विवरण
चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट है उपयुक्त के लिए pretreatment का अवशिष्ट डीएनए में विभिन्न जैविक नमूने। यह अद्वितीय चुंबकीय मोतियों और सावधानीपूर्वक उपयोग करके नमूनों में मेजबान सेल अवशिष्ट डीएनए की ट्रेस मात्रा के पृथक्करण और शुद्धिकरण को अधिकतम कर सकता है अनुकूलित बफर प्रणाली.
चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट विभिन्न प्रकार के मेजबान कोशिका अवशिष्ट डीएनए के साथ उपयोग किया जा सकता है डिटेक्शन किट, जिसमें CHO होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट शामिल है (कैट#41301ES), HEK293 होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (कैट#41302ES), वेरो होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (कैट#41303ES), और ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (कैट#41304ES).
उत्पाद घटक
| वर्ग | अवयव नहीं। | अवयव नाम | बिल्ली#/आकार | |
| 18461ES25 (25टी) | 18461ES60 (100टी) | |||
| भाग I | 18461-ए | प्रोटीनेज़ K (20 मिग्रा/एमएल) | 0.5 एमएल/शीशी x1 शीशी | 1 एमएल/शीशी x2 शीशी |
| भाग 2 | 18461-बी | चुंबकीय कण | 0.5 एमएल/शीशी x1 शीशी | 1 एमएल/शीशी x2 शीशी |
| 18461-सी | लिसेस बफ़र | 2.5 एमएल/शीशी x1 शीशी | 10 एमएल/शीशी x1 शीशी | |
| 18461-डी | बाइंडिंग समाधान | 10mL/शीशी x1 शीशी | 40 एमएल/शीशी x1 शीशी | |
| 18461-ई | वॉश बफर A* | 6 एमएल/शीशी x1 शीशी (उपयोग करने से पहले 9 एमएल इथेनॉल मिलाएं) | 24mL/शीशी x1 शीशी (उपयोग से पहले 36 एमएल इथेनॉल मिलाएं) | |
| 18461-एफ | वॉश बफर बी* | 3 एमएल/शीशी x1 शीशी (उपयोग करने से पहले 12 एमएल इथेनॉल मिलाएं) | 12mL/शीशी x1 शीशी (उपयोग से पहले 48 एमएल इथेनॉल मिलाएं) | |
| 18461-जी | एल्यूशन बफर | 2.5 एमएल/शीशी x1 शीशी | 10 एमएल/शीशी x1 शीशी | |
| भाग 2 | 18461-एच | ग्लाइकोजन | 225 μL/शीशी x1 शीशी | 900 μL/शीशी x1 शीशी |
| 18461-आई | पॉली(ए) पोटेशियम नमक | 150 μL/शीशी x1 शीशी | 600 μL/शीशी x1 शीशी | |
शिपिंग और भंडारण
1. भाग I को बर्फ के पैक के साथ भेजा जाता है, 1 वर्ष के लिए 4°C या दीर्घकालिक भंडारण के लिए -20°C.
2. भाग II को कमरे के तापमान पर भेजा जाता है और कमरे के तापमान पर 1 वर्ष तक संग्रहीत किया जाता है।
3. भाग III को सूखी बर्फ पर भेजा जाता है और -20°C पर संग्रहीत किया जाता है 1 वर्ष के लिए।
4. माल प्राप्त करने के बाद, कृपया जांच लें कि क्या भाग I, भाग II और भाग III के तीन घटक पूरे हैं, और उन्हें तुरंत संबंधित भंडारण तापमान में स्टोर करें।
चेतावनी
1. कृपया उपयोग करने से पहले निर्देश पुस्तिका को ध्यान से पढ़ें, और निर्देश पुस्तिका के अनुसार सख्ती से काम करें। नमूना प्रसंस्करण को एक साफ बेंच या जैविक सुरक्षा कैबिनेट पर करने की सिफारिश की जाती है।
2. ध्यान दें कि कमरे के तापमान पर संग्रहीत घोल में अवक्षेपण या गंदलापन तो नहीं है (विशेषकर जब कमरे का तापमान कम हो जैसे कि सर्दियों में), आप उपयोग प्रभाव को प्रभावित होने से बचाने के लिए घोल के साफ होने तक 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी में स्नान कर सकते हैं।
3. निक्षालन के दौरान अवशिष्ट चुम्बकीय मोती रह सकते हैं, इसलिए नमूने लेते समय चुम्बकीय मोतियों को चूसने से बचें।
4. इस उत्पाद के साथ काम करते समय क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए कृपया टिप्स को बार-बार बदलें।
5. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया इस उत्पाद के साथ काम करते समय व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पहनें, जैसे प्रयोगशाला कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने।
6. यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है!
