हाईफेयर™ वी मल्टीप्लेक्स वन स्टेप आरटी-क्यूपीसीआर जांच किट (यूडीजी प्लस) एक मल्टीप्लेक्स क्वांटिटेटिव पीसीआर किट है जो टेम्पलेट के रूप में आरएनए पर आधारित है। प्रयोग की प्रक्रिया में, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और क्वांटिटेटिव पीसीआर को एक ही ट्यूब में किया गया, जिससे प्रायोगिक संचालन सरल हो गया और संदूषण का जोखिम कम हो गया।

इस किट में, पहले स्ट्रैंड cDNA को गर्मी प्रतिरोधी हाईफेयर द्वारा कुशलतापूर्वक संश्लेषित किया गया था^टीएम वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और UNICON द्वारा मात्रात्मक रूप से प्रवर्धित^टीएम हॉटस्टार्ट टैक डीएनए पॉलीमरेज़। किट में मुख्य रूप से अनुकूलित एमपी बफर, एंजाइम मिक्स आदि शामिल हैं। बफर समाधान में पहले से ही Mg शामिल है²⁺ और dNTP। इसके अलावा, ऐसे कारक जो गैर-विशिष्ट पीसीआर प्रवर्धन को प्रभावी ढंग से रोक सकते हैं और कई qPCR प्रतिक्रियाओं की प्रवर्धन दक्षता में सुधार कर सकते हैं, जो प्रवर्धन दक्षता सुनिश्चित कर सकते हैं और कई प्रवर्धन प्रतिक्रिया तक ले जा सकते हैं। एयरोसोल संदूषण के जोखिम को प्रभावी ढंग से रोकने के लिए dUTP/UDG प्रणाली को जोड़ा गया था।

विशेषताएँ

उच्च संवेदनशीलता:सावधानीपूर्वक अनुकूलित बफर प्रणाली 250 प्रतियों/एमएल तक कम सांद्रता वाले टेम्पलेट्स की पहचान संवेदनशीलता में सुधार करती है;

सुपर स्थिरता: उत्पाद ने 18 महीने के वास्तविक समय स्थिरता परीक्षण को पारित कर दिया है।

डीयूपी/यूडीजी प्रदूषण विरोधी प्रणाली:डीयूटीपी/यूडीजी प्रदूषण रोधी प्रणाली को उत्पादों के एरोसोल प्रदूषण को कुशलतापूर्वक कम करने, झूठे सकारात्मक परिणामों को कम करने और प्रामाणिक परिणाम सुनिश्चित करने के लिए पेश किया गया है;

फास्ट प्रोग्राम का समर्थन: फास्ट प्रोग्राम के साथ संगत, 40min परिणाम उत्पन्न कर सकते हैं;

अवयव

टिप्पणी: 1) 2×हाईफेयर^टीएम वी एमपी बफर का संक्षिप्त रूप है हाईफेयर^टीएम वी मल्टीप्लेक्स वन स्टेप आरटी-क्यूपीसीआर जांच बफर, जिसमें dNTPs, dUTP, Mg शामिल हैं2+, स्टेबलाइजर्स, एन्हांसर, और अधिक।

2) हाईफेयर^टीएम वी एंजाइम मिक्स मुख्य रूप से शामिल है गर्मी प्रतिरोधी हाईफेयर^टीएम वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, यूनिकॉनटीएम हॉटस्टार्ट टैक डीएनए पॉलीमेरा और यूडीजीसे.

भंडारण

टीवह उत्पाद चाहिए होना संग्रहित पर -25° सेल्सियस~-15° सेल्सियस के लिए 18 महीने.

निर्देश

प्रतिक्रिया संरचना

टिप्पणी:उपयोग से पहले अच्छी तरह मिश्रण तैयार कर लें, तथा तीव्र कंपन के कारण उत्पन्न अत्यधिक बुलबुले से बचें।

क) प्राइमर/जांच एकाग्रता: भजन की पुस्तक मल्टीप्लेक्स प्राइमर सहित मिश्रण, स्थिति के आधार पर इष्टतम प्राइमर सांद्रता 0.1 और 1.0 μM के बीच हो सकती है।मल्टीप्लेक्स जांच लेबलिंग अंतर फ्लोरोसेंट समूह सहित जांच मिश्रण, स्थिति के आधार पर इष्टतम जांच एकाग्रता 0.05 और 0 के बीच हो सकती है।5 μएम.

सी) टेम्पलेट कमजोरीकरण: क्यूपीसीआर अत्यधिक संवेदनशील है और टेम्पलेट को पतला करने की सिफारिश की जाती है। नियंत्रण सीटी मान 20 और 35 के बीच उपयुक्त है।

डी) सिस्टम की तैयारी: फ़िल्टर तत्व के साथ अनहेड करें। क्रॉस संदूषण और एरोसोल संदूषण से बचें।

अनुकूलित साइक्लिंग प्रोटोकॉल

टिप्पणी:ए) आरएवर्स ट्रांस्क्रिप्शन: तापमान 42 का चयन किया जा सकता हैडिग्री सेल्सियस या 50डिग्री सेल्सियस 10-15 मिनट के लिए.

बी) प्रवर्धन प्रतिक्रिया: तापमान को डिज़ाइन किए गए प्राइमरों के Tm मान के अनुसार समायोजित किया जाता है।

सी) प्रतिदीप्ति संकेत अधिग्रहणकृपया उपकरण मैनुअल की आवश्यकताओं के अनुसार प्रयोगात्मक प्रक्रिया निर्धारित करें।

3. आवेदन उपकरण

रॉक्स के साथ उपकरण:एबीआई 5700, 7000, 7300, 7700, 7900एचटी फास्ट, स्टेपवन™, स्टेपवन प्लस™

कम रॉक्स वाले उपकरण:एबीआई 7500, 7500 फास्ट, वीआईए™7, क्वांटस्टूडियो™ 3 और 5, क्वांटस्टूडियो™ 6,7,12k फ्लेक्स

स्ट्रैटेजेन MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

रॉक्स के बिना उपकरण:

बायो-राडी सीएफएक्स96™, सीएफएक्स384™, आईसाइक्लर आईक्यू™, आईक्यू™5, माईआईक्यू™, मिनीऑप्टिकॉन™, ऑप्टिकॉन®, ऑप्टिकॉन® 2, क्रोमो4™

एप्पेनडॉर्फ़ मास्टरसाइक्लर® ईपी रियलप्लेक्स, रियलप्लेक्स 2 एस; Qiagen कॉर्बेट रोटर-जीन® क्यू, रोटर-जीन® 3000, रोटर-जीन® 6000

रोश एप्लाइड साइंस लाइटसाइक्लर® 480, लाइटसाइक्लर® 2.0, लाइटसाइक्लर® 96

थर्मामीटरों वैज्ञानिक पिकोरियल साइक्लर; सेफीड स्मार्टसाइक्लर®; Illumina इको क्यूपीसीआर

नोट्स

कृपया अपने स्वास्थ्य और सुरक्षा को सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक PPE, जैसे लैब कोट और दस्ताने पहनें।!

कृपया RNasefree उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करें के लिए प्रयोग.

संवेदनशीलता परीक्षण

18 महीने तक -20°C पर संग्रहीत 13650 (प्रायोगिक समूह) और शेल्फ़ लाइफ़ (नियंत्रण समूह) के भीतर के लोगों को एक साथ छद्म वायरस SARS-CoV-2 के ग्रेडिएंट कमजोर पड़ने (500 प्रतियाँ/एमएल, 250 प्रतियाँ/एमएल) के लिए परीक्षण किया गया, जिसमें ORF जीन और N जीन को लक्षित किया गया। प्रत्येक सांद्रता के लिए आठ प्रतिकृति कुओं का परीक्षण किया गया, जिसमें 100% की पहचान दर थी। इसके अलावा, प्रवर्धन वक्र शिखर आकृतियों और Ct मानों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे।

वास्तविक समय स्थिरता परीक्षण

13650 को -20°C पर 18 महीने तक संग्रहीत किया गया और जो अपनी शेल्फ लाइफ के भीतर थे। दोनों समूहों का SARS-CoV-2 स्यूडोवायरस ORF जीन और N जीन के लिए 20 प्रतिकृति कुओं के साथ 1000 प्रतियों/एमएल की सांद्रता पर एक साथ परीक्षण किया गया। दोनों के लिए पता लगाने की दर 100% थी, और प्रवर्धन वक्रों या सीटी मानों के आकार में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे।

चित्र 1. आरसंपादित: 13650 उनके शेल्फ जीवन के भीतर;नीला:13650 को -20°C पर 18 महीने तक संग्रहीत किया गया。

बार-बार जमने-पिघलने के चक्र के बाद भी स्थिर प्रदर्शन

13650 अभिकर्मक को शुष्क बर्फ का उपयोग करके 30 और 50 फ्रीज-थॉ चक्रों के अधीन करने पर, सामान्य रूप से -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत अभिकर्मकों के साथ, और साथ ही साथ SARS-CoV-2 स्यूडोवायरस ORF जीन के लिए परीक्षण करने पर, परिणामों ने संकेत दिया कि 50 फ्रीज-थॉ चक्रों के बाद 13650 अभिकर्मक का प्रदर्शन अप्रभावित था।

चित्र 2. लाल: 13650 सामान्य रूप से -20°C पर संग्रहीत; बैंगनी:13650 से 30 फ्रीज-थॉ चक्र;हरा:13650 से 50 फ्रीज-पिघलाना चक्र।

मानक और तीव्र प्रोटोकॉल के साथ संगत

13650ES का उपयोग करते हुए, SARS-CoV-2 स्यूडोवायरस के ORF जीन और N जीन का पता मानक और त्वरित प्रोटोकॉल दोनों के साथ एक ही प्रतिक्रिया प्रणाली के तहत लगाया गया। परिणामों से पता चला कि 4-प्लेक्स प्रणाली के तहत, दो प्रोटोकॉल के बीच प्रवर्धन वक्र शिखर आकृतियों और Ct मानों में कोई अंतर नहीं था।

दस्तावेज़:

नियमावली