विवरण
ग्लोबिन mRNA रिक्तीकरण जांच (मानव) मानव ग्लोबिन mRNA को हटाने के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह वयस्क, शिशु और भ्रूण से ग्लोबिन mRNA को प्रभावी ढंग से हटा सकता हैएनआईसी HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 और HBZ सहित स्रोत। इस उत्पाद का उपयोग Hieff NGS के साथ किया जाता हैटीएम मैक्सअप आरआरएनए डिप्लेशन किट (मानव/चूहा/चूहा) (येसेन#12253) कुल आरएनए से आरआरएनए और ग्लोबिन एमआरएनए को प्रभावी ढंग से हटाने के लिए। यह किट बरकरार और खराब हो चुके आरएनए नमूनों दोनों के लिए उपयुक्त है। आरआरएनए और ग्लोबिन एमआरएनए हटाने के बाद आरएनए नमूनों का उपयोग एमआरएनए और गैर-कोडिंग आरएनए के उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण विश्लेषण के लिए किया जा सकता है, जो अनुक्रमण परिणामों और सीडीएनए संश्लेषण या अन्य डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों में वैध डेटा के अनुपात को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ाता है।
उत्पाद व्यवहार्यता
मानव के 100 एनजी~1 μg कुल आरएनए नमूनों के लिए उपयुक्त, चूहे और चूहे के रक्त संसाधन, तथा अक्षुण्ण या आंशिक रूप से विघटित आरएनए नमूनों दोनों के लिए।
उत्पाद घटक
| प्रोडक्ट का नाम | विनिर्देश | |
| ग्लोबिन जांच (मानव) | 12806ES24 | 24 टी |
| 12806ES96 | 96 टी |
शिपिंग और भंडारण
सभी घटकों को सूखी बर्फ के साथ भेजा जाता है और उन्हें एक वर्ष के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है.
आकृति
कुल 500 एनजी और 100 एनजी मानव रक्त कुल आरएनए को क्रमशः आरआरएनए हटाने और संयुक्त आरआरएनए और ग्लोबिन हटाने की प्रक्रिया से गुजरना पड़ा। लाइब्रेरी निर्माण और अनुक्रमण के बाद, ग्लोबिन mRNA की सामग्री की तुलना की गई।
चेतावनी
1. कृपया ऐसे उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करें जो RNase संदूषण से मुक्त हों और प्रयोग क्षेत्र को नियमित रूप से साफ करें। थर्मोफिशर के RNAZap का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती हैटीएम आरएनएएस संदूषण को हटाने के लिए उच्च दक्षता वाला न्यूक्लिक एसिड हटाने वाला स्प्रे।
2. आरएनए नमूना जीनोमिक डीएनए संदूषण से मुक्त होना चाहिए। यदि नमूने में जीडीएनए रहता है, तो इसे डीएनएसे I द्वारा पचाया जाना चाहिए और उपयोग से पहले शुद्ध किया जाना चाहिए।
3. आरएनए नमूने की अधिकतम इनपुट मात्रा 10 μL है। यदि नमूने की मात्रा बड़ी है, तो इसे पहले सांद्रित किया जा सकता है।
4. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
5. केवल अनुसंधान के लिए उपयोग!
निर्देश
1. आरएनए के लिए संकरण की जांच
1.1 पीसीआर ट्यूब में 10 एनजी-1 μg कुल आरएनए को न्यूक्लिऐस-मुक्त पानी के साथ 10 μL की अंतिम मात्रा तक पतला करें। आरएनए को रखें बर्फ पर.
