विवरण
किट एक शक्तिशाली लाइसिस बफर से सुसज्जित है, जो जीनोमिक डीएनए को रिलीज़ करने के लिए नमूनों (जैसे सेल, माउस टेल, माउस इयर, माउस टो, मांसपेशी, आदि) को जल्दी से लाइज़ कर सकता है, और लाइसेट को बिना शुद्धिकरण के सीधे पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में जोड़ा जा सकता है, जो ऑपरेशन के लिए सुविधाजनक है। इसके अलावा, इस किट को कम सैंपल इनपुट की आवश्यकता होती है, प्रयोगों के लिए 5 मिलीग्राम माउस टिशू या 1-5 मिमी माउस टेल का उपयोग किया जा सकता है।
अवयव
| घटक सं. | नाम | 19697ईएस50 | 19697ईएस70 |
| 19697-ए | बफर एमएल | 5 × 1 एमएल | 1 × 20 एमएल |
| 19697-बी | बफर एमटी | 0.6 एमएल | 2 × 1.25 एमएल |
भंडारण
19697-ए (लिसिस सॉल्यूशन) को कहाँ संग्रहित किया जाना चाहिए? 2~8℃ के लिए 1 साल। यदि कई बार उपयोग किया जाए तो क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए कृपया इसे अलग-अलग पैकेजों में रखें। 19687-बी (समाधान रोकें) पर संग्रहित किया जाना चाहिए -25~-16℃ के लिए 1 साल।
निर्देश
माउस जीनोमिक डीएनए रिलीज
- 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब* में 5-10 मिलीग्राम पशु ऊतक या 1-5 मिमी चूहे की पूंछ क्लिप करें।
- उपरोक्त अपकेंद्रित्र ट्यूब में 90 μL बफर एमएल डालें, नमूने में लाइसेट को पूरी तरह से घुसाने के लिए धीरे से घुमाएं, और थोड़ी देर के लिए अपकेंद्रित्र करें।
- थर्मोस्टेटिक इनक्यूबेटर** में 15 मिनट के लिए 95°C पर इनक्यूबेट करें।
- 10 μL बफर MT मिलाएं, मिश्रण करने के लिए झटका दें, और लिसिस समाप्त करें।
- वैकल्पिक चरण: 2 मिनट के लिए 12000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूजेशन।
- सुपरनेटेंट को एक नई सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें और 4°C या -20°C पर स्टोर करें या बाद में PCR प्रवर्धन के लिए सुपरनेटेंट को सीधे ले जाएं।
* ऊतक को जितना संभव हो सके उतना काटना चाहिए ताकि लिसिस प्रतिक्रिया अधिक सुचारू रूप से आगे बढ़ सके।
**95°C पर 15 मिनट तक ऊष्मायन आमतौर पर अधिकांश पीसीआर आवश्यकताओं के लिए पर्याप्त होता है। यदि डीएनए की अधिक मात्रा की आवश्यकता है या नमूने को नष्ट करना मुश्किल है, तो समय को 30 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है। ऊतक ब्लॉक को पूरी तरह से नष्ट करने की आवश्यकता नहीं है, और अवशेषों को बाद के सेंट्रीफ्यूजेशन चरण में हटाया जा सकता है।
सेल जीनोमिक डीएनए रिलीज
3 दिनों के लिए 48-वेल-प्लेट में ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं को कल्चर करने और लगभग 70,000 कोशिकाओं/वेल की सेल घनत्व तक पहुँचने के बाद, माध्यम को यथासंभव पूरी तरह से हटा दें। फिर प्रत्येक वेल में सीधे 90ul ML बफर डालें और प्रत्येक वेल को पिपेट करें। सभी को 96 वेल-पीसीआर प्लेट में स्थानांतरित करें। 5-15 मिनट के लिए 95 °C पर पीसीआर मशीन से उपचारित करने और ठंडा होने के बाद, 10ul MT बफर डालें और समान रूप से और अच्छी तरह से उड़ाएँ। हाई-फ़िडेलिटी एंजाइम (कैट # 10164) या टैक एंजाइम का उपयोग करके, पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली के प्रत्येक 50ul में 0.5-2ul सेल लाइसेट डालें और पीसीआर करें।
चित्र 1. प्रत्यक्ष पी.सी.आर. 19697 के साथ इलाज सेल लाइसेट.
नोट्स
- यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
- कृपया अपनी सुरक्षा के लिए चश्मे, लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें।
- नमूनों के बीच क्रॉस संदूषण से बचने के लिए, प्रत्येक नमूने के बाद नमूना उपकरण के किनारे या नमूने के सीधे संपर्क में आने वाले हिस्से को 2% सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल में डुबोना, इसे कई बार धोना और फिर दोबारा उपयोग करने से पहले अवशिष्ट तरल को साफ कागज के तौलिये से सुखाना आवश्यक है।परीक्षण की सुविधा के लिए, कई नमूनाकरण उपकरण तैयार किए जा सकते हैं और उपयोग के बाद उन्हें समान रूप से साफ किया जा सकता है, ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि प्रत्येक व्यक्तिगत नमूने का नमूना संदूषण-मुक्त नमूनाकरण उपकरण से लिया गया है।
- ताजा लिए गए पशु ऊतकों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। लंबे समय तक जमे हुए ऊतकों के मामले में, बार-बार जमने और पिघलने से जितना संभव हो सके बचना चाहिए, अन्यथा यह टेम्पलेट के क्षरण का कारण बनेगा और पीसीआर दक्षता को प्रभावित करेगा।
दस्तावेज़:
नियमावली
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