पूर्व-तैयारी
1. स्वयं-प्रदत्त उपकरण: भंवर शेकर, जल स्नान या धातु स्नान, अपकेंद्रित्र, चुंबकीय पृथक्करण रैक, हांग्जो एओशेंग ऑटो-प्योर 32 ए स्वचालित न्यूक्लिक एसिड एक्सट्रैक्टर या पूरी तरह से स्वचालित न्यूक्लिक एसिड एक्सट्रैक्टर के अन्य ब्रांड।
2. स्वयं-प्रदत्त उपभोग्य सामग्री: 10μL-1000μL कम अवशोषण फिल्टर टिप्स, 1.5 एमएल कम अवशोषण सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पीसीआर ट्यूब या 96-वेल प्लेट और संबंधित ट्यूब कैप या झिल्ली।
3. स्वयं तैयार अभिकर्मक: पूर्ण इथेनॉल (विश्लेषणात्मक ग्रेड), 1×PBS बफर (pH 7.4, Mg और Ca आयनों से मुक्त), अतिशुद्ध जल।
4. पहले प्रयोग के लिए, वाशिंग सोल्यूशन A* और वाशिंग सोल्यूशन B* की बोतलों में लेबल पर या निर्देशों में दर्शाई गई मात्रा के अनुसार निर्जल इथेनॉल मिलाएं। उपयोग से पहले अच्छी तरह से मिला लें, और उन पर अच्छे से निशान लगा दें। बोतल में इथेनॉल का स्तर बनाए रखने के लिए उपयोग के बाद बोतल को कसकर बंद कर दें।
मैनुअल अवशिष्ट डीएनए निष्कर्षण
1. नमूना प्रसंस्करण
1.1 यदि नमूने में अपेक्षाकृत उच्च डीएनए सामग्री है, जैसे कि टीका, तो कृपया इसे 1×पीबीएस बफर (पीएच 7.4, Mg और Ca आयनों से मुक्त) और फिर निकालें (नमूने का कमजोरीकरण पता लगाने के मूल्य को मानक वक्र की रैखिक सीमा के भीतर बनाने के लिए है और फिर पता लगाने की सटीकता सुनिश्चित करता है। और आमतौर पर 100 गुना कमजोरीकरण पर विचार किया जा सकता है)।
1.2 यदि परीक्षण किया जाने वाला नमूना यह एक सूखा पाउडर है, इसे पतला करें 10 मिलीग्राम/एमएल या 100 मिलीग्राम/एमएल के साथ अतिशुद्ध जल उपयोग से पहले.
1.3 यदि नमूने में जटिल मैट्रिक्स है, तो उचित कमजोरीकरण निर्धारित करने के लिए एक मानक जोड़ और पुनर्प्राप्ति प्रयोग किया जाना चाहिए।
2. 1.5 एमएल ट्यूब में 100 μL नमूना डालें, फिर 100 μL लाइसिस बफर, 10 μL प्रोटीनेज़ K, वोर्टेक्स डालें और 10 सेकंड के लिए मिलाएँ।
[नोट्स]: यदि प्रोटीन नमूने की सांद्रता 0-100 mg/mL है तो 10 μL प्रोटीनेज़ K मिलाएं, और यदि प्रोटीन नमूने की सांद्रता 100-200 mg/mL है तो 20 μL प्रोटीनेज़ K मिलाएं।
3. 60°C पर इनक्यूबेट करें 20 मिनट के लिए.
