कॉनकैनावैलिन ए (ConA) मोती सुपरपैरामैग्नेटिक पॉलीमर माइक्रोस्फीयर हैं जिन्हें कॉनकैनावैलिन ए के साथ सहसंयोजक रूप से जोड़ा गया है (अनाज के पौधों के बीजों से अलग किया गया एक प्लांट मैनोज़/ग्लूकोज़-बाइंडिंग लेक्टिन) उनकी सतह पर। ये मोती कई का स्वामी होना मोनोडिस्पर्सिटी और मजबूत चुंबकीय प्रतिक्रियाशीलता सहित उल्लेखनीय विशेषताएं। जब सीए²⁺ और एमजी²⁺ आयनों की उपस्थिति में, ConA चुंबकीय मोती ConA ग्लोब्युलिन A और अंतिम α-D-मैनोज़ और α-D-ग्लूकोज़ समूहों के बीच के संबंध का उपयोग करके पॉलीसैकराइड, ग्लाइकोप्रोटीन और ग्लाइकोलिपिड जैसे विभिन्न जैव-अणुओं को कुशलतापूर्वक और तेजी से अलग और शुद्ध कर सकते हैं।

ConA चुंबकीय मोती कोशिकाओं को अलग करने या ठीक करने के लिए एक सुविधाजनक तरीका प्रदान करते हैं, जिससे बाद के धुलाई चरणों के दौरान न्यूनतम कोशिका हानि सुनिश्चित होती है। इसके अतिरिक्त, उन्हें नाभिक के संग्रह और निर्धारण के लिए नियोजित किया जा सकता है। इसके अलावा, इन मोतियों को CUT & Run और CUT & Tag जैसी नवीन तकनीकों में उपयोगिता मिलती है, जो ChIP-seq प्रयोगों में उपयोग किए जाने वाले क्रांतिकारी दृष्टिकोण हैं।

संक्षेप में, ConA चुंबकीय मोती जैव-अणुओं के कुशल शुद्धिकरण, सुविधाजनक कोशिका पृथक्करण और निर्धारण, नाभिकों के संग्रह, तथा अत्याधुनिक प्रयोगात्मक तकनीकों में अनुप्रयोग के लिए शक्तिशाली उपकरण हैं।

विशेष विवरण

विशेषताएँ

आंकड़े और तालिकाएं

तालिका 1. येसेन कॉनए बीड्स में उच्च कैप्चर दर है। CUT&Tag प्रयोगों में सेल बाइंडिंग के बाद चुंबकीय मोतियों के अत्यधिक एकत्रीकरण को रोकते हुए अधिकतम बंधन क्षमता सुनिश्चित करने के लिए माइक्रोस्फीयर के अनुपात में उपयोग की जाने वाली कॉनकैनावैलिन ए (कॉनए) की मात्रा को सत्यापित किया गया है। उदाहरण के लिए, 10 μL कॉनए-लेपित मोतियों का उपयोग करके E7 स्तरों के बराबर कोशिकाओं की मात्रा को बांधा जा सकता है, जिसकी बंधन दक्षता 98% से अधिक है।

चित्र 1. येसेन कॉनए बीड्स उच्च फैलाव दिखाते हैं। बीड लेबलिंग प्रक्रिया में, बैच-टू-बैच भिन्नताओं से प्रभावित हुए बिना कुशल बंद करने को सुनिश्चित करने के लिए एक गैर-जैविक सीलेंट चुना गया था। यह चुंबकीय बीड्स की उत्कृष्ट सीलिंग की गारंटी देता है, कॉनए-लेपित बीड्स के भंडारण के दौरान उनकी उच्च मोनोडिस्पर्सिटी को संरक्षित करता है, जो बाद के प्रयोगों में कार्बोहाइड्रेट अणुओं के लिए कुशल बंधन के लिए फायदेमंद है।

चित्र 2. येसेन कॉन ए बीड्स का उपयोग करके CUT&Tag क्रोमेटिन सिग्नल वितरण।

भंडारण

इस उत्पाद को 2 वर्षों तक 2~8℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए।

निर्देश

निम्नलिखित ऑपरेशन ग्लाइकोप्रोटीन के शुद्धिकरण या कोशिकाओं के पृथक्करण को एक उदाहरण के रूप में लेते हैं, कट&टैग प्रयोगों प्रोटोकॉल के लिए येसेन कैट# 12598ES देखें।

1. बफ़र्स की तैयारी

1）ग्राहक द्वारा आपूर्ति

1. आवश्यक सामग्री शामिल नहीं: चुंबकीय स्टैंड, एपेंडॉर्फ ट्यूब, पीसीआर ट्यूब, चुंबकीय स्टैंड, थर्मोसाइकिलर्स वगैरह।
2. संतुलन बनाएं मनका कमरे के तापमान पर कम से कम 30 मिनट के लिए रखें। बोतल को घुमाकर या हिलाकर मोतियों को अच्छी तरह से पुनः लटका दें।

