विवरण
हाईफ़ एनजीएस™ वनपॉट प्रो डीएनए लाइब्रेरी प्रेप किट V4 एक अगली पीढ़ी की एंजाइमेटिक लाइब्रेरी तैयारी किट है जिसे इल्लुमिना के साथ उपयोग के लिए डिज़ाइन किया गया है और MGI उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म। पारंपरिक लाइब्रेरी तैयारी विधियों की तुलना में, यह किट उच्च-गुणवत्ता वाले विखंडन एंजाइमों का उपयोग करती है, जिससे बोझिल सोनिकेशन प्रक्रियाओं की आवश्यकता समाप्त हो जाती है। विखंडन और अंतिम-मरम्मत मॉड्यूल को एक ही चरण में संयोजित किया जाता है, जिससे लाइब्रेरी तैयारी का समय और लागत दोनों में उल्लेखनीय कमी आती है। यह किट 1 एनजी से 1 माइक्रोग्राम की सैंपल इनपुट रेंज के साथ, पौधे और पशु जीनोम, माइक्रोबियल जीनोम और अधिक सहित कई प्रकार के नमूनों के लिए उपयुक्त है। एंजाइमेटिक विखंडन विभिन्न प्रजातियों में समान टुकड़ों के आकार को सुनिश्चित करता है, जिसमें न्यूनतम अंतर-प्रजाति भिन्नता होती है। इसके अतिरिक्त, इस किट को इल्लुमिना के साथ जोड़ा जा सकता है या एमजीआई इल्लुमिना या एमजीआई उच्च-थ्रूपुट प्लेटफार्मों पर अनुक्रमण के लिए एडेप्टर और प्राइमर।
विशेष विवरण
| कैट.नं. | 12972ES08 / 12972ES24 / 12972ES96 |
| आकार | 8 टी/24 टी/96 टी |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 12972ईएस08 | 12972ईएस24 | 12972ईएस96 |
| 12972-ए | 80 μएल | 240 μएल | 960 μएल | |
| 12972-बी | स्मीयरेज़™ एनजाइम 4.0 | 80 μएल | 240 μएल | 960 μएल |
| 12972-सी | लिगेशन बढ़ाने वाला 4.0 | 240 μएल | 720 μएल | 3×960 μएल |
| 12972-डी | तेज़ डीएनए लाइगेस 4.0 | 80 μएल | 240 μएल | 2×480 μएल |
| 12972-ई | 2×अल्टिमा एचएफ एम्पलीफिकेशन मिक्स | 200 μएल | 600 μएल | 3×800 μएल |
भंडारण
इस उत्पाद को -25~-15℃ तापमान पर 1 घंटे तक संग्रहित किया जाना चाहिए वर्ष।
नोट्स
1. ऑपरेशन के बारे में
1. कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
2. घटकों को कमरे के तापमान पर पिघलाएँ। पिघलने के बाद, भँवर द्वारा अच्छी तरह से मिलाएं, ट्यूब को थोड़ी देर घुमाएं और बाद में उपयोग के लिए उन्हें बर्फ पर रखें।
3. प्रत्येक चरण के प्रतिक्रिया समाधान को तैयार करते समय, अच्छी तरह से मिश्रण करने या धीरे से हिलाने के लिए पिपेट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। जोरदार हिलाने से लाइब्रेरी आउटपुट में कमी आ सकती है।
4. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए फ़िल्टर किए गए पाइपेट टिप्स का उपयोग करना अत्यधिक अनुशंसित है। विभिन्न नमूनों को संसाधित करते समय पाइपेट टिप्स को बदलना सुनिश्चित करें।
5. अनुचित संचालन से एरोसोल संदूषण की संभावना बहुत अधिक हो सकती है, जिससे परिणाम की सटीकता प्रभावित हो सकती है। पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण क्षेत्रों और पीसीआर उत्पाद शुद्धिकरण परख क्षेत्रों के अनिवार्य भौतिक अलगाव की सिफारिश की जाती है। लाइब्रेरी निर्माण के लिए विशेष पिपेट जैसे उपकरणों से सुसज्जित।प्रत्येक क्षेत्र की नियमित सफाई के लिए सतहों को 0.5% सोडियम हाइपोक्लोराइट या 10% ब्लीच से पोंछें
6. यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है।
2. डीएनए विखंडन1. किट 100 पीजी के साथ संगत है - 1000 एनजी इनपुट डीएनए। A260/A280 = 1.8-2.0 के साथ उच्च गुणवत्ता वाले इनपुट डीएनए का उपयोग करना अत्यधिक अनुशंसित है।
2. यदि इनपुट डीएनए के साथ धातु केलेटिंग एजेंट जैसे लवणों की उच्च सांद्रता पेश की गई तो निम्नलिखित प्रयोग प्रभावित हो सकते हैं। हम डीएनए नमूने को निकालने की सलाह देते हैं डीडीएच2हे विखंडन के लिए.
