विवरण
ArCas12a, CRISPR प्रणाली से व्युत्पन्न एगाथोबैक्टर रेक्टेलिस बैक्टीरिया और जिसे Cpf1 के नाम से भी जाना जाता है, एक मोनोमेरिक प्रोटीन है जिसमें 1263 एमिनो एसिड होते हैं। CRISPR/Cas सिस्टम के क्लास II (टाइप V) सदस्य के रूप में, ArCas12a केवल एक एकल प्रभावकारक प्रोटीन के माध्यम से कार्य करता है और Cas9 से महत्वपूर्ण अंतर प्रदर्शित करता है, जैसे कि T से भरपूर मोटिफ को लक्षित करना, ट्रांस-एक्टिवेटिंग crRNA की आवश्यकता नहीं होना, DNA डबल-स्ट्रैंड ब्रेक पर चिपचिपे सिरे बनाना, RNA प्रोसेसिंग में भाग लेना और DNA न्यूक्लिऐस गतिविधि रखना।
ArCas12a में HNH डोमेन नहीं होता है और यह स्वतंत्र रूप से अपने RuvC डोमेन का उपयोग करके CRISPR RNA (crRNA) के मार्गदर्शन में लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड के 5' छोर पर थाइमिन (T) से भरपूर PAM क्षेत्र को पहचान सकता है, जिससे लक्ष्य DNA का विभाजन शुरू होता है। इसका उपयोग कई स्तनधारियों और पौधों में जीनोम संपादन के लिए सफलतापूर्वक किया गया है। इसके अतिरिक्त, ArCas12a ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि प्रदर्शित करता है, जो प्रतिक्रिया प्रणाली में गैर-लक्ष्य एकल-स्ट्रैंडेड DNA (ssDNA) को अंधाधुंध रूप से काटने में सक्षम है।
अन्य LbCas12a/AsCas12a की तुलना में, ArCas12a उच्च तापमान अनुकूलनशीलता प्रदर्शित करता है (25-55हेसी), जो इसे जीनोम संपादन और न्यूक्लिक एसिड पहचान अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त बनाता है।
विशेषताएँ
व्यापक प्रतिक्रिया तापमान रेंज: 25-55 के तापमान रेंज में दरार गतिविधि प्रदर्शित करता हैहेसी
कम न्यूक्लिऐस अवशेष: कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐस, निकेज या आरएनेज नहीं
सिस-क्लीवेज गतिविधि: इन विट्रो में डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए का अत्यधिक प्रभावी विभाजन
ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि: उच्च ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि, न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए उपयुक्त
अनुप्रयोग
CRISPR/Cas जीन संपादन
CRISPR/Cas प्रणाली पर आधारित निदान और पता लगाना
आइसोथर्मल न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकियों (RPA और LAMP) आदि के साथ संयुक्त अन्य पता लगाने के अनुप्रयोग
विशेष विवरण
| स्रोत | Cpf1 जीन एगाथोबैक्टर रेक्टेलिस पुनः संयोजक अभिव्यक्ति के माध्यम से व्यक्त किया जाता है ई कोलाई |
| आणविक वजन | 149 केडीए |
| पीएएम अनुक्रम | टीटीटीएन या टीटीटीवी |
| प्रतिक्रिया की स्थितियाँ | 50 मिमी NaCl, 10 मिमी ट्रिस-एचसीएल, 10 मिमी MgCl2, पीएच 7.9 @25हेसी |
| एकाग्रता | 10 µएम |
| पवित्रता | >95% (एसडीएस-पृष्ठ) |
| निष्क्रियता की स्थितियाँ | 85हेसी, 5-10 मिनट |
अवयव
| अवयव नहीं। | नाम | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-ए | ArCas12a न्यूक्लिऐस (10 μएम) | 100 μएल | |
| 14702-बी | 10×ArCas12a प्रतिक्रिया बफर | 1 एमएल | 1 एमएल |
शिपिंग और भंडारण
इस उत्पाद को -25 ~ -15 पर संग्रहित किया जाना चाहिएहेसी दो वर्षों के लिए।
आंकड़ों
आकृति 1. ArCas12a सीस-क्लीवेज गतिविधि का परीक्षण: M: मार्कर; C: टेम्पलेट डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए (dsDNA)
टिप्पणी: सीआरआरएनए के मार्गदर्शन में, यह डीएसडीएनए (600 बीपी) को कुशलतापूर्वक विभाजित कर दो टुकड़े (200 बीपी + 400 बीपी) उत्पन्न कर सकता है।
आकृति 2. ArCas12a ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि परीक्षण के परिणाम
टिप्पणी: डीएसडीएनए को लक्ष्य के रूप में उपयोग करते हुए, आर्कास12ए, सीआरआरएनए, और एक एसएसडीएनए रिपोर्टर जांच (एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर समूह युक्त) को इन विट्रो क्लीवेज के लिए जोड़ा गया। एक बार जब आर्कास12ए सीआरआरएनए और लक्ष्य डीएनए के साथ एक जटिल बनाता है, तो यह ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि को सक्रिय करता है, एसएसडीएनए रिपोर्टर जांच को काटता है, जिससे फ्लोरोसेंस निकलता है।
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