4. फिर जोड़ें 400 μएल बाइंडिंग सॉल्यूशन का 9 μL, ग्लाइकोजन, और पॉली ए पोटेशियम नमक का 6 μL, और भंवर और अच्छी तरह से मिलाएं।
5. 20 μL चुंबकीय मोती डालें, भंवर करें और अच्छी तरह से मिलाएं, और 10 मिनट तक खड़े रहने दें। कृपया इसे 10 सेकंड के लिए भंवर करें और मिलाएं हर 3 मिनट में.
[नोट्स]: चुंबकीय मोतियों को उपयोग से पहले भंवर में घुमाना आवश्यक है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि चुंबकीय मोती पूरी तरह से फिर से लटके हुए हैं। एक बार में 4-5 बार नमूने डालने के बाद, फिर से मिश्रण करने की सिफारिश की जाती है।
7. घोल को नीचे लाने के लिए थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और सेंट्रीफ्यूज ट्यूब को चुंबकीय रैक पर 1-2 मिनट के लिए रखें। चुंबकीय मोती पूरी तरह से अवशोषित होने के बाद, तरल को सावधानीपूर्वक हटा दें।
8. 500 μL वॉशिंग सॉल्यूशन A मिलाएं (कृपया जांच लें कि उपयोग करने से पहले पूर्ण इथेनॉल मिलाया गया है या नहीं), हिलाएँ या घुमाकर मिलाएँ ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि चुंबकीय मोती बिखर गए हैं और सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की दीवार पर कोई चुंबकीय मोती एकत्रित नहीं है।
9. थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और सेंट्रीफ्यूज ट्यूब को 1-2 मिनट के लिए चुंबकीय रैक पर रखें। चुंबकीय मोती पूरी तरह से अवशोषित होने के बाद, तरल को सावधानीपूर्वक हटा दें।
10. 500 μL वॉशिंग सोल्यूशन बी मिलाएं (कृपया उपयोग से पहले जांच लें कि पूर्ण इथेनॉल मिलाया गया है या नहीं), यह सुनिश्चित करने के लिए कि चुंबकीय मोती बिखर गए हैं और अपकेंद्रित्र ट्यूब की दीवार पर कोई चुंबकीय मोती एकत्र नहीं हुआ है, मिश्रण को हिलाएं या भँवर में घुमाएं।
11। थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और सेंट्रीफ्यूज ट्यूब को 1-2 मिनट के लिए चुंबकीय रैक पर रखें। चुंबकीय मोती पूरी तरह से अवशोषित होने के बाद, तरल को सावधानीपूर्वक हटा दें।
12. यह सुनिश्चित करने के लिए कि अवशिष्ट तरल जितना संभव हो सके हटा दिया गया है, ट्यूब को 10 सेकंड के लिए सेंट्रीफ्यूज करें जल्दी से, इसे एक चुंबकीय रैक पर रखें, और अवशिष्ट तरल को चूसने के लिए 10 μL पिपेट का उपयोग करें।
13. ट्यूब का ढक्कन खोलें और इसे कमरे के तापमान पर 3 मिनट के लिए छोड़ दें जब तक इथेनॉल पूरी तरह से वाष्पित न हो जाए। चुंबकीय मोतियों की सतह पर कोई प्रतिबिंब या दरारें दिखाई नहीं देती हैं जो यह संकेत देती हैं कि इथेनॉल पूरी तरह से वाष्पित हो गया है।
14. ट्यूब को मैग्नेटिक स्टैंड से हटाएँ, 65°C पर पहले से गरम किया हुआ 50-100 μL एलुएट डालें, अच्छी तरह हिलाएँ और मिलाएँ। फिर थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, इसे 5 मिनट के लिए 65°C पर इनक्यूबेट करें, हर 2-3 मिनट में एक बार हिलाएँ और मिलाएँ।
15. फिर से कुछ देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, सेंट्रीफ्यूज ट्यूब को 2 मिनट के लिए चुंबकीय स्टैंड पर रखें। चुंबकीय मोतियों के पूरी तरह से सोख लिए जाने के बाद, डीएनए घोल को ध्यान से एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें और इसे -20 डिग्री सेल्सियस या लंबे समय तक भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
भुगतान और सुरक्षा
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उपवास
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कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
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