1.2 इकट्ठा निम्नलिखित आरएनए/प्रोब संकरण प्रतिक्रिया बर्फ़ पर तालिका 1 के अनुसार।
तालिका 1 आरएनए/प्रोब संकरण प्रतिक्रिया
| अवयव | आयतन (μL) |
| संकरण बफर | 3 |
| जांच मिश्रण (एच/एम/आर) | 1 |
| ग्लोबिन जांच (मानव) | 1 |
| कुल आरएनए | 10 (100 एनजी~1 μg) |
| कुल | 15 |
1.3 कम से कम 10 बार धीरे-धीरे ऊपर-नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह से मिलाएं। ट्यूब के किनारे से तरल इकट्ठा करने के लिए ट्यूब को माइक्रोसेंट्रीफ्यूज में थोड़ी देर के लिए घुमाएँ।
1.4 ट्यूब को थर्मोसाइक्लर में रखें और गर्म ढक्कन को 105°C पर सेट करके तालिका 2 में दिए गए निम्नलिखित प्रोग्राम को चलाएं।
तालिका 2 आरएनए/प्रोब संकरण की प्रतिक्रिया कार्यक्रम
| तापमान | अवधि |
| गर्म ढक्कन 105°C | पर |
| 95° सेल्सियस | 2 मिनट |
| 95° सेल्सियस-22° सेल्सियस | 0.1°C/सेकेंड |
| 22° सेल्सियस | 5 मिनट |
| 4 डिग्री सेल्सियस | पकड़ना |
2. आरएनएसे एच पाचन
2.1 निम्नलिखित RNase H पाचन प्रतिक्रिया को इकट्ठा करें बर्फ़ पर तालिका 3 के अनुसार।
तालिका 3 आरएनेज़ एच पाचन प्रतिक्रिया
| अवयव | आयतन (μL) |
| आरएनएसे एच बफर | 3 |
| आरएनएसे एच | 2 |
| संकरित आरएनए (चरण 1.4) | 15 |
| कुल | 20 |
2.2 कम से कम 10 बार धीरे-धीरे ऊपर-नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह से मिलाएं। ट्यूब के किनारे से तरल इकट्ठा करने के लिए ट्यूब को माइक्रोसेंट्रीफ्यूज में थोड़ी देर के लिए घुमाएं।
2.3 ट्यूब को थर्मोसाइक्लर में रखें और निम्नलिखित प्रोग्राम चलाएँ: ढक्कन 50°C; 37°सेल्सियस, 30 मिनट; 4°C, पकड़ें।
3. डीएनएस मैं पाचन
3.1 तालिका 4 के अनुसार बर्फ पर निम्नलिखित DNase I पाचन प्रतिक्रिया को इकट्ठा करें।
तालिका 4 DNase Ⅰ पाचन प्रतिक्रिया
| अवयव | आयतन (μL) |
| डीएनएस I बफर | 27.5 |
| डीएनएस I | 2.5 |
| आरएनएएस एच उपचारित आरएनए (चरण 2.3) | 20 |
| कुल | 50 |
3.2 कम से कम 10 बार धीरे-धीरे ऊपर-नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह से मिलाएं। ट्यूब के किनारे से तरल इकट्ठा करने के लिए ट्यूब को माइक्रोसेंट्रीफ्यूज में थोड़ी देर के लिए घुमाएँ।
3.3 ट्यूब को थर्मोसाइक्लर में रखें और निम्नलिखित प्रोग्राम चलाएँ: ढक्कन बंद करना; 37°सेल्सियस, 30 मिनट; 4°C, पकड़ें।
4. आरएनए शुद्धिकरण
4.1 हाईफ़ एनजीएस को संतुलित करेंटीएमआरएनए क्लीनर (कैट#12602) को कमरे के तापमान पर लाएं और उपयोग से पहले मोतियों को भंवर द्वारा अच्छी तरह से पुनः लटका दें।
4.2 जोड़ें 110 µएल (2.2×) चरण 3.3 से आरएनए घोल में मोतियों को डालें और कम से कम 10 बार ऊपर-नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएं।
4.3 आर.एन.ए. को मोतियों से बांधने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट तक रखें।
4.4 मोतियों को सतह पर तैरने वाले तरल से अलग करने के लिए ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड पर रखें। जब घोल साफ हो जाए (लगभग 3 मिनट), तो सतह पर तैरने वाले पदार्थ को फेंक दें। सावधान रहें कि पिपेट की नोक मोतियों को न छुए।
4.5 ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड पर रखें। ट्यूब में 200 µL ताजा तैयार 80% इथेनॉल डालें। कमरे के तापमान पर 30 सेकंड के लिए इनक्यूबेट करें और फिर सुपरनेटेंट को त्याग दें। सावधान रहें कि पिपेट की नोक मोतियों को न छुए।
4.6 कुल दो धुलाई के लिए चरण 4.5 को एक बार दोहराएं।
4.7 10 µL के साथ अवशिष्ट इथेनॉल निकालें - पिपेट युक्तियाँ. ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड पर रखें और ढक्कन खुला रखते हुए मोतियों को 5 मिनट तक हवा में सुखाएं।
4.8 ट्यूब को मैग्नेटिक स्टैंड से हटाएँ। 11 μL न्यूक्लिऐज-मुक्त पानी डालकर मोतियों से RNA को बाहर निकालें। कम से कम 10 बार ऊपर-नीचे पाइप करके अच्छी तरह मिलाएँ और ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएँ।
4.9 कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। जब तक घोल साफ न हो जाए (लगभग 3 मिनट) तब तक ट्यूब को चुंबकीय स्टैंड पर रखें।
4.10 10 µL सुपरनेटेंट को न्यूक्लिऐस-मुक्त ट्यूब में स्थानांतरित करें।
नोट: यदि आपको इस बिंदु पर रुकने की आवश्यकता है, तो नमूनों को -80°C पर संग्रहीत किया जा सकता है।
भुगतान और सुरक्षा
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जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
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