रेरी की तैयारी
गंभीर रूप से विघटित एफएफपीई आरएनए (डीवी 200 <50%) और कम इनपुट नमूनों के लिए, हम लाइब्रेरी हानि को कम करने के लिए एडेप्टर लिगेशन के बाद डबल-शुद्धिकरण प्रोटोकॉल की अनुशंसा करते हैं।
विभिन्न गुणवत्ता वाले FFPE नमूनों के शिखर पैटर्न
भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
आपको यह भी पसंद आ सकता हैं
उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।