विवरण
Hieff NGS™ DNA चयन मोती SPRI (सॉलिड फेज़ रिवर्स इमोबिलाइज़ेशन) सिद्धांत के आधार पर तैयार किए जाते हैं और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (NGS) पुस्तकालयों की तैयारी के दौरान DNA शुद्धिकरण और आकार चयन के लिए लागू होते हैं। Hieff NGS™ DNA चयन मोती विभिन्न DNA और RNA लाइब्रेरी तैयारी किट के साथ संगत है और इसका एक अच्छा विकल्प है एएमप्योर मोती.
अवयव
| घटक सं. | नाम | 12601ईएस08 | 12601ईएस56 | 12601ईएस75 |
| 12601 | Hieff NGS™ डीएनए चयन मोती | 5 एमएल | 60 एमएल | 450 एमएल |
विशेष विवरण
| उत्पाद रेखा | डीएनए साफ और चयन मोती |
| प्रारंभिक सामग्री | डीएनए |
| अनुकूलता | डीएनए |
| अलगाव प्रौद्योगिकी | चुंबकीय मनका |
| अंतिम उत्पाद प्रकार | डीएनए |
| उपयोग हेतु (एप्लिकेशन) | डीएनए सेलेशन अप, डीएनए आकार चयन |
शिपिंग और भंडारण
मोतियों को बर्फ के पैक के साथ भेजा जा रहा है और इन्हें एक वर्ष तक 2°C-8°C तापमान पर संग्रहित किया जा सकता है।
निर्देश
- 1. तैयारी
उपयोग से पहले चयन मोतियों को कमरे के तापमान पर कम से कम 30 मिनट तक संतुलित रखें।
- 2. डीएनए आकार चयन
आकार चयन का संचालन प्रवाह चित्र 1 में दिखाया गया है और प्रोटोकॉल इस प्रकार है।
चित्र 1. डीएनए आकार चयन का फ्लोचार्ट
2.1 उपयोग करने से पहले हर बार ऊपर-नीचे घुमाकर या पाइपिंग करके मोतियों को अच्छी तरह मिलाएं।
2.2 सैंपल में सिलेक्शन बीड्स का पहला राउंड डालें (तालिका 1 देखें)। कम से कम 10 बार ऊपर-नीचे घुमाकर या पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएँ।
2.3 कमरे के तापमान पर 5 मिनट तक रखें।
2.4 ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ और इसे चुंबकीय स्टैंड पर रखें। जब घोल साफ हो जाए (लगभग 5 मिनट), तो सुपरनेटेंट को एक नई पीसीआर ट्यूब में स्थानांतरित करें।
2.5 तालिका 1 के अनुसार चरण 2.4 से चयन मोतियों के दूसरे दौर को नमूने में जोड़ें। कम से कम 10 बार ऊपर और नीचे भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिलाएं।
2.6 कमरे के तापमान पर 5 मिनट तक रखें।
2.7 ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ और चुंबकीय स्टैंड पर रखें। जब घोल साफ हो जाए (लगभग 5 मिनट), तो सतह पर तैरने वाले पदार्थ को चूसें और फेंक दें।
2.8 ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड में रखें और मोतियों को बिना छेड़े 200 μL ताजा तैयार 80% इथेनॉल डालें, कमरे के तापमान पर 30 सेकंड के लिए इनक्यूबेट करें। इथेनॉल को चूसें और फेंक दें।
2.9 कुल दो धुलाई के लिए चरण 2.8 को एक बार दोहराएं।
2.10 10 µL पिपेट टिप से अवशिष्ट इथेनॉल निकालें। ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड में रखें, ढक्कन खोलकर चयन मोतियों को हवा में सुखाएँ जब तक कि दरारें दिखाई न दें (लगभग 5 मिनट)।
नोट: चयनित मोतियों को अधिक न सुखाएं। इससे पुनर्प्राप्ति DNA लक्ष्य कम हो सकता है।
2.11 ट्यूब को मैग्नेटिक स्टैंड से हटाएँ। उचित मात्रा में ddH2O (≥20 µL) डालें और कम से कम 10 बार ऊपर-नीचे घुमाकर या पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएँ।
2.12 कमरे के तापमान पर 5 मिनट तक रखें।
ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ और इसे चुंबकीय स्टैंड पर रखें। जब घोल साफ हो जाए (लगभग 5 मिनट), तो 20 μL सुपरनेटेंट को एक नई ट्यूब में डालें।
- 3.डीएनए आकार चयन के लिए अनुशंसित शर्तें
बछड़े के थाइमस डीएनए को सोनिकेशन द्वारा खंडित करके 100-1,000 बीपी का टुकड़ा तैयार किया गया, और तालिका 1 के अनुसार आकार चयन के दो दौर किए गए। परिणामों का विश्लेषण एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर (चित्र 2) का उपयोग करके किया गया।
तालिका 1. डीएनए आकार चयन के लिए अनुशंसित स्थिति
| डीएनए खंड की लंबाई | 250-350 बी.पी. | 320-420 बी.पी. | 450-550 बी.पी. | 550-700 बी.पी. | 700-900 बी.पी. | 800-1,000 बीपी |
| मोतियों का अनुपात: पहले दौर के लिए डी.एन.ए. | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
| मोतियों का अनुपात: डीएनए 2nd के लिए गोल | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15× | 0.15× | 0.15× |
नोट: तालिका में "×" नमूना डीएनए की मात्रा को दर्शाता है। उदाहरण के लिए, यदि लाइब्रेरी की सम्मिलित लंबाई 250 बीपी है और नमूना डीएनए की मात्रा 100 μL है, तो छंटाई के पहले दौर में उपयोग किए गए चुंबकीय मोतियों की मात्रा 0.80×100 μL = 80 μL है; छंटाई के दूसरे दौर में उपयोग किए गए चुंबकीय मोतियों की मात्रा 0.20× 100 μL = 20 μL है।
चित्र 2. एजिलेंट 2100 उच्च संवेदनशीलता डीएनए चिप इलेक्ट्रोफेरोग्राम
टिप्पणियाँ:
1. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
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