विवरण
हाईएफ़™ बहुमुखी प्रतिभा T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase का एक प्रकार है। यह एंजाइम कोसिव या ब्लंट-एंडेड अणुओं के बीच बंधन प्रतिक्रिया को उत्प्रेरित करने के लिए उपयुक्त है। यह एक एकल-एंजाइम उत्पाद है जिसे अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (NGS) में लाइब्रेरी तैयारी प्रक्रिया के दौरान DNA टुकड़ों और एडेप्टर को जोड़ने के लिए डिज़ाइन किया गया है। हाईफ़® बहुमुखी प्रतिभा वाले टी4 डीएनए लाइगेस को उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण के माध्यम से व्यापक रूप से मान्य किया गया है और यह असाधारण गुणवत्ता प्रदर्शित करता है।
विशेषता
- उच्च निष्ठा
- ताप सहनशील
बहुमुखी T4 डीएनए लाइगेज विकास के बारे में अधिक जानें
विशेष विवरण
| स्रोत | पुनः संयोजक ई.कोली |
| भंडारण बफर | 50 मिमी ट्रिस-एचसी1,100 एमएम केसी1,0.1 एमएम EDTA,1 एमएम डीटीटी,50%ग्लिसरोल,pH 7.5士0.2 @25℃ |
| इकाई परिभाषा | 20 μL की एक बंधन प्रतिक्रिया प्रणाली में, 50% से अधिक डीएनए खंडों के बंधन को उत्प्रेरित करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा, जब 6 μg λDNA-Hind III को 30 मिनट के लिए 16°C पर प्रतिक्रिया दी जाती है, को 1 इकाई गतिविधि (U) के रूप में परिभाषित किया जाता है। |
अवयव
| अवयव | नाम | 12996ES60 60केयू | 12996ES62 600केयू |
| 12996-ए | हाईएफ़® बहुमुखी T4 डीएनए लाइगेस (600 U/µL) | 100 μएल | 1000 μएल |
| 12996-बी | 10×T4 डीएनए लाइगेस बफर | 500 μएल | 3×1500 μL |
भंडारण
इस उत्पाद को 2 दिनों के लिए -25~-15℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए साल।
आकृति
कृपया इस एंजाइम और अन्य शीर्ष स्तरीय थर्मोस्टेबल और पारंपरिक T4 डीएनए लाइगेज के बीच प्रदर्शन तुलना डेटा के बारे में पूछताछ करने के लिए एक संदेश छोड़ें।
नोट्स
1. कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें，आपकी सुरक्षा के लिए.
2. यदि बफर में थोड़ी मात्रा में अवक्षेपण होता है, तो यह एक सामान्य घटना है। कृपया बफर को उपयोग करने से पहले उसे पलट दें और अच्छी तरह से मिला लें।
3. यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
शिष्टाचार
1. लिगेशन-आधारित विधि का उपयोग करने वाली वर्तमान मुख्यधारा डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट में आमतौर पर अंत की मरम्मत और ए-टेलिंग के बाद शुद्धिकरण चरणों की आवश्यकता नहीं होती है। डीएनए के टुकड़ों को शुद्धिकरण के बिना सीधे एडेप्टर लिगेशन के अधीन किया जाता है। यह किट मुख्यधारा के साथ संगत है निर्बाध एडाप्टर बंधाव के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध अंत मरम्मत और ए-टेलिंग सिस्टम।
बर्फ पर एक माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में निम्नलिखित प्रतिक्रिया स्थापित करें, धीरे से पाइपिंग या हिलाकर मिलाएं, थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और 15 मिनट के लिए 20 डिग्री सेल्सियस पर निष्क्रिय करें।
तालिका 1. एडेप्टर लिगेशन के लिए प्रतिक्रिया प्रणाली
| अवयव | आयतन（μएल） | अंतिम सांद्रता |
| डीए-टेल्ड डीएनए | 60 | 1× |
| 10×T4 डीएनए लाइगेस बफर | 10 | 0.1 μM-0.5 माइक्रोन |
| 50% पीईजी6000 | 12* | 1 एनजी -400 एनजी |
| डीएनए एडाप्टर | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| न्यूक्लिऐस मुक्त जल | ऊपर 100 तक | - |
【टिप्पणी】* किट में 50% PEG6000 घोल उपलब्ध नहीं कराया गया है, आपको इसे स्वयं तैयार करना होगा
**कृपया तालिका देखें 2 के लिए एडाप्टर की राशि.
***T4 DNA लाइगेस की मात्रा आवश्यकतानुसार 3-5 μL तक जोड़ी जा सकती है।
2. एडाप्टर की सांद्रता सीधे लिगेशन दक्षता और लाइब्रेरी उपज को प्रभावित करती है। एडाप्टर के अत्यधिक उपयोग के परिणामस्वरूप हो सकता है में अधिक एडाप्टर डिमर्स, जबकि कम उपयोग कनेक्शन दक्षता और लाइब्रेरी उत्पादन को प्रभावित कर सकता है। तालिका 2 इनपुट डीएनए की विभिन्न मात्राओं के लिए अनुशंसित एडाप्टर राशि को सूचीबद्ध करता है।
तालिका 2. 100 pg-1 μg इनपुट डीएनए के लिए अनुशंसित एडाप्टर मात्रा
| इनपुट डीएनए | एकाग्रता |
| 0.1 एनजी | |
| 1 एनजी | 0.5 माइक्रोएम |
| 10 एनजी | 1 माइक्रोएम |
| 25 एनजी | 2 माइक्रोएम |
| 100 एनजी~1000 एनजी | 10 माइक्रोएम |
【टिप्पणी】：एडाप्टर की मात्रा उपरोक्त तालिका में दी गई आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
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उपवास
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कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
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