3. कृपया तालिका देखें 6 मानक डीएनए नमूनों के विखंडन समय के लिए।किट में कम विखंडन पूर्वाग्रह है और यह GC संरचना की विस्तृत श्रृंखला वाले DNA नमूनों के लिए एकसमान GC कवरेज प्रदान करता है। कृपया अपनी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर विखंडन समय समायोजित करें।
4. सटीक विखंडन के लिए, कृपया प्रतिक्रिया बर्फ पर तैयार करें।
3. एडाप्टर लिगेशन
1. इल्युमिना या एमजीआई लांग एडाप्टर (बारकोडेड एडाप्टर) किट और शॉर्ट एडाप्टर किट ग्राहकों के लिए उनकी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार चयन करने के लिए उपलब्ध हैं।
2. उच्च गुणवत्ता वाले, वाणिज्यिक एडाप्टर का चयन करने की सिफारिश की गई थी। यदि स्व-निर्मित एडाप्टर का चयन किया जाता है, तो कृपया NGS प्राइमर संश्लेषण में अनुभव वाली कंपनी को सौंपें और सख्त संदूषण नियंत्रण की आवश्यकता पर टिप्पणी करें। इसके अलावा, एक साफ बेंच में डीएनए एनीलिंग समाधान तैयार करने और क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए हर बार केवल एक प्रकार के एडाप्टर को संचालित करने की सिफारिश की जाती है।
3. कृपया एडाप्टरों को बर्फ पर या 4°C पर पिघलाएं; कमरे के तापमान पर संचालन करते समय, एडाप्टरों को विकृत होने से बचाने के लिए प्रयोगशाला का तापमान 25°C से अधिक नहीं होना चाहिए।
4. एडाप्टर की गुणवत्ता और सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी यील्ड को प्रभावित करेगी। एडाप्टर की बहुत अधिक सांद्रता एडाप्टर डिमर गठन को बढ़ावा देती है जबकि बहुत कम एडाप्टर लिगेशन दर और लाइब्रेरी यील्ड को कम करता है। एडाप्टर का उपयोग करते समय इनपुट डीएनए राशि के अनुसार TE बफर के साथ संगत कमजोरीकरण। तालिका 2 -3 इस किट का उपयोग करके विभिन्न इनपुट डीएनए मात्राओं के लिए अनुशंसित एडाप्टर कमजोरीकरण विधियों को सूचीबद्ध करता है।
तालिका नंबर एक विभिन्न इनपुट डीएनए के लिए अनुशंसित इल्युमिना एडाप्टर राशि
| इनपुट डीएनए | एडाप्टर कमजोरीकरण (एडाप्टर का आयतन : कुल आयतन) | एकाग्रता |
| 1 एनजी | 30-गुना (1 : 30) | 0.5 माइक्रोन |
| 10 एनजी | 7.5-गुना (1 : 7.5) | 2 माइक्रोन |
| 100 एनजी | 3-गुना (1 : 3) | 5 माइक्रोन |
| 1000 एनजी | 1.5-गुना (1 : 1.5) | 10 माइक्रोन |
तालिका 2 विभिन्न इनपुट डीएनए के लिए अनुशंसित एमजीआई एडाप्टर राशि
| इनपुट डीएनए | एडाप्टर कमजोरीकरण (एडाप्टर का आयतन : कुल आयतन) | एकाग्रता |
| 1 एनजी | 20-गुना (1 : 20) | 0.5 माइक्रोन |
| 10 एनजी | 5-गुना (1 : 5) | 2 माइक्रोन |
| 100 एनजी | 2-गुना (1 : 2) | 5 माइक्रोन |
| 1000 एनजी | शुद्ध | 10 माइक्रोन |
4. मनका-आधारित डीएनए सफाई और आकार चयन
1. डीएनए खंड के आकार का चयन चरण एडाप्टर लिगेशन के बाद या लाइब्रेरी प्रवर्धन के बाद किया जा सकता है।
2. यदि इनपुट डीएनए मात्रा 50 एनजी से अधिक है तो एडाप्टर लिगेशन के तुरंत बाद आकार-चयन करने की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, कृपया प्रवर्धन के बाद आकार-चयन करें।
3. लिगेशन एन्हांसर में PEG की उच्च सांद्रता होती है, जो सटीक आकार-चयन पर महत्वपूर्ण प्रभाव डाल सकती है। इस प्रकार, यदि आकार-चयन एडाप्टर लिगेशन के ठीक बाद किया जाना है, तो आकार-चयन से पहले बीड्स क्लीन-अप चरण जोड़ने की दृढ़ता से अनुशंसा की जाती है। आकार चयन चरण सीधे किया जा सकता है यदि इसे अंतिम मरम्मत/डीए-टेलिंग से पहले या बाद में किया जाता है पुस्तकालय प्रवर्धन.
4. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए, अन्यथा उपज कम हो जाएगी और आकार चयन प्रभाव प्रभावित होगा।
5. चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर या पाइपिंग द्वारा अच्छी तरह मिश्रित किया जाना चाहिए।
6. सतह पर तैरने वाले तरल को स्थानांतरित करते समय मोतियों को चूसें नहीं, मोतियों की अल्प मात्रा भी निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकती है।
7. 80% इथेनॉल ताजा तैयार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह पुनर्प्राप्ति दक्षता को प्रभावित करेगा।
8. सटीक आकार-चयन के लिए, 100 μL से अधिक की मात्रा से शुरू करने की अनुशंसा की जाती है। यदि कम है, तो अल्ट्रा-शुद्ध पानी के साथ मात्रा को 100 μL तक लाने की अनुशंसा की जाती है।
9. उत्पाद को निकालने से पहले चुंबकीय मोतियों को कमरे के तापमान पर सुखाया जाना चाहिए। अपर्याप्त सूखापन आसानी से इथेनॉल अवशेषों को बाद की प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने का कारण बनेगा; अत्यधिक सूखापन चुंबकीय मोतियों को दरार करने और शुद्धिकरण उपज को कम करने का कारण बनेगा। आम तौर पर, मोतियों को पूरी तरह से सूखने देने के लिए कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सुखाना पर्याप्त होता है।
10. यदि आवश्यक हो, तो शुद्ध या आकार-चयनित डीएनए नमूनों को 0.1× टीई बफर को 4°C पर 1-2 सप्ताह तक या -20°C पर एक महीने तक भंडारित किया जा सकता है।
5. लाइब्रेरी प्रवर्धन
1. लाइब्रेरी एम्पलीफिकेशन करना है या नहीं, यह डीएनए इनपुट की मात्रा, एडेप्टर के प्रकार, अनुक्रमण डेटा एप्लीकेशन आदि पर निर्भर करता है। आंशिक एडेप्टर का उपयोग करते समय एम्पलीफिकेशन चरण की आवश्यकता होती है। पूर्ण लंबाई वाले एडेप्टर का उपयोग करते समय, यदि इनपुट डीएनए <200 एनजी है, तो एम्पलीफिकेशन करने की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, एम्पलीफिकेशन आवश्यक नहीं है।
2. प्रवर्धन चक्र संख्याओं को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए। अपर्याप्त प्रवर्धन से लाइब्रेरी यील्ड कम हो सकती है; अधिक प्रवर्धन से पूर्वाग्रह, त्रुटियाँ, दोहराए गए रीड और काइमेरिक उत्पाद बढ़ सकते हैं। तालिका 3 1 μg की लाइब्रेरी उपज को लक्षित करते हुए अनुशंसित चक्र संख्याओं को सूचीबद्ध करता है।
तालिका 3 उत्पन्न करने के लिए अनुशंसित चक्रों की संख्या 1,000 एनजी लाइब्रेरी उपज
| इनपुट डीएनए | 1 μg लाइब्रेरी उपज उत्पन्न करने के लिए आवश्यक चक्रों की संख्या |
| 1000 एनजी | 2 - 4 |
| 500 एनजी | 2 - 4 |
| 250 एनजी | 4 - 6 |
| 100 एनजी | 5 - 7 |
| 50 एनजी | 7 - 9 |
| 1 एनजी | 12 - 14 |
टिप्पणी:
1.तालिका 3 लगभग 200 बीपी के उच्च गुणवत्ता वाले इनपुट डीएनए परीक्षणों का उपयोग करके लूप मापदंडों की संख्या को दर्शाता है। एफएफपीई डीएनए गुणवत्ता बहुत भिन्न होती है, और जब डीएनए गुणवत्ता खराब होती है या लाइब्रेरी की लंबाई लंबी होती है, तो पर्याप्त लाइब्रेरी प्राप्त करने के लिए चक्रों की संख्या को उचित रूप से बढ़ाने की आवश्यकता होती है।
2.मैंयदि पुस्तकालय निर्माण प्रक्रिया के दौरान आकार का चयन आवश्यक हो, तो पुस्तकालय प्रवर्धन के लिए उच्च चक्र संख्या की सिफारिश की जाती है; अन्यथा, कम चक्र संख्या की सिफारिश की जाती है।
3.मैंयदि अपूर्ण एडाप्टर का उपयोग किया जाता है, तो पूर्ण एडाप्टर बनाने के लिए कम से कम 2 चक्रों को प्रवर्धित करने की आवश्यकता होती है।
6. पुस्तकालय गुणवत्ता विश्लेषण
1. निर्मित पुस्तकालयों की गुणवत्ता का विश्लेषण आम तौर पर सांद्रता और आकार वितरण को मापकर किया जाता है।
2. लाइब्रेरी की सांद्रता को फ्लोरोसेंट-आधारित विधियों जैसे कि क्यूबिट और पिकोग्रीन या qPCR द्वारा मापा जा सकता है।
3. नैनोड्रॉप जैसे अवशोषण-आधारित परिमाणीकरण विधियों का उपयोग करना अनुशंसित नहीं है।
4. लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के लिए qPCR विधि का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है: क्यूबिट और पिकोग्रीन जैसी फ्लोरोसेंट-आधारित विधियाँ अपूर्ण dsDNA संरचनाओं (एडेप्टर के बिना या केवल एक छोर को एडॉप्टर से लिगेट किए गए इंसर्ट) को पूर्ण लाइब्रेरी से अलग नहीं कर सकती हैं। qPCR विधि केवल उन पूर्ण लाइब्रेरी को बढ़ाएगी और मापेगी जिनके दोनों छोर एडॉप्टर (सीक्वेंसेबल लाइब्रेरी) से लिगेट किए गए हैं, इस प्रकार लोडिंग के लिए अधिक सटीक माप प्रदान करती है।
5. लाइब्रेरी के आकार वितरण का विश्लेषण एजिलेंट बायोएनालाइजर या केशिका वैद्युतकणसंचलन या माइक्रोफ्लुइडिक्स के सिद्धांतों पर आधारित अन्य उपकरणों का उपयोग करके किया जा सकता है।
7. अन्य सामग्री
1. डीएनए शुद्धिकरण चुंबकीय मोती: हाईफ़ एनजीएसटीएम डीएनए चयन मोती (येसेन कैट#12601) या AMPure® एक्सपी बीड्स (A63880) या अन्य समकक्ष उत्पाद।
2. एडाप्टर: इल्युमिना के लिए पूर्ण एडाप्टर: येसेन कैट#13519-13520; 384 डुअल सीडीआई प्राइमर्स: येसेन बिल्ली#12412~बिल्ली#12413; 384 अद्वितीय दोहरे सूचकांक (यूडीआई) प्राइमर्स: येसेन बिल्ली#12327~बिल्ली#13330; यूएमआई यूडीआई एडाप्टर: येसेन कैट#13370~कैट#13371; MGI के लिए पूरा एडाप्टर: येसेन कैट#13360-13362. डीएनए प्राइमर मिक्स:बिल्ली#12190 या बिल्ली#12191.
3. लाइब्रेरी गुणवत्ता विश्लेषण: एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर डीएनए 1000 चिप/ उच्च संवेदनशीलता चिप या अन्य समतुल्य उत्पाद; लाइब्रेरी मात्रात्मक अभिकर्मक।
4. अन्य सामग्रियां: पूर्ण इथेनॉल, स्टेराइल अल्ट्राशुद्ध जल, कम प्रतिधारण पिपेट टिप्स, पीसीआर ट्यूब, चुंबकीय स्टैंड, थर्मल साइक्लर, आदि।
8. कार्यप्रवाह
चित्र 1.का कार्यप्रवाह वनपॉट प्रो डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट
भुगतान और सुरक्षा
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जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।