1. नमूना हैंडलिंग（ स्तनधारी कोशिकाओं को उदाहरण के रूप में लें ）

1. स्तनधारी कोशिकाएं तैयार करें(1.0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ कोशिकाएं), सेंट्रीफ्यूज (4℃，600×g, 3~5 मिनट) और ध्यान से खारिज करना सतह पर तैरनेवाला.
2. 140 μL बाइंडिंग बफर जोड़ें, अच्छी तरह से मिलाएं और कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें, सेंट्रीफ्यूज करें और इकट्ठा करें (4 ℃, 600 × जी, 3 ~ 5 मिनट), ध्यान से खारिज करना सतह पर तैरनेवाला.
3. 90 μL बाइंडिंग बफर जोड़ें, अच्छी तरह से मिलाएं और कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें।
   सावधानी:ट्रिप्सिन जैसे एंजाइम का उपयोग करके आंशिक पाचन द्वारा कसकर चिपकी हुई स्तनधारी कोशिकाएँ प्राप्त की जा सकती हैं। पशु ऊतकों, पौधों की कोशिकाओं या कवक कोशिकाओं के लिए, फैली हुई कोशिकाओं या प्रोटोप्लास्ट को प्राप्त करने के लिए अक्सर उनकी विशिष्ट विशेषताओं के अनुरूप विशेष उपचार की आवश्यकता होती है।

1. ConA मोती तैयार करें

1. ConA मोतियों को पूरी तरह से निलंबित करने के लिए धीरे से पिपेट करें, 10 रखें μL मोतियों को एक नए 200 μL सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में निलंबित किया गया।
2. 40 μL बाइंडिंग बफर डालें, अच्छी तरह मिलाएं और चुंबकीय स्टैंड पर 1 मिनट तक रखें तथा चुंबकीय मोतियों के सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की साइड दीवार पर सोख लेने के बाद सुपरनेटेंट को हटा दें।
3. 10 μL बाइंडिंग बफर डालें, अच्छी तरह मिलाएं और ConA मोतियों को पुनः लटकाएं।

1. नमूना बाइंडिंग

1. तैयार कोशिका नमूने को पूर्व उपचारित मोतियों में डालें, पुनः निलंबित मोतियों को धीरे से पिपेट करें, फिर एक उल्टे मिक्सर (कमरे के तापमान 30 मिनट या 4℃ रात भर) पर इनक्यूबेट करें।
2. 1 मिनट के लिए चुंबकीय स्टैंड पर खड़े रहें, चुंबकीय मोतियों के सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की साइड दीवार पर सोखने की प्रतीक्षा करें, ध्यान से सतह पर तैरनेवाला त्यागें।
3. जोड़ना सेल-कॉनए बीड्स कॉम्प्लेक्स के लिए 500 μL इल्यूशन बफर और धीरे से पिपेट करें मोतियों को फिर से लटकाएं, फिर 1 मिनट के लिए चुंबकीय स्टैंड पर खड़े रहें, चुंबकीय मोतियों के सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की साइड दीवार पर सोखने की प्रतीक्षा करें, ध्यान से सतह पर तैरनेवाला त्यागें।
4. चरण 3) को तीन या चार बार और दोहराएं।

1. क्षालन

1. ग्लाइकोप्रोटीन के लिए, 50~250 μL इल्यूशन बफर डालें, धीरे से रिस्पेंडेड बीड्स को पिपेट करें, फिर एक उल्टे मिक्सर (कमरे के तापमान पर 10~30 मिनट के लिए) पर इनक्यूबेट करें। उल्टे मिक्स के बाद, 1 मिनट के लिए चुंबकीय स्टैंड पर रखें, SDS-PAGE या वेस्टर्न ब्लॉट को स्टेप करने के लिए सुपरनेटेंट को एक नई 1.5 mL ट्यूब में इकट्ठा करें।
2. सेल के लिए, निक्षालन की कोई आवश्यकता नहीं है।

नोट्स

1. संतुलन बनाएं कोना कमरे के तापमान पर मोती उपयोग से पहले.
2. ठंड से बचें, अन्यथा मनका सामग्री का क्षरण हो सकता है या गतिविधि की हानि हो सकती है।
3. ConA को सक्रिय होने के लिए Ca2+ और Mn2+ आयनों की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, इसलिए प्रयोग के दौरान EDTA या अन्य धातु आयन चिलेटर युक्त अभिकर्मकों से बचना चाहिए।
4. कोशिकाओं के साथ संवर्धित होने पर, ConA मोती एकत्रित हो सकते हैं, जो सामान्य है और चुंबकीय मोतियों के सामान्य उपयोग को प्रभावित नहीं करता है।
5. यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
6. कृपया अपनी सुरक्षा के लिए लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनकर काम करें।

